目的制備可誘導(dǎo)表達(dá)pri-mir-302/367基因的重組慢病毒顆粒，并在HeLa細(xì)胞中研究該基因?qū)Χ嗄苄曰虻恼{(diào)控作用；通過病毒感染人臍血單個核細(xì)胞（human cordblood mononuclear cells，hCBMNC），旨在探究該基因?qū)CBMNC的重編程作用。方法（1）以正常人基因組DNA為模板，PCR擴(kuò)增目的基因，將目的基因連接入酶切線性化的pLV-TRE質(zhì)粒，構(gòu)建pLV-TRE-302慢病毒重組體，酶切及測序予以鑒定。（2）通過重組質(zhì)粒和輔助質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞對慢病毒進(jìn)行包裝及滴度測定；用病毒轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞，強(qiáng)力霉素（doxycline, DOX）誘導(dǎo)后，通過real time-PCR測定miR-302/367家族基因及其下游調(diào)節(jié)基因Oct4、Sox2和Nanog的表達(dá)情況。（3）用病毒感染hCBMNC，經(jīng)DOX誘導(dǎo)后，在胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)條件下觀察其形態(tài)學(xué)變化，并用real time-PCR分別檢測多能性基因Oct4、Nanog、Sox2、Klf4和c-Myc的表達(dá)情況。結(jié)果（1）成功制備pri-mir-302/367重組慢病毒顆粒，基因測序結(jié)果與目標(biāo)序... 

【文章來源】：寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏回族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

三種體細(xì)胞重編程的方法

圖 2. miR-302/367 的基因結(jié)構(gòu)Fig 2. Gene structure of the miR-302-367 cluster[26].隨著 iPSCs 技術(shù)的發(fā)展，有學(xué)者發(fā)現(xiàn) miR-302/367 與體細(xì)胞重編程有密切的關(guān)系[28]如 Ying 和他的同事們建立了基于 Pol-II 的內(nèi)含子 miRNA 表達(dá)系統(tǒng)，借助逆轉(zhuǎn)錄病毒將

在293T細(xì)胞檢測重組慢病毒


本文編號：3298699