本文關(guān)鍵詞：自制無(wú)血清培養(yǎng)體系長(zhǎng)期培養(yǎng)對(duì)hESCs“干性”維持和notch1表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 觀察本實(shí)驗(yàn)室自制無(wú)血清培養(yǎng)基持續(xù)培養(yǎng)擴(kuò)增hESCs對(duì)其“干性”的維持以及Notch1的表達(dá)變化趨勢(shì)，以探討該培養(yǎng)體系長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)擴(kuò)增hESCs的效果以及Notch信號(hào)激活在維持hESCs“干性”中的作用。 方法： 收集自制無(wú)血清培養(yǎng)基傳代擴(kuò)增至第20代、30代的hESCs；應(yīng)用免疫熒光染色法檢測(cè)兩代hESCs特異性標(biāo)志OCT4、Nanog、SSEA-4的表達(dá)；堿性磷酸酶顯色法檢測(cè)兩代hESCs堿性磷酸酶活性；體外接種hESCs至免疫缺陷小鼠，觀察畸胎瘤形成，并行組織切片觀察內(nèi)、中、外三個(gè)胚層形成；應(yīng)用Real-timePCR、Western-bolt技術(shù)，比較Notch1信號(hào)分子在兩代細(xì)胞組分的表達(dá)情況，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果： （1）免疫熒光染色法結(jié)果：兩代hESCs細(xì)胞均表達(dá)OCT4、Nanog、SSEA-4，呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)； （2）堿性磷酸酶顯色結(jié)果示：顯微鏡下觀察兩代hESCs細(xì)胞均被染成藍(lán)紫色，呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)； （3）免疫缺陷小鼠畸胎瘤切片可見：分別注射了兩代hESCs的小鼠形成的畸胎瘤切片染色提示均有內(nèi)胚層、中胚層、外胚層組織的形成。 （4）Real-time PCR技術(shù)比較Notch1基因在兩代細(xì)胞中的表達(dá)情況：hESCs的Notch1基因表達(dá)第30代是20代的（8.4±0.23）倍，p0.05。 （5）Western-bolt技術(shù)比較Notch1蛋白在兩代細(xì)胞中的表達(dá)情況：第30代hESCs的Notch1蛋白300kd片段相對(duì)表達(dá)量為（0.17±0.013），第20代為（0.016±0.002），，第30代hESCs的Notch1蛋白120kd片段相對(duì)表達(dá)量為（0.41±0.021），第20代為（0.36±0.018），第30代hESCs的Notch1蛋白總表達(dá)水平明顯高于第20代hESCs（p0.05）。 結(jié)論： （1）自制無(wú)血清無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)基能持續(xù)培養(yǎng)hESCs并維持其干性不變； （2）hESCs持續(xù)傳代后，Notch1信號(hào)分子呈較高的表達(dá)狀態(tài)，提示本無(wú)血清培養(yǎng)系統(tǒng)中hESCs在體外“干性”的維持可能與Notch信號(hào)激活有關(guān)，有待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：人胚胎干細(xì)胞 無(wú)血清培養(yǎng)基 無(wú)飼養(yǎng)層 Notch
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞對(duì)照表9-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料與方法-實(shí)驗(yàn)材料12-24
• 2.1 細(xì)胞系12
• 2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物12
• 2.3 基本材料12
• 2.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑12-13
• 2.5 主要實(shí)驗(yàn)儀器13-14
• 2.6 部分主要試劑配制14-16
• 2.7 hESCs 的培養(yǎng)16-18
• 2.7.1 hESCs 的復(fù)蘇16-17
• 2.7.2 hESCs 的日常培養(yǎng)和換液17
• 2.7.3 hESCs 的傳代17
• 2.7.4 hESCs 的凍存17-18
• 2.8 實(shí)驗(yàn)分組及步驟18-23
• 2.8.1 hESCs 干性鑒定18-19
• 2.8.2 Notch1 在兩代細(xì)胞中的表達(dá)情況：19-23
• 2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法23-24
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-31
• 3.1 顯微鏡下觀察 hESCs 形態(tài)學(xué)特征24
• 3.2 堿性磷酸酶染色24-25
• 3.3 免疫熒光染色25-27
• 3.4 畸胎瘤組織切片觀察27
• 3.5 RNA 純度及質(zhì)量27-28
• 3.6 Notch1 基因在各細(xì)胞組分的表達(dá)情況28-30
• 3.7 Notch1 蛋白在各細(xì)胞組分的表達(dá)情況：30-31
• 第4章 討論31-35
• 4.1 自制無(wú)血清培養(yǎng)體系中 hESCs 干性維持分析32-34
• 4.2 Notch1 表達(dá)變化與體外維持 hESCs 的“干性”潛在相關(guān)性分析34-35
• 第5章 結(jié)論與展望35-36
• 5.1 小結(jié)與結(jié)論35
• 5.2 展望35-36
• 致謝36-37
• 參考文獻(xiàn)37-40
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果40-41
• 綜述41-47
• 參考文獻(xiàn)45-47

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 喻松霞;郭玲玲;賀文鳳;賀玲;李潔;李劍;;人胚胎干細(xì)胞無(wú)血清無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系的建立[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2013年07期

2 涂懷軍;李劍;石慶之;余小驪;李潔;吳瓊;;無(wú)血清培養(yǎng)條件誘導(dǎo)人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞的分化[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2009年06期

3 李劍,戴育成;無(wú)血清培養(yǎng)條件下人表皮干細(xì)胞的生物學(xué)特性研究[J];中華燒傷雜志;2005年04期

4 李劍;涂懷軍;石慶芝;李潔;吳瓊;戴革;戴育成;;臍血間充質(zhì)干細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)[J];中華血液學(xué)雜志;2006年06期

  本文關(guān)鍵詞：自制無(wú)血清培養(yǎng)體系長(zhǎng)期培養(yǎng)對(duì)hESCs“干性”維持和notch1表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：330888