本文關(guān)鍵詞：消減調(diào)節(jié)性T細胞增強幽門螺桿菌疫苗的免疫保護作用機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 幽門螺桿菌（Helicobacter pylori,Hp）感染世界約50%人口，并與慢性活動性胃炎、胃潰瘍和胃癌密切聯(lián)系。Hp感染的機體中存在特異性調(diào)節(jié)性T細胞(regulatory T cells，Treg)，抑制機體對Hp的過度免疫應(yīng)答，但同時造成機體對Hp的免疫無能。本研究擬通過消減小鼠Treg細胞，研究小鼠Treg細胞在抗Hp感染的免疫保護的作用機制；同時CpG-ODN作為免疫佐劑，研究CpG-ODN能否通過TLR9通路逆轉(zhuǎn)Treg細胞的抑制功能，闡明CpG-ODN增強疫苗免疫保護的機制。 方法： 1、調(diào)節(jié)性T細胞對Hp疫苗免疫保護作用機制研究：19只SPF級C57BL/6小鼠隨機分成3組，①WCS+anti-CD25組：注射Hp全細胞裂解物（WCS）和弗氏佐劑的混合液；②WCS組：注射WCS和弗氏佐劑的混合液；③PBS對照組：注射PBS和弗氏佐劑的混合液。其中WCS+anti-CD25組在免疫前4d注射抗CD25抗體，1W后加強免疫。末次免疫后4W采集小鼠血液，，間接ELISA檢測抗Hp抗體IgG、IgG1和IgG2a水平。用Hp菌液攻擊小鼠，末次攻擊4W后處死小鼠，胃組織Hp定量細菌培養(yǎng)評價Hp的定植水平；流式細胞術(shù)分析脾細胞中CD4+CD25+Treg細胞、CD80+、CD19+和CD8a+細胞；ELISA測定脾細胞上清IFN-γ、IL-4、IL-12和IL-17水平。 2、CpG-ODN佐劑增強Hp疫苗的免疫保護效果研究：28只SPF級C57BL/6小鼠隨機分成4組①PBS對照組；②WCS組；③WCS+ODN2088組；④WCS+ODN1826組。用WCS免疫小鼠,1W后加強免疫。末次免疫后4W采集小鼠血液，間接ELISA檢測抗Hp抗體IgG、IgG1和IgG2a水平。用Hp菌液攻擊小鼠，末次攻擊4W后處死小鼠，胃組織Hp定量細菌培養(yǎng)評價Hp的定植水平；流式分析脾細胞中CD4+CD25+Treg細胞、CD80+、CD19+和CD8a+細胞；并測定脾細胞上清IFN-γ、IL-4、IL-12和IL-17水平。 結(jié)果： 1、調(diào)節(jié)性T細胞對Hp疫苗免疫保護作用機制研究： 1、1疫苗免疫后，小鼠產(chǎn)生抗特異性抗體IgG，且WCS+anti-CD25組誘導IgG水平明顯高于WCS組（P＜0.01），WCS+anti-CD25組小鼠血清IgG1，IgG2a也顯著高于WCS組（P＜0.01），且血清IgG1，IgG2a滴度變化基本與IgG類似。 1、2流式細胞儀分析脾細胞中CD4+CD25+Treg細胞，WCS+anti-CD25組低于WCS組（P＜0.01）；CD8a+細胞和CD80+細胞，WCS+anti-CD25組高于WCS組（P＜0.05）；CD19+細胞，WCS+anti-CD25組和WCS組無顯著差異（P＞0.05）。 1、3WCS+anti-CD25組Hp定值密度低于WCS組（P＜0.01），提示W(wǎng)CS+anti-CD25組免疫小鼠抵抗Hp攻擊效果優(yōu)于WCS組。 1、4與WCS組比較，WCS+anti-CD25組脾細胞上清分泌IFN-γ、IL-4、IL-12和IL-17水平均顯著增高（P＜0.01），說明去除Treg細胞有助于提高Th1和Th2類細胞因子的分泌水平。 2、CpG-ODN佐劑增強Hp疫苗的免疫保護效果： 2、1疫苗免疫后，小鼠產(chǎn)生抗特異性抗體IgG，且WCS+ODN1826組誘導IgG、IgG1，IgG2a顯著高于WCS組（P＜0.01）。 2、2流式細胞儀分析脾細胞中CD4+CD25+Treg細胞，WCS+ODN1826組低于WCS組（P＜0.01）；CD8a+細胞，WCS+ODN1826組高于WCS組（P＜0.01）；CD19+細胞和CD80+細胞，WCS+ODN1826組和WCS組無顯著性差異（P＞0.05）。 2、3WCS+ODN1826組Hp定值密度低于WCS組（P＜0.01）。 2、4與WCS組比較，WCS+ODN1826組脾臟細胞上清分泌IFN-γ、IL-4、IL-12和IL-17水平均顯著增高（P＜0.01）。 結(jié)論： 1、通過消減Treg細胞能顯著增強Hp疫苗誘發(fā)的Th1和Th2混合的細胞免疫和體液免疫應(yīng)答，以及增強CD8+T細胞的殺傷功能和抗原提呈細胞的遞呈作用，從而增強Hp疫苗的免疫保護作用。 2、CpG-ODN通過激活TLR9信號通路，通過減少Treg細胞數(shù)量，逆轉(zhuǎn)Treg細胞免疫抑制功能， CpG-ODN可能通過活化巨噬細胞、DC，促進IL-6分泌，間接抑制Treg的功能，產(chǎn)生偏向Th1型的免疫應(yīng)答，從而增強Hp疫苗的免疫保護作用。
【關(guān)鍵詞】：幽門螺桿菌 調(diào)節(jié)性T細胞 疫苗 佐劑 免疫保護
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 英文縮略詞表4-6
• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 第一部分 消減 Treg 細胞功能對增強幽門螺桿菌免疫保護作用機制研究12-33
• 前言12-14
• 材料與方法14-20
• 結(jié)果20-28
• 討論28-33
• 第二部分 CpG-ODN 佐劑增強幽門螺桿菌疫苗的免疫保護作用初步研究33-50
• 前言33-34
• 材料與方法34-36
• 結(jié)果36-46
• 討論46-50
• 全文結(jié)論50-51
• 參考文獻51-57
• 綜述57-65
• 參考文獻62-65
• 致謝65

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本文編號：329845