本文關鍵詞：淋巴細胞活化基因3（lag3）表達調控機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：淋巴細胞活化基因3 (lymphocyte-activation gene 3, lag3),又稱CD223,是屬于免疫球蛋白超家族(immunoglobulin superfamily, IgSF)的細胞膜蛋白,其蛋白質結構與CD4分子非常相似,基因位置鄰近CD4。早期研究顯示,LAG3在人體內的表達局限于外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中的少數(shù)亞群上,如活化的T淋巴細胞和漿細胞樣樹突狀細胞等。研究表明LAG3對T細胞功能的調節(jié)有重要作用,且與多種疾病狀態(tài)下的免疫失調相關,但lag3基因表達調控的機制依然不明確。本文利用LAG3表達水平有差異的3個T細胞系(CEM, Jurkat E6-1, Jurkat ZM細胞系),對T細胞中l(wèi)ag3基因表達調控的部分機制進行了研究,并發(fā)現(xiàn)位于轉錄調控區(qū)中的CpG島岸(CpG island shore)的DNA甲基化將抑制lag3基因的轉錄。首先,我們從mRNA和蛋白水平對實驗室現(xiàn)有T細胞系的LAG3表達進行了檢測,發(fā)現(xiàn)3個細胞系中LAG3表達有差異且受到轉錄水平調控。通過比對人與老鼠的基因組序列,鑒定到lag3啟動子中存在兩個潛在的保守調控區(qū)CR.A和CRB (conserved region AB)。利用DNase I高敏感位點的分析方法,我們發(fā)現(xiàn)在LAG3+的Jurkat E6-1細胞亞群中,CRA和CRB對DNase I的處理敏感。將包含CRA和CRB的lag3基因轉錄起始位點(transcription start site, TSS)上游片段擴增并構建報告質粒p.basic,發(fā)現(xiàn)該區(qū)段具有較高啟動子活性。進一步,通過截斷啟動子發(fā)現(xiàn)CRB是該啟動子區(qū)段中的核心序列,同時發(fā)現(xiàn)CRB在LAG3表達水平極低的CEM和Jurkat ZM細胞中亦具有高啟動活性,提示我們這兩種細胞內源的LAG3表達受到了表觀遺傳調控。接下來,我們利用Methprimer軟件預測到了一個位于轉錄區(qū)域的CpG島IS及其上游的位于CRB區(qū)的CpG島岸,亞硫氰酸鹽測序PCR (bisulfite sequencing PCR, BSP)檢測表明：IS處于穩(wěn)定的高度甲基化水平,而CpG島岸的DNA甲基化水平與LAG3在3個T細胞系上的表達水平負相關。利用DNA甲基轉移酶M.SssI將CRB體外甲基化可以顯著降低其啟動子活性,表明CRB甲基化對lag3基因轉錄具有抑制作用。此外,使用DNA甲基轉移酶抑制劑5-Aza-dc處理LAG3表達水平低的CEM和JurkatZM細胞,發(fā)現(xiàn)兩者的LAG3 mRNA和蛋白表達水平均得到一定程度的提升,同時觀察到CRB甲基化水平的顯著降低。為了確定CRB甲基化對人原代T細胞中l(wèi)ag3基因的調控作用,我們檢測了原代T細胞的CRB甲基化,發(fā)現(xiàn)：相較于作為LAG3表達陰性對照的B淋巴細胞,原代CD8+T淋巴細胞的各記憶亞群上CRB的甲基化水平均低。綜上,我們的數(shù)據(jù)表明：發(fā)生在CpG島岸上的DNA甲基化對于人T細胞系中l(wèi)ag3基因轉錄而言是一種重要的表觀遺傳調節(jié)機制,而CRB的低甲基化水平可能將CD8+T細胞維持在適于LAG3快速表達的狀態(tài)以應對活化信號并迅速終止CD8+T免疫應答。
【關鍵詞】：lag3表達調控 DNA甲基化 亞硫氰酸鹽測序 DNase Ⅰ高敏感位點 CD8~+T細胞
【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 前言8-10
• 材料與方法10-21
• 1 實驗材料、試劑、儀器10-13
• 2 實驗方法13-21
• 結果21-30
• 討論30-32
• 結論32
• 創(chuàng)新性32-33
• 參考文獻33-36
• 附錄一 英文縮略詞36-37
• 致謝37-39

【共引文獻】

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中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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  本文關鍵詞：淋巴細胞活化基因3（lag3）表達調控機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：334577