本文關鍵詞：人臍血間充質(zhì)干細胞源性的類許旺細胞與人胎兒坐骨神經(jīng)許旺細胞差異蛋白組學的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：周圍神經(jīng)損傷缺損的臨床治療是世界難題，自體神經(jīng)移植是金方法，但會造成供區(qū)神經(jīng)損傷。通過組織工程化的人工神經(jīng)修復周圍神經(jīng)缺損是當前臨床研究的熱點。人工神經(jīng)的種子細胞為SCs(Schwann cells,SCs)，其來源主要有自體SCs、異體SCs、以及由間充質(zhì)干細胞（Mesenchymal Stem Cells,MSCs）定向誘導分化而來，而MSCs誘導而來的類SCs以其來源廣泛，活性強更受學者青睞。人臍血間充質(zhì)干細胞(Human Umbilical Cord Blood Mesenchymal Stem Cells,HUCBMSCs)作為最先應用的人骨髓間充質(zhì)干細胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）的一種替代來源，在體外誘導培養(yǎng)中已證明其具有向SCs分化的能力，但是其生物學行為和正常SCs有哪些異同之處還有待進一步研究。目的：本研究旨在建立人胎兒坐骨神經(jīng)SCs的分離、培養(yǎng)、純化及鑒定體系，結合本課題組以往的HUCBMSCs培養(yǎng)及體外誘導經(jīng)驗，將HUCBMSCs、HUCBMSCs體外誘導后的類SCs以及人SCs三種細胞進行蛋白質(zhì)組學的分析，尋找差異蛋白點。 方法：采用課題組既往HUCBMSCs培養(yǎng)及體外誘導方法獲得HUCBMSCs以及類SCs；取藥物引產(chǎn)的10具12~16周人胎兒胎坐骨神經(jīng)，剝離神經(jīng)外膜、剪碎、消化、離心、培養(yǎng)，待長滿瓶底后，分A組采用低酶消化、差速貼壁以及D-Valine條件培養(yǎng)基純化SCs；B組采用低酶消化結合差速貼壁純化法純化；C組采用D-Valine條件培養(yǎng)基純化法；D組不采用任何純化處理。根據(jù)SCs特有顯微鏡下形態(tài)統(tǒng)計各組細胞純度，選取純度最高的一組進行下一步實驗。提取這三種細胞的總蛋白，利用雙向凝膠電泳分離蛋白并銀染，利用ImageMaster軟件進行分析對比，選取HUCBMSCs與SCs相比表達低的點和HUCBMSCs誘導過程中增加的蛋白點之間的匹配點進行質(zhì)譜分析，并選取適當?shù)鞍走M行免疫印跡驗證。結果：1）采用低酶消化、差速貼壁以及D-Valine條件培養(yǎng)基純化的SCs的純度5d后達到99.1%。2）得到分辨率和重復性均較好的雙向凝膠電泳圖譜，每組膠的蛋白表達點為3500個上下，平均匹配率分別為98%、95%、97%。3）誘導前的HUCBMSCs與SCs有290個蛋白差異點，誘導后的類SCs與SCs僅有161個差異蛋白點，表明誘導后的HUCBMSCs在蛋白質(zhì)組成方面更加接近SCs。4）對篩選出的41個蛋白匹配點，其中有25個蛋白點差異超過3倍，取這25個蛋白點進行質(zhì)譜分析最終共有20個點被成功鑒定，分別屬于細胞骨架蛋白、細胞調(diào)控蛋白、能量代謝蛋白以及蛋白酶類蛋白，其中包含兩種公認的SCs標記蛋白（S100β及GFAP）。5）在這20個蛋白點中選取3種蛋白進行免疫印跡驗證，驗證結果基本與雙向電泳及質(zhì)譜鑒定的結果一致。 結論： 1.通過低酶消化、差速貼壁以及D-Valine條件培養(yǎng)基相結合純化SCs的方法培養(yǎng)SCs所需時間較短，純度更高，能夠為下一步的神經(jīng)組織工程提供細胞來源。 2. HUCBMSCs誘導后在蛋白質(zhì)構成方面更加接近正常的SCs。 3.本實驗成功鑒定出的20個蛋白點，分別屬于細胞骨架蛋白、細胞調(diào)控蛋白、能量代謝蛋白以及蛋白酶類蛋白，這些蛋白的含量變化是由于誘導劑刺激細胞產(chǎn)生的，，大多數(shù)對于神經(jīng)的分化與生長起著重要的作用，這其中還包含兩種公認的SCs標記蛋白（S100β及GFAP）。 4.這些差異蛋白的尋找對于今后更好的優(yōu)化體外誘導方案以及指導間充質(zhì)干細胞的體外的定向誘導提供可靠的依據(jù)。
【關鍵詞】：臍血 間充質(zhì)干細胞 分化 SCs 雙向電泳 質(zhì)譜分析
【學位授予單位】：蚌埠醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R321
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 引言9-11
• 第一部分 人臍血間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)、擴增、鑒定及體外誘導11-24
• 1. 材料與方法11-18
• 2. 結果18-22
• 3. 討論22-24
• 第二部分 流產(chǎn)胎兒坐骨神經(jīng)許旺細胞的體外培養(yǎng)與純化24-34
• 1. 主要儀器、試劑與方法24-28
• 2. 結果28-31
• 3. 討論31-34
• 第三部分 間充質(zhì)干細胞、類許旺細胞與許旺細胞蛋白組學比較34-60
• 1. 材料、器材與試劑34-38
• 2. 操作步驟38-46
• 3. 結果46-55
• 4. 討論55-60
• 結論60-61
• 參考文獻61-65
• 致謝65-66
• 附錄66-75
• 附錄A 英中文術語和縮略語對照表66
• 附錄B 個人簡歷66-67
• 附錄C 已發(fā)表論文67
• 附錄D 綜述67-75
• 參考文獻73-75

