本文關鍵詞：FKBP25及其缺失突變體與CLIC1相互作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的為進一步了解哺乳動物細胞中FKBP25蛋白的生物學功能，構建下游帶FLAG標簽的FKBP25缺失突變體FKBP25-FLAG-N和FKBP25-FLAG-C真核表達質粒。分別將FKBP25及兩個缺失突變體表達質粒轉染至COS7細胞中，觀察各組蛋白單獨表達時在細胞內的定位情況；分別將帶不同標簽的FKBP25與CLIC1表達質粒共轉染至COS7細胞和HEK293T細胞中，通過免疫熒光方法觀察各組蛋白在細胞內的共定位情況；免疫共沉淀方法檢測各組蛋白在細胞內的相互作用情況。 方法以pCDNA3.1-FKBP25-FLAG重組質粒為模板，用PCR方法構建pCDNA3.1-FKBP25-FLAG-N和pCDNA3.1-FKBP25-FLAG-C真核表達質粒。重組質粒經(jīng)雙酶切鑒定正確后送去測序。采用脂質體法進行細胞轉染，將帶不同標簽的FKBP25和CLIC1質粒單獨轉染至COS7細胞中，利用細胞免疫熒光技術研究各組蛋白單轉定位變化；將pCDNA3.1-FKBP25-FLAG及兩個缺失突變體、pCDGFP-FKBP25質粒分別與帶不同標簽CLIC1質粒共轉染至COS7細胞中，在熒光顯微鏡下觀察各組蛋白在哺乳動物細胞內共定位情況；分別將pCDGFP-FKBP25、pCDNA3.1-FKBP25-FLAG兩個缺失突變體質粒和帶不同標簽的CLIC1質粒共轉染至HEK293T細胞中，通過免疫共沉淀方法檢測FKBP25及兩個缺失突變體蛋白與CLIC1蛋白在哺乳動物細胞內的是否相互作用。 結果經(jīng)酶切和測序結果鑒定，重組質粒構建成功。免疫熒光顯微鏡觀察FKBP25蛋白主要分布在細胞質，細胞核也有一定分布；兩個缺失突變體蛋白的定位沒有變化。CLIC1蛋白主要分布在細胞核，核膜處也有分布，細胞質內次之。共定位觀察FKBP25及兩個缺失突變體蛋白與CLIC1蛋白在COS7細胞中主要分布在細胞質，核膜及細胞核內少量分布。免疫共沉淀檢測FKBP25及pCDNA3.1-FKBP25-FLAG-N蛋白和CLIC1蛋白在HEK293T細胞中存在相互作用。 結論在COS7細胞中，，F(xiàn)KBP25及兩個缺失突變體蛋白與CLIC1蛋白存在部分共定位；免疫共沉淀實驗進一步顯示在HEK293T細胞中， FKBP25及pCDNA3.1-FKBP25-FLAG-N蛋白與CLIC1蛋白存在相互作用；pCDNA3.1-FKBP25-FLAG-C蛋白與CLIC1蛋白不存在相互作用。
【關鍵詞】：FKBP25 缺失突變體 CLIC1 共定位 免疫共沉淀 蛋白質相互作用
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R363
【目錄】：

• 主要英文縮寫詞一覽表5-7
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 1 前言11-13
• 2 材料與方法13-32
• 3 實驗結果32-43
• 4 討論43-45
• 5 結論45-46
• 6 對本課題的展望46
• 參考文獻46-52
• 附錄52-53
• 致謝53-54
• 綜述54-62
• 參考文獻60-62

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 程海鵬,明鎮(zhèn)寰,王君暉;肽基脯氨酰異構酶在細胞核內的功能[J];生命的化學;1999年03期

2 戴寒晶;劉曉穎;鐘子琳;范禮斌;;酵母雙雜交技術篩選胞內氯離子通道蛋白1結合蛋白[J];安徽醫(yī)科大學學報;2006年02期

  本文關鍵詞：FKBP25及其缺失突變體與CLIC1相互作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：333687