本文關(guān)鍵詞：人滅活輪狀病毒疫苗誘導實驗動物免疫應答研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：輪狀病毒(rotavirus, RV)是世界范圍內(nèi)引起嬰幼兒感染性腹瀉最主要的病原體之一,不論在發(fā)達國家還是發(fā)展中國家輪狀病毒感染率均相似,全球每年約 有60萬嬰幼兒因感染RV而死亡,這些死亡病例中的80%發(fā)生在亞洲和非洲的發(fā)展中國家。然而目前尚無治療RV腹瀉的特效藥物,采用疫苗預防輪狀病毒感染、降低重癥死亡率已成為有效手段。目前國內(nèi)外市場上的RV疫苗均為口服減毒活疫苗,減毒活疫苗雖有良好的免疫效果,但疫苗使用過程中存在一些問題,例如毒力返祖、被外源因子污染等。研究和開發(fā)RV滅活疫苗(Inactivated rotavirus vaccine, IRV)可作為最大限度克服上述問題的一項重要策略和有效補充。但在不同國家和地區(qū),輪狀病毒流行株血清型不盡相同,疫苗免疫效果存在差異。因此,采用合適的地域性的病毒流行株進行疫苗開發(fā),將會提高針對性和疫苗的有效性。 [目的]評價從流行地區(qū)分離的輪狀病毒毒株生物學特性及在實驗動物中的免疫原性。 [方法]用MA104細胞和Vero細胞分離病毒,基因測序確定其血清型,Q-FF、G-25離子交換層析和脫鹽純化,熱結(jié)合甲醛滅活,用免疫膠體金法檢測病毒抗原性,免疫熒光測定感染性滴度,PAGE膠檢測遺傳穩(wěn)定性,電鏡觀察病毒形態(tài)。 滅活后的病毒稀釋成不同抗原量(酶標單位：EU),與Al(OH)3佐劑混合制備成試驗性疫苗。同時將小鼠分為對照組(注射緩沖液)、實驗組。選擇不同的免疫劑量即4EU、8EU、16EU、32EU、64EU、128EU免疫實驗組。免疫途徑為肌內(nèi)注射,免疫三次,一次基礎(chǔ)免疫,二次加強免疫,間隔兩周。對照組則以相同途徑免疫PBS和PBS+佐劑。兩組均在每次免疫兩周后,采用ELISA法檢測小鼠的血清特異性抗體效價,FFA檢測血清中和抗體效價,Western blot檢測小鼠血清中的抗體特異性。 [結(jié)果]輪狀病毒ZTR-68株在Vero細胞上連續(xù)傳代后,細胞病變加快,抗原性逐漸增強；第7代達增殖高峰,病毒滴度達7.51gCCID50/mL;傳代過程中,病毒基因組核酸帶型保持一致；滅活后病毒經(jīng)三代盲傳未檢測到殘余活毒,抗原量可達12800EU/mL；免疫小鼠后,ELISA血清特異性IgG和中和抗體最高分別達1：3319和1：510,蛋白印跡可檢測到特異性條帶。 [結(jié)論]輪狀病毒ZTR-68株能在Vero細胞上穩(wěn)定增殖,病毒保持了毒株的基本生物學特性,且能誘導小鼠產(chǎn)生良好的免疫應答。
【關(guān)鍵詞】：輪狀病毒 分離培養(yǎng) 純化 滅活 免疫應答
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-16
• 第一部分 人輪狀病毒ZTR-68株滅活疫苗的制備及其評價16-36
• 一、實驗材料與方法16-24
• 二、結(jié)果與分析24-32
• 三、討論32-35
• 四、小結(jié)35-36
• 第二部分 輪狀病毒ZTR-68株在小鼠中誘導的免疫應答36-49
• 一、實驗材料與方法36-41
• 二、結(jié)果與分析41-46
• 三、討論46-47
• 四、小結(jié)47-49
• 參考文獻49-54
• 附錄54-58
• 文獻綜述58-65
• 參考文獻62-65
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況65-66
• 致謝66-67

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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本文編號：334359