目的研究成纖維細胞生長因子21（FGF21）對棕櫚酸酯誘導的人肝細胞脂肪堆積、炎癥因子表達的作用及其機制。方法采用組蛋白去乙�；皋D(zhuǎn)錄沉默信息調(diào)節(jié)因子1（SIRT1）短發(fā)夾RNA（shRNA）慢病毒,建立L02SIRT1穩(wěn)定敲低細胞系;L02細胞以及SIRT1敲低細胞系給予棕櫚酸酯（palmitate）處理,建立高脂細胞模型,在此基礎(chǔ)上給予FGF21,檢測細胞甘油三酯（TG）、丙二醛（MDA）水平;ELISA檢測細胞腫瘤壞死因子α（TNF-α）和白細胞介素6（IL-6）水平;MitoSOX染色結(jié)合流式細胞術(shù)檢測細胞線粒體活性氧（ROS）水平;實時定量PCR檢測SIRT1、過氧化物酶體增殖物激活受體輔激活因子1α（PGC1α）、超氧化物歧化酶2（SOD2）以及過氧化氫酶（CAT）的mRNA水平;Western blot法檢測SIRT1、 PGC1α、 SOD2、 CAT蛋白水平;JC-1染色結(jié)合激光共聚焦檢測線粒體膜電位;Seahorse XF細胞線粒體壓力測試試劑盒檢測線粒體氧化呼吸功能。結(jié)果棕櫚酸酯可增加L02細胞內(nèi)TG水平,引起細胞和線粒體氧化應(yīng)激,降低SIRT1、 PGC1α、 ... 

【文章來源】：細胞與分子免疫學雜志. 2019,35(07)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 細胞培養(yǎng)、 分組和處理
        1.2.2 L02細胞線粒體ROS檢測
        1.2.3 JC-1染色檢測L02細胞線粒體膜電位
        1.2.4 L02細胞線粒體耗氧量分析
        1.2.5 實時定量PCR檢測L02細胞SOD2、 CAT、 SIRT1、 PGC1α的mRNA水平
        1.2.6 Western blot法檢測L02細胞SOD2、 CAT、 SIRT1、 PGC1α的蛋白水平
        1.2.7 統(tǒng)計學分析
2 結(jié)果
    2.1 FGF21抑制棕櫚酸酯處理的L02細胞脂肪變、 炎癥反應(yīng)以及氧化應(yīng)激
    2.2 FGF21改善棕櫚酸酯處理的L02細胞的線粒體氧化應(yīng)激狀態(tài)及線粒體功能
    2.3 通過SIRT1依賴的通路, FGF21改善棕櫚酸酯處理的L02細胞中脂質(zhì)堆積以及氧化應(yīng)激, 抑制細胞炎癥因子分泌
    2.4 通過激活SIRT1依賴的通路, FGF21改善線粒體氧化應(yīng)激損傷
3 討論



本文編號：3305068