本文關(guān)鍵詞：蜂毒干預(yù)膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎小鼠模型的蛋白質(zhì)組學(xué)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：蛋白質(zhì)組學(xué)研究采用雙向電泳技術(shù)、質(zhì)譜技術(shù)和生物信息學(xué)等技術(shù),從整體上、全面的、動(dòng)態(tài)的分析和比較機(jī)體在不同狀態(tài)下蛋白質(zhì)種類和數(shù)量的改變,可借以探索某種疾病的發(fā)病機(jī)制或藥物的作用機(jī)理。本研究以膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎小鼠為模型,通過蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù),探討蜂毒治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎發(fā)揮療效的作用機(jī)制。主要研究?jī)?nèi)容及學(xué)術(shù)貢獻(xiàn)如下：1.蜂毒對(duì)膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎小鼠的藥效作用研究：首先采用牛Ⅱ型膠原與完全弗氏佐劑等比例混合建立關(guān)節(jié)炎小鼠模型,蜂毒干預(yù)組的小鼠按高、中、低劑量(2 mg·kg-1、1 mg·kg-1 和0.5 mg·kg-1)背部皮下注射蜂毒溶液,模型和正常對(duì)照組注射生理鹽水。然后采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18和MMP-3含量。結(jié)果顯示,給藥期間模型組中各血清指標(biāo)極顯著高于正常對(duì)照組；給藥三周后蜂毒高劑量組(2mg·kg-1)中各血清指標(biāo)均顯著降低,與正常對(duì)照組無顯著性差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明蜂毒可以抑制血清中炎性細(xì)胞因子合成,對(duì)膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎小鼠具有一定的治療作用。2.血清蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法研究：首先建立血清蛋白提取方法,去除高豐度蛋白；然后對(duì)雙向電泳分析過程中各關(guān)鍵步驟進(jìn)行優(yōu)化處理,包括不同規(guī)格IPG膠條的選擇、上樣量和等電聚焦條件的選擇及優(yōu)化。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定雙向電泳的樣品制備方法為三氯乙酸-丙酮(TCA/acetone)沉淀法提取血清蛋白,選用17 cm pH 4-7的IPG膠條進(jìn)行等電聚焦,上樣量800μg,凝膠染色方法為膠體考馬斯亮藍(lán)染色法。3.蜂毒干預(yù)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎小鼠模型的蛋白質(zhì)組學(xué)研究：采用上述雙向電泳技術(shù)對(duì)給藥前和給藥三周的模型、正常對(duì)照組及蜂毒高劑量組(2 mg·kg-1)小鼠血清蛋白進(jìn)行分離。圖像分析結(jié)果顯示,給藥前模型組與正常對(duì)照組間存在165個(gè)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)；給藥三周后與正常對(duì)照組相比,模型組中有36個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)上調(diào),33個(gè)點(diǎn)表達(dá)下調(diào)；蜂毒高劑量組有28個(gè)點(diǎn)表達(dá)上調(diào),23個(gè)點(diǎn)表達(dá)下調(diào)；與模型對(duì)照組相比,蜂毒高劑量組中有33個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)上調(diào),44個(gè)點(diǎn)表達(dá)下調(diào)。對(duì)表達(dá)量差異顯著的蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF/TOF-MS質(zhì)譜鑒定,成功確定了22種蛋白質(zhì),根據(jù)其功能可以分為以下幾類,細(xì)胞骨架蛋白：γ-肌動(dòng)蛋白(gamma-Actin);物質(zhì)運(yùn)輸相關(guān)蛋白：轉(zhuǎn)鐵蛋白(Serotransferrin)、維生素D結(jié)合蛋白(Vitamin D-binding protein,VDBP);炎癥相關(guān)蛋白：觸珠蛋白亞型CRA-b (Haptoglobin, isoform CRA-b)、α鏈觸珠蛋白(Haptoglobin alpha chain)和激肽原-1亞型2(Kininogen-1 isoform 2);代謝功能相關(guān)的蛋白：載脂蛋白A-I前原蛋白(Apolipoprotein A-I preproprotein),血液蛋白：血清白蛋白前體(serum albumin precursor)。通過對(duì)差異蛋白的功能分析,揭示了蜂毒通過調(diào)節(jié)多種蛋白質(zhì)與代謝系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)間的相互作用,促進(jìn)細(xì)胞凋亡以及抑制炎性因子合成等途徑發(fā)揮抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用的機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：蜂毒 類風(fēng)濕型性關(guān)節(jié)炎 蛋白質(zhì)組學(xué)
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R593.22;R-332
【目錄】：

