本文關(guān)鍵詞：FKBP25及其缺失突變體與CLIC1相互作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的為進(jìn)一步了解哺乳動(dòng)物細(xì)胞中FKBP25蛋白的生物學(xué)功能，構(gòu)建下游帶FLAG標(biāo)簽的FKBP25缺失突變體FKBP25-FLAG-N和FKBP25-FLAG-C真核表達(dá)質(zhì)粒。分別將FKBP25及兩個(gè)缺失突變體表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至COS7細(xì)胞中，觀察各組蛋白單獨(dú)表達(dá)時(shí)在細(xì)胞內(nèi)的定位情況；分別將帶不同標(biāo)簽的FKBP25與CLIC1表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至COS7細(xì)胞和HEK293T細(xì)胞中，通過(guò)免疫熒光方法觀察各組蛋白在細(xì)胞內(nèi)的共定位情況；免疫共沉淀方法檢測(cè)各組蛋白在細(xì)胞內(nèi)的相互作用情況。 方法以pCDNA3.1-FKBP25-FLAG重組質(zhì)粒為模板，用PCR方法構(gòu)建pCDNA3.1-FKBP25-FLAG-N和pCDNA3.1-FKBP25-FLAG-C真核表達(dá)質(zhì)粒。重組質(zhì)粒經(jīng)雙酶切鑒定正確后送去測(cè)序。采用脂質(zhì)體法進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染，將帶不同標(biāo)簽的FKBP25和CLIC1質(zhì)粒單獨(dú)轉(zhuǎn)染至COS7細(xì)胞中，利用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)研究各組蛋白單轉(zhuǎn)定位變化；將pCDNA3.1-FKBP25-FLAG及兩個(gè)缺失突變體、pCDGFP-FKBP25質(zhì)粒分別與帶不同標(biāo)簽CLIC1質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至COS7細(xì)胞中，在熒光顯微鏡下觀察各組蛋白在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)共定位情況；分別將pCDGFP-FKBP25、pCDNA3.1-FKBP25-FLAG兩個(gè)缺失突變體質(zhì)粒和帶不同標(biāo)簽的CLIC1質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至HEK293T細(xì)胞中，通過(guò)免疫共沉淀方法檢測(cè)FKBP25及兩個(gè)缺失突變體蛋白與CLIC1蛋白在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的是否相互作用。 結(jié)果經(jīng)酶切和測(cè)序結(jié)果鑒定，重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。免疫熒光顯微鏡觀察FKBP25蛋白主要分布在細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞核也有一定分布；兩個(gè)缺失突變體蛋白的定位沒(méi)有變化。CLIC1蛋白主要分布在細(xì)胞核，核膜處也有分布，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)次之。共定位觀察FKBP25及兩個(gè)缺失突變體蛋白與CLIC1蛋白在COS7細(xì)胞中主要分布在細(xì)胞質(zhì)，核膜及細(xì)胞核內(nèi)少量分布。免疫共沉淀檢測(cè)FKBP25及pCDNA3.1-FKBP25-FLAG-N蛋白和CLIC1蛋白在HEK293T細(xì)胞中存在相互作用。 結(jié)論在COS7細(xì)胞中，，F(xiàn)KBP25及兩個(gè)缺失突變體蛋白與CLIC1蛋白存在部分共定位；免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步顯示在HEK293T細(xì)胞中， FKBP25及pCDNA3.1-FKBP25-FLAG-N蛋白與CLIC1蛋白存在相互作用；pCDNA3.1-FKBP25-FLAG-C蛋白與CLIC1蛋白不存在相互作用。
【關(guān)鍵詞】：FKBP25 缺失突變體 CLIC1 共定位 免疫共沉淀 蛋白質(zhì)相互作用
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 主要英文縮寫詞一覽表5-7
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 1 前言11-13
• 2 材料與方法13-32
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-43
• 4 討論43-45
• 5 結(jié)論45-46
• 6 對(duì)本課題的展望46
• 參考文獻(xiàn)46-52
• 附錄52-53
• 致謝53-54
• 綜述54-62
• 參考文獻(xiàn)60-62

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 程海鵬,明鎮(zhèn)寰,王君暉;肽基脯氨酰異構(gòu)酶在細(xì)胞核內(nèi)的功能[J];生命的化學(xué);1999年03期

2 戴寒晶;劉曉穎;鐘子琳;范禮斌;;酵母雙雜交技術(shù)篩選胞內(nèi)氯離子通道蛋白1結(jié)合蛋白[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2006年02期

  本文關(guān)鍵詞：FKBP25及其缺失突變體與CLIC1相互作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：333687