目的:膽汁淤積性肝病在人群及臨床中非常常見,它可由各種原因引起的膽汁生成、分泌和排泄障礙,導(dǎo)致膽汁在肝內(nèi)淤積,而引起的肝細(xì)胞、肝內(nèi)外膽管一系列器質(zhì)性損害、代謝失調(diào)和功能性異常的肝膽系統(tǒng)疾病。此狀態(tài)若持續(xù)發(fā)展將成為肝硬化、肝癌導(dǎo)致死亡。文獻(xiàn)報道Pes1在其基序中含有保守的BRCA1 C末端（BRCT）結(jié)構(gòu)域,考慮到此結(jié)構(gòu)域作為響應(yīng)DNA損傷反應(yīng)的整合信號模塊,Pes1也可能參與DNA損傷和修復(fù),本課題探討Pes1以及PI3K/AKT/GSK-3β信號通路中的蛋白在膽汁淤積性肝病小鼠中的表達(dá)及其對疾病的影響。方法:（1）為探討膽汁淤積性肝病對小鼠的影響,分別使用0.1%DDC飼料和普通飼料飼喂小鼠4周,比較膽汁淤積性小鼠及正常小鼠體質(zhì)量的差異。（2）為了解探討膽汁淤積對小鼠肝臟的影響,取小鼠肝臟用4%多聚甲醛固定,石蠟包埋,切片,做常規(guī)病理HE染色,在光學(xué)顯微鏡下觀察膽汁淤積性肝病小鼠與正常小鼠組織病理變化。（3）為了解探討膽汁淤積對小鼠血清的影響,取小鼠血清,按照生化試劑測試盒說明書操作檢測膽汁淤積性肝病小鼠與正常小鼠血清中總膽汁酸（TBA）、總膽紅素（TBIL）、堿性磷酸酶（AKP）、... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

PES1及其相關(guān)分子在肝組織中表達(dá)的實驗技術(shù)路線圖

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文14圖2.PES1及相關(guān)分子在小鼠肝細(xì)胞AML12中表達(dá)及其作用的實驗技術(shù)路線圖Figure2.ExperimentaltechnologyroadmapofPES1andrelatedmoleculesexpressioninmouselivercellsAML122.2.2小鼠血清生化指標(biāo)檢測取小鼠血清，按照生化試劑測試盒說明書操作檢測血清中總膽汁酸（TBA）、總膽紅素（TBIL）、堿性磷酸酶（AKP）、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）的水平。具體步驟如下：總膽汁酸（TBA）檢測：（1）分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔和測定孔，標(biāo)準(zhǔn)孔加入標(biāo)準(zhǔn)品3μl，測定孔加入血清樣品3μl（2）標(biāo)準(zhǔn)孔和測定孔分別加入試劑一（甘氨酸緩沖液+穩(wěn)定劑）200μl（3）標(biāo)準(zhǔn)孔和測定孔分別加入試劑二（膽汁酸酶+NADH）50μl（4）混勻，37℃孵育1.5min后，用酶標(biāo)儀測定405nm波長，讀取0-2min吸光度，計算△A/min，TBA含量（μmol/L）=（△A測定/△A標(biāo)準(zhǔn)）*標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/L）。標(biāo)準(zhǔn)品（甘氨膽酸鈉）：40μmol/L

3.1.1 膽汁淤積性肝病對小鼠活動以及體重的影響我們使用普通飼料和 0.1 ％DDC 飼料飼喂小鼠，在喂養(yǎng)的 4 周期間內(nèi)，DDC模型小鼠隨著喂食時間增加出現(xiàn)呆滯少動，皮膚黃染；對照組小鼠情況基本正常 4周之后，在實驗麻醉之前先稱量每只小鼠體重。開始喂養(yǎng)時正常對照組小鼠體質(zhì)量為（24.32±0.19）g 與 DDC 組小鼠體質(zhì)量（24.19±0.46）基本一致，無明顯差異。如圖所示，喂養(yǎng) 4 周后 DDC 小鼠體質(zhì)量為（18.32±1.13）g，與對照組正常 C57BL/6小鼠（25.30±0.94）g 比較，DDC 模型小鼠體重明顯減輕，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=4.83，P＜0.05，圖 1）。


本文編號：3316759