目的利用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建與人甲基丙二酸血癥cblC型W203X突變型一致的小鼠模型。方法通過BLAST比對(duì)人和小鼠cblC基因和蛋白序列的保守性,應(yīng)用CRISPR/Cas9技術(shù)進(jìn)行小鼠受精卵顯微注射,獲得雜合子F1代小鼠,F1代小鼠通過雜交獲得W203X純合突變型小鼠,并對(duì)純合突變型、同窩雜合型及野生型3種類型小鼠進(jìn)行血代謝產(chǎn)物丙酰肉堿檢測(cè)。結(jié)果人和小鼠甲基丙二酸血癥cblC型的致病基因MMACHC的核苷酸和氨基酸序列高度保守。通過CRISPR/Cas9技術(shù)成功獲得W203X純合突變型小鼠,該小鼠模型在生后24 h丙酰肉堿明顯升高（P<0.001）。結(jié)論利用CRISPR/Cas9技術(shù)成功構(gòu)建了與人甲基丙二酸血癥cblC型W203X突變型一致的小鼠模型。[中國(guó)當(dāng)代兒科雜志,2019,21（8）:824-829] 

【文章來源】：中國(guó)當(dāng)代兒科雜志. 2019,21(08)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要試劑與儀器
    1.2 CRISPR/Cas9系統(tǒng)的設(shè)計(jì)
    1.3 sgRNA的體外合成及活性檢測(cè)
    1.4 同源重組模板（Donor質(zhì)粒）的構(gòu)建及體外轉(zhuǎn)錄
    1.5 小鼠受精卵顯微注射
    1.6 小鼠出生及基因型鑒定
    1.7 穩(wěn)定遺傳的點(diǎn)突變小鼠品系的建立
    1.8 純合子小鼠血代謝產(chǎn)物檢測(cè)
    1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 MMACHC基因在人和小鼠中保守性分析
    2.2 sgRNA靶點(diǎn)的設(shè)計(jì)原則及其選擇
    2.3 CRISPR/Cas9介導(dǎo)的基因敲入獲得W203X純合突變小鼠
    2.4 W203X純合突變小鼠血代謝產(chǎn)物分析
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[4]甲基丙二酸尿癥cblC型合并同型半胱氨酸血癥的臨床與實(shí)驗(yàn)室研究進(jìn)展[J]. 劉玉鵬,楊艷玲.  中華兒科雜志. 2013 (04)
[5]甲基丙二酸血癥伴同型半胱氨酸血癥患兒臨床及基因突變分析[J]. 韓連書,王斐,胡宇慧,葉軍,邱文娟,張雅芬,高曉嵐,王瑜,金晶,顧學(xué)范.  中華內(nèi)分泌代謝雜志. 2009 (04)



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