本文關(guān)鍵詞：云南馬久邑、洱源日本血吸蟲線粒體五個基因片段的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]研究云南馬久邑、洱源兩地的日本血吸蟲(Schistosomajaponicum,S.j)線粒體cox2、cox3、nad3、nad5、atp6五個基因片段差異,探討日本血吸蟲種內(nèi)的遺傳特點(diǎn),為進(jìn)一步闡明我國日本血吸蟲的種群遺傳結(jié)構(gòu)及生物學(xué)特性奠定基礎(chǔ)。 [方法]1、獲取蟲體樣品；a.馬久邑血吸蟲成蟲：采集云南省馬久邑市馬久邑村的陽性釘螺,逸出尾蚴；用腹部貼片法感染昆明小鼠,每只小鼠感染20-30條,感染45天后進(jìn)行剖殺；用灌注法取出小鼠體內(nèi)的成蟲；b.洱源血吸蟲成蟲：由云南省地方病防治研究所饋贈。用生理鹽水將收集的新鮮蟲體洗滌干凈,用70%乙醇保存。2、蟲體DNA提取及鑒定：分別取馬久邑及洱源兩地的日本血吸蟲成蟲各10條,用雙蒸水反復(fù)吹打沖洗2次后,再用超純水反復(fù)沖洗2-3次,分別置于一新的1.5m1的離心管中。用槍頭將蟲體磨碎,向離心管中加入180μl的Buffer GL、20μl Proteinase K及10μl RNase A酶消化過夜后,按TaKaRa MiniBest Universal Genomic DNA Extraction Kit說明書來提取基因組DNA,于紫外分光光度儀檢測其純度,最后于-20℃保存。3、PCR擴(kuò)增、測序：以NC-002544為參考序列設(shè)計五對特異性引物,采用PCR技術(shù)對日本血吸蟲線粒體cox2、cox3、nad3、nad5、atp6五個基因片段進(jìn)行擴(kuò)增,于1.0%的瓊脂糖凝膠電泳檢測,并送華大基因科技服務(wù)有限公司進(jìn)行測序。4、用DNAStar5.0和Mega6.0軟件進(jìn)行相似性分析和系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建。 [結(jié)果]1、經(jīng)PCR擴(kuò)增后分別獲得云南馬久邑、洱源兩地的日本血吸蟲線粒體cox2、cox3、nad3、nad5、atp6五個基因片段,長度分別為2301bp、270bp、301bp、209bp。2、經(jīng)1%瓊脂糖電泳標(biāo)準(zhǔn)分子量對照和測序鑒定,擴(kuò)增獲得的目的基因片段與預(yù)期結(jié)果相符。3、比對相似性分析：各序列有微小差異,分別有2、3、1、3、2個堿基位點(diǎn)不同,差異性分別為0.8%、1.2%、0.5%、0.8%、0.6%,即同源性分別為：99.2%、98.8%、99.5%、99.2%、99.4%。4、本研究的五個基因片段的系統(tǒng)進(jìn)化樹顯示：云南馬久邑、洱源兩地的日本血吸蟲聚集在一起,同曼氏血吸蟲、馬來血吸蟲、湄公血吸蟲、梭形血吸蟲和埃及血吸蟲有明顯的分支,但是與GeneBank中已發(fā)表的其他地區(qū)品系的日本血吸蟲線粒體相同序列比較并不能構(gòu)成單獨(dú)的分支。 [結(jié)論]1、云南馬久邑、洱源兩地不同自然隔離群的日本血吸蟲線粒體cox2、cox3、 nad3、nad5、atp6五個基因片段均存在一定程度的種內(nèi)差異(0.5%-1.2%),但差異較小,同源性較高。2、研究所選云南馬久邑、洱源兩地的血吸蟲線粒體五個基因片段均屬于日本血吸蟲,且親緣關(guān)系密切,無明顯分支,尚不能構(gòu)成種內(nèi)分類；與馬來血吸蟲、湄公血吸蟲、曼氏血吸蟲、梭形血吸蟲和埃及血吸蟲有明顯的分支。
【關(guān)鍵詞】：日本血吸蟲 線粒體基因cox2 cox3 nad3 nad5 atp6同源性分析系統(tǒng)進(jìn)化樹 馬久邑 洱源
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R383.24;R3416
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 主要英文縮寫10-12
• 引言12-17
• 材料與方法17-23
• 結(jié)果23-41
• 討論41-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 綜述51-60
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文情況60-61
• 致謝61

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：334693