目的:膽汁淤積性肝病在人群及臨床中非常常見(jiàn),它可由各種原因引起的膽汁生成、分泌和排泄障礙,導(dǎo)致膽汁在肝內(nèi)淤積,而引起的肝細(xì)胞、肝內(nèi)外膽管一系列器質(zhì)性損害、代謝失調(diào)和功能性異常的肝膽系統(tǒng)疾病。此狀態(tài)若持續(xù)發(fā)展將成為肝硬化、肝癌導(dǎo)致死亡。文獻(xiàn)報(bào)道Pes1在其基序中含有保守的BRCA1 C末端（BRCT）結(jié)構(gòu)域,考慮到此結(jié)構(gòu)域作為響應(yīng)DNA損傷反應(yīng)的整合信號(hào)模塊,Pes1也可能參與DNA損傷和修復(fù),本課題探討Pes1以及PI3K/AKT/GSK-3β信號(hào)通路中的蛋白在膽汁淤積性肝病小鼠中的表達(dá)及其對(duì)疾病的影響。方法:（1）為探討膽汁淤積性肝病對(duì)小鼠的影響,分別使用0.1%DDC飼料和普通飼料飼喂小鼠4周,比較膽汁淤積性小鼠及正常小鼠體質(zhì)量的差異。（2）為了解探討膽汁淤積對(duì)小鼠肝臟的影響,取小鼠肝臟用4%多聚甲醛固定,石蠟包埋,切片,做常規(guī)病理HE染色,在光學(xué)顯微鏡下觀察膽汁淤積性肝病小鼠與正常小鼠組織病理變化。（3）為了解探討膽汁淤積對(duì)小鼠血清的影響,取小鼠血清,按照生化試劑測(cè)試盒說(shuō)明書(shū)操作檢測(cè)膽汁淤積性肝病小鼠與正常小鼠血清中總膽汁酸（TBA）、總膽紅素（TBIL）、堿性磷酸酶（AKP）、... 

【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PES1及其相關(guān)分子在肝組織中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線圖

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文14圖2.PES1及相關(guān)分子在小鼠肝細(xì)胞AML12中表達(dá)及其作用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線圖Figure2.ExperimentaltechnologyroadmapofPES1andrelatedmoleculesexpressioninmouselivercellsAML122.2.2小鼠血清生化指標(biāo)檢測(cè)取小鼠血清，按照生化試劑測(cè)試盒說(shuō)明書(shū)操作檢測(cè)血清中總膽汁酸（TBA）、總膽紅素（TBIL）、堿性磷酸酶（AKP）、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）的水平。具體步驟如下：總膽汁酸（TBA）檢測(cè)：（1）分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔和測(cè)定孔，標(biāo)準(zhǔn)孔加入標(biāo)準(zhǔn)品3μl，測(cè)定孔加入血清樣品3μl（2）標(biāo)準(zhǔn)孔和測(cè)定孔分別加入試劑一（甘氨酸緩沖液+穩(wěn)定劑）200μl（3）標(biāo)準(zhǔn)孔和測(cè)定孔分別加入試劑二（膽汁酸酶+NADH）50μl（4）混勻，37℃孵育1.5min后，用酶標(biāo)儀測(cè)定405nm波長(zhǎng)，讀取0-2min吸光度，計(jì)算△A/min，TBA含量（μmol/L）=（△A測(cè)定/△A標(biāo)準(zhǔn)）*標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/L）。標(biāo)準(zhǔn)品（甘氨膽酸鈉）：40μmol/L

3.1.1 膽汁淤積性肝病對(duì)小鼠活動(dòng)以及體重的影響我們使用普通飼料和 0.1 ％DDC 飼料飼喂小鼠，在喂養(yǎng)的 4 周期間內(nèi)，DDC模型小鼠隨著喂食時(shí)間增加出現(xiàn)呆滯少動(dòng)，皮膚黃染；對(duì)照組小鼠情況基本正常 4周之后，在實(shí)驗(yàn)麻醉之前先稱量每只小鼠體重。開(kāi)始喂養(yǎng)時(shí)正常對(duì)照組小鼠體質(zhì)量為（24.32±0.19）g 與 DDC 組小鼠體質(zhì)量（24.19±0.46）基本一致，無(wú)明顯差異。如圖所示，喂養(yǎng) 4 周后 DDC 小鼠體質(zhì)量為（18.32±1.13）g，與對(duì)照組正常 C57BL/6小鼠（25.30±0.94）g 比較，DDC 模型小鼠體重明顯減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.83，P＜0.05，圖 1）。


本文編號(hào)：3316759