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李季林;盛羅平;;S100B蛋白與顱腦損傷研究的新進展[J];創(chuàng)傷外科雜志;2011年02期

2 黃平,王振原,托婭;神經(jīng)生化標志物S100β蛋白研究進展[J];法醫(yī)學雜志;2005年02期

3 杜晶春;吳玉;李雪燕;;CD73在人骨髓間充質(zhì)干細胞免疫調(diào)節(jié)功能中的作用[J];廣東醫(yī)學;2012年24期

4 趙勇;初同偉;周躍;;成年兔雪旺細胞體外培養(yǎng)增殖和純化的實驗研究[J];江西醫(yī)學院學報;2008年01期

5 廖曉萍;陳杖榴;李慎濤;;重組γ-神經(jīng)膠質(zhì)成熟因子誘導體外神經(jīng)干細胞分化為星形膠質(zhì)細胞[J];基礎醫(yī)學與臨床;2008年03期

6 林巍;唐雪梅;孔圓;王卉;劉開彥;;CD271及CD133用于陽性分選富集骨髓間充質(zhì)干細胞的比較[J];中國實驗血液學雜志;2008年02期

7 劉蒙;楊少光;劉鵬霞;杜偉廷;顧東生;盧士紅;邢文;韓忠朝;;人骨髓和臍帶來源間充質(zhì)干細胞體外支持造血能力的比較研究[J];中國實驗血液學雜志;2009年05期

8 夏磊;杜琳;殷鐵林;李來好;周若南;;甲基強的松龍預處理對缺血再灌注損傷脊髓中熱休克蛋白27表達的影響[J];中國脊柱脊髓雜志;2008年12期

9 洪坦輝;金羽青;戴傳昌;董佳生;祁佐良;王毅敏;劉偉;曹誼林;;復合膠原酶消化法制備高純度小鼠雪旺細胞[J];組織工程與重建外科雜志;2008年05期

10 秦義武;趙勁民;蘇偉;李曉峰;羅世興;劉軍廷;;單酶消化復合植塊法培養(yǎng)雪旺細胞的實驗研究[J];中國修復重建外科雜志;2012年09期

  本文關鍵詞：人臍血間充質(zhì)干細胞源性的類許旺細胞與人胎兒坐骨神經(jīng)許旺細胞差異蛋白組學的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：334350