本文關(guān)鍵詞：淋巴細(xì)胞活化基因3（lag3）表達(dá)調(diào)控機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：淋巴細(xì)胞活化基因3 (lymphocyte-activation gene 3, lag3),又稱CD223,是屬于免疫球蛋白超家族(immunoglobulin superfamily, IgSF)的細(xì)胞膜蛋白,其蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與CD4分子非常相似,基因位置鄰近CD4。早期研究顯示,LAG3在人體內(nèi)的表達(dá)局限于外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中的少數(shù)亞群上,如活化的T淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞等。研究表明LAG3對T細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)有重要作用,且與多種疾病狀態(tài)下的免疫失調(diào)相關(guān),但lag3基因表達(dá)調(diào)控的機制依然不明確。本文利用LAG3表達(dá)水平有差異的3個T細(xì)胞系(CEM, Jurkat E6-1, Jurkat ZM細(xì)胞系),對T細(xì)胞中l(wèi)ag3基因表達(dá)調(diào)控的部分機制進(jìn)行了研究,并發(fā)現(xiàn)位于轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)中的CpG島岸(CpG island shore)的DNA甲基化將抑制lag3基因的轉(zhuǎn)錄。首先,我們從mRNA和蛋白水平對實驗室現(xiàn)有T細(xì)胞系的LAG3表達(dá)進(jìn)行了檢測,發(fā)現(xiàn)3個細(xì)胞系中LAG3表達(dá)有差異且受到轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控。通過比對人與老鼠的基因組序列,鑒定到lag3啟動子中存在兩個潛在的保守調(diào)控區(qū)CR.A和CRB (conserved region AB)。利用DNase I高敏感位點的分析方法,我們發(fā)現(xiàn)在LAG3+的Jurkat E6-1細(xì)胞亞群中,CRA和CRB對DNase I的處理敏感。將包含CRA和CRB的lag3基因轉(zhuǎn)錄起始位點(transcription start site, TSS)上游片段擴增并構(gòu)建報告質(zhì)粒p.basic,發(fā)現(xiàn)該區(qū)段具有較高啟動子活性。進(jìn)一步,通過截斷啟動子發(fā)現(xiàn)CRB是該啟動子區(qū)段中的核心序列,同時發(fā)現(xiàn)CRB在LAG3表達(dá)水平極低的CEM和Jurkat ZM細(xì)胞中亦具有高啟動活性,提示我們這兩種細(xì)胞內(nèi)源的LAG3表達(dá)受到了表觀遺傳調(diào)控。接下來,我們利用Methprimer軟件預(yù)測到了一個位于轉(zhuǎn)錄區(qū)域的CpG島IS及其上游的位于CRB區(qū)的CpG島岸,亞硫氰酸鹽測序PCR (bisulfite sequencing PCR, BSP)檢測表明：IS處于穩(wěn)定的高度甲基化水平,而CpG島岸的DNA甲基化水平與LAG3在3個T細(xì)胞系上的表達(dá)水平負(fù)相關(guān)。利用DNA甲基轉(zhuǎn)移酶M.SssI將CRB體外甲基化可以顯著降低其啟動子活性,表明CRB甲基化對lag3基因轉(zhuǎn)錄具有抑制作用。此外,使用DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-Aza-dc處理LAG3表達(dá)水平低的CEM和JurkatZM細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)兩者的LAG3 mRNA和蛋白表達(dá)水平均得到一定程度的提升,同時觀察到CRB甲基化水平的顯著降低。為了確定CRB甲基化對人原代T細(xì)胞中l(wèi)ag3基因的調(diào)控作用,我們檢測了原代T細(xì)胞的CRB甲基化,發(fā)現(xiàn)：相較于作為LAG3表達(dá)陰性對照的B淋巴細(xì)胞,原代CD8+T淋巴細(xì)胞的各記憶亞群上CRB的甲基化水平均低。綜上,我們的數(shù)據(jù)表明：發(fā)生在CpG島岸上的DNA甲基化對于人T細(xì)胞系中l(wèi)ag3基因轉(zhuǎn)錄而言是一種重要的表觀遺傳調(diào)節(jié)機制,而CRB的低甲基化水平可能將CD8+T細(xì)胞維持在適于LAG3快速表達(dá)的狀態(tài)以應(yīng)對活化信號并迅速終止CD8+T免疫應(yīng)答。
【關(guān)鍵詞】：lag3表達(dá)調(diào)控 DNA甲基化 亞硫氰酸鹽測序 DNase Ⅰ高敏感位點 CD8~+T細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 前言8-10
• 材料與方法10-21
• 1 實驗材料、試劑、儀器10-13
• 2 實驗方法13-21
• 結(jié)果21-30
• 討論30-32
• 結(jié)論32
• 創(chuàng)新性32-33
• 參考文獻(xiàn)33-36
• 附錄一 英文縮略詞36-37
• 致謝37-39

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉濤;蘭洋;吳傳芳;;甲基化CpG結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白的原核表達(dá)及應(yīng)用[J];四川大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2014年02期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 羅雙艷;MicroRNA-1246調(diào)控B細(xì)胞活化及其在系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病中的作用[D];中南大學(xué);2013年

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3 李霞;組蛋白修飾和組蛋白變異體在轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的作用機制研究[D];中國科學(xué)院北京基因組研究所;2014年

4 王春蕾;擬南芥中MBD7參與調(diào)控ROS1介導(dǎo)的DNA去甲基化機制的研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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2 胡淵;DRD5，，MNX1異常甲基化在2型糖尿病大血管并發(fā)癥診斷中的應(yīng)用研究[D];華中科技大學(xué);2013年

3 丁冬林;染色體整合位點及組蛋白甲基化對HIV潛伏的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

4 楊陽;原發(fā)性肝癌患者血清中CDO1基因啟動子甲基化狀態(tài)研究[D];山東大學(xué);2014年

5 向忠軍;基于甲基化修飾探討加減養(yǎng)心通脈方對冠心病血瘀證及亞型CTNNB1、DES基因表達(dá)的影響研究[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：淋巴細(xì)胞活化基因3（lag3）表達(dá)調(diào)控機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：334577