胚泡著床是哺乳動物特有的生殖活動，是決定妊娠成功與否的關(guān)鍵步驟，因而是進(jìn)行生殖調(diào)控的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。胚泡著床是一個(gè)復(fù)雜的生理過程，涉及胚胎與母體子宮間極其復(fù)雜而精細(xì)的多因素協(xié)同作用，包括胚泡的發(fā)育、分化，子宮內(nèi)膜的同步變化，以及子宮內(nèi)膜與胚泡的相互作用。長期以來，胚泡著床的分子機(jī)制一直都是生殖生物學(xué)領(lǐng)域的一個(gè)研究熱點(diǎn)，隨著人們對細(xì)胞連接、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫調(diào)節(jié)等研究的不斷深入，各類蛋白酶、細(xì)胞因子等非激素類分子在胚泡著床中的作用已得到廣泛關(guān)注。近年來，國內(nèi)外學(xué)者也紛紛運(yùn)用不同的現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)，鑒別篩選到許多新的參與胚泡著床過程的非激素類分子，并對它們在著床中的作用機(jī)制進(jìn)行了深入研究，使我們對著床的分子機(jī)制有了更全面的了解，但至今仍有許多問題有待于闡明。 以小鼠為動物模型，我們應(yīng)用cDNA差減雜交方法鑒別篩選著床相關(guān)基因，即以孕4.5天小鼠著床部位（其中包括胚泡）cDNA RsaI片段為Tester，用過量的非著床部位和胚泡cDNA RsaI片段為Driver，通過差減雜交，構(gòu)建差減庫。并通過PCR擴(kuò)增插入片段和Agarose 電泳的方法，進(jìn)行克隆篩選，最后測序分析。共獲得3個(gè)新的... 

【文章來源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

第二次PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的Agarose電泳分析

圖4 22個(gè)克隆的PCR產(chǎn)物Agarose電泳2-12，15-25，克隆編號 ；M = MspI 酶切的 pBR322 DNA 分子量標(biāo)準(zhǔn)性分析結(jié)果不同長度插入片段的克隆進(jìn)行測序，與 GenBan比較，發(fā)現(xiàn)大部分的EST與已知基因的同源性很ST81 與已知的基因序列有一定的同源性，并將它 為含 EST8、EST60、EST73 和 EST81 的 pT-Agarose 電泳圖。從圖中可見相應(yīng)的 EST 片段。G797175）片段長 149bp，與褐鼠白介素 3 調(diào)節(jié)的ulated by Interleukin 3,NFIL-3/Adenovirus E4P4）mRNA相比，可比的 147bp中有 131bp相同，5％，其余部分不可比[4]。EST60（BG797173）類

圖1表達(dá)質(zhì)粒pGEX- 4T-2/ISP2的構(gòu)建圖圖2融合蛋白表達(dá)的SDS-PAGE分析1．蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)；2．0.05mM IPTG 誘導(dǎo)表達(dá)的 ISP2/BL21 菌體裂解上清3．0.1mM IPTG 誘導(dǎo)表達(dá)的 ISP2/BL21 菌體裂解上清；kD


本文編號：3305598