目的觀察脾氣虛證大鼠股四頭肌線粒體自噬水平及腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/UNC-51-類似自噬激活激酶1（ULK1）途徑的變化,從線粒體方面研究"脾氣虛四肢不用"的機制。方法運用飲食失節(jié)+勞倦法復制脾氣虛證大鼠模型,隨機分為對照組和脾氣虛模型組（模型組）,造模成功后取股四頭肌,比色法檢測三磷酸腺苷（ATP）含量;JC-1法檢測線粒體膜電位（MMP）;免疫熒光及印跡法（Western blot）法檢測微管相關(guān)蛋白1輕鏈3-B （LC3 B）、選擇性自噬接頭蛋白（p62）表達水平及與線粒體共定位的量;Western blot法檢測AMPKα及ULK1蛋白表達。結(jié)果與對照組比較,模型組股四頭肌ATP、MMP下降（P<0.05,P<0.01）;LC3B-II蛋白表達及與線粒體共定位增加（均P<0.01）、p62蛋白表達及與線粒體共定位減少（均P<0.01）;p-AMPKα/AMPKα及p-ULK1/ULK1比值升高（均P<0.01）。結(jié)論 "脾氣虛四肢不用"可能與AMPK/ULK1途徑激活所致的線粒體自噬水平提高不足有關(guān)。 

【文章來源】：北京中醫(yī)藥大學學報. 2019,42(09)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

A:Controlgroup;B:Modelgroup．Scale=10μm．圖12組大鼠股四頭肌LC3B與線粒體共定位(×100)Fig．1Co-localizationofLC3Bandmitochondriainquadricepsfemorisinratsoftwogroups(×100)A:對照組;B:

A:對照組;B:模型組。標尺=10μm。A:Controlgroup;B:Modelgroup．Scale=10μm．圖12組大鼠股四頭肌LC3B與線粒體共定位(×100)Fig．1Co-localizationofLC3Bandmitochondriainquadricepsfemorisinratsoftwogroups(×100)A:對照組;B:模型組。標尺=10μm。A:Controlgroup;B:Modelgroup．Scale=10μm．圖22組大鼠股四頭肌p62與線粒體共定位(×100)Fig．2Co-localizationofp62andmitochondriainquadricepsfemorisinratsoftwogroups(×100)表22組大鼠股四頭肌LC3B、p62與線粒體共定位的量(x珋±s;n=3)Table2Co-localizationofLC3B/p62andmitochondriaofquadricepsfemorisinratsoftwogroups(x珋±s;n=3)組別GroupsLC3Bp62對照組Controlgroup1．0001．000模型組Modelgroup1．926±0．4890．512±0．166t4．3173．707P0．0020．0093．32組大鼠股四頭肌LC3B-II與p62蛋白表達與對照組比較，模型組股四頭肌LC3B-II蛋白表達升高(P＜0．01)，p62蛋白表達下降(P＜0．01)，見圖3、表3。表32組大鼠股四頭肌LC3B-II、p62相對表達量(x珋±s;n=4)Table3ExpressionofLC3B-IIandp62proteininquadricepsfemorisinratsoftwogroups(x珋±s;n=4)組別GroupsLC3B-IIp62對照組Controlgroup0．438±0．1151．260±0．149模型組Modelgroup0．939±0．1920．657±0．155t12．9247．173P0．0010．002第9期劉文俊等脾氣虛證大鼠股四頭肌線粒體自噬水平及AMPK/ULK1途徑變化的研究367

1、2:對照組;3、4:模型組。1，2:Controlgroup;3，4:Modelgroup．圖32大鼠股四頭肌LC3B-II與p62蛋白印跡Fig．3BlottingofLC3B-IIandp62proteininquadricepsfemorisinquadricepsfemorisinratsoftwogroups3．42大鼠股四頭肌AMPKα和p-AMPKα及ULK1和p-ULK1蛋白表達與對照組比較，模型組股四頭肌p-AMPKα/AMPKα及p-ULK1/ULK1比值升高(均P＜0．01)。見圖4、表4。1、2:對照組;3、4:模型組。1，2:Controlgroup;3，4:Modelgroup．圖42大鼠股四頭肌p-AMPKα/AMPKα及p-ULK1/ULK1蛋白印跡Fig．4Blottingofp-AMPKα/AMPKαandp-ULK1/ULK1proteininquadricepsfemorisinratsoftwogroups表42組大鼠股四頭肌p-AMPKα/AMPKα及p-ULK1/ULK1相對表達量(x珋±s;n=4)Table4Expressionofp-AMPKα/AMPKαandp-ULK1/ULK1proteininquadricepsfemorisinratsoftwogroups(x珋±s;n=4)組別Groupsp-AMPKαAMPKαp-ULK1ULK1對照組Controlgroup0．545±0．1511．079±0．0960．689±0．1151．260±0．149模型組Modelgroup0．690±0．1010．903±0．1690．916±0．1921．157±0．155t4．3410．97810．2150．765P0．0170．1930．0010．6754討論線粒體產(chǎn)能是細胞執(zhí)行生物學功能的物質(zhì)基礎，也是“脾主肌肉”的重要環(huán)節(jié)，因此，維護其結(jié)構(gòu)和功能穩(wěn)定對于細胞生存至關(guān)重要。已有研究顯示，脾氣虛證大鼠骨骼肌線粒體功能異常，為此我們檢測了ATP含量和MMP水平。實驗結(jié)果顯示，脾氣虛大鼠股四頭肌ATP和MMP均明顯下降，提示線粒體功能異常，說明脾氣虛時股四頭肌線粒體

【參考文獻】：
期刊論文
[1]電針“足三里”對脾虛大鼠骨骼肌線粒體自噬相關(guān)蛋白表達的影響[J]. 董佳梓,張妤,魏云濤,許環(huán)宇,劉路,鄧婷月,張立德.  中國針灸. 2018(07)
[2]脾氣虛證模型大鼠神疲乏力的客觀化評價[J]. 劉旭東,劉文俊,孫大宇,崔勇,馮曉帆,單德紅,王德山.  中華中醫(yī)藥雜志. 2015(03)



本文編號：3316337