• 縮略詞簡(jiǎn)表7-8
• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 第一章 緒論12-20
• 1.1 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)理研究現(xiàn)狀13-15
• 1.1.1 感染因素13-14
• 1.1.2 遺傳因素14
• 1.1.3 細(xì)胞因子與RA的關(guān)系14
• 1.1.4 免疫系統(tǒng)與RA的關(guān)系14-15
• 1.1.5 細(xì)胞凋亡與RA的關(guān)系15
• 1.2 蜂毒治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的研究進(jìn)展15-16
• 1.3 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的蛋白質(zhì)組學(xué)研究進(jìn)展16-19
• 1.3.1 CIA模型炎癥關(guān)節(jié)的蛋白質(zhì)組學(xué)研究16-17
• 1.3.2 滑膜組織蛋白質(zhì)組學(xué)研究17
• 1.3.3 滑膜成纖維細(xì)胞的蛋白質(zhì)組學(xué)研究17-18
• 1.3.4 體液(滑液、血漿、血清)蛋白質(zhì)組學(xué)研究18-19
• 1.4 本研究的主要內(nèi)容19-20
• 第二章 蜂毒對(duì)CIA小鼠模型藥效作用研究20-28
• 2.1 材料與方法20-22
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑及儀器20-21
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法21-22
• 2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果22-25
• 2.2.1 蜂毒對(duì)血清中TNF-α含量的影響22
• 2.2.2 蜂毒對(duì)血清中IL-1β含量的影響22-23
• 2.2.3 蜂毒對(duì)血清中IL-6含量的影響23-24
• 2.2.4 蜂毒對(duì)血清中IL-18含量的影響24-25
• 2.2.5 蜂毒對(duì)血清中MMP-3含量的影響25
• 2.3 討論25-27
• 2.4 結(jié)論27-28
• 第三章 血清蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法的研究28-36
• 3.1 樣品制備方法的選擇29-31
• 3.2 IPG膠條的選擇31-32
• 3.3 上樣量的選擇32-34
• 3.4 等電聚焦條件的選擇與優(yōu)化34-35
• 3.5 凝膠圖像分析與質(zhì)譜鑒定35-36
• 第四章 蜂毒干預(yù)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎小鼠模型的蛋白質(zhì)組學(xué)研究36-48
• 4.1 材料與方法36-40
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑及儀器36-37
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法37-40
• 4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-45
• 4.2.1 2-DE凝膠圖像分析結(jié)果40-42
• 4.2.2 質(zhì)譜鑒定結(jié)果42-45
• 4.3 討論45-47
• 4.4 結(jié)論47-48
• 第五章 總結(jié)與展望48-50
• 5.1 總結(jié)48
• 5.2 展望48-50
• 參考文獻(xiàn)50-57
• 附件57-62
• 致謝62

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 魯靜,侯平,張寧,馬曉春,趙麗娟;關(guān)節(jié)炎小鼠關(guān)節(jié)組織提取物對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖影響及mVEGF的關(guān)系[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2002年06期

2 陳斌;黃姍;胡建立;孫昭;韓欽;宋增璇;趙春華;;Flk-1~+骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植上調(diào)白細(xì)胞介素6水平:是否同時(shí)加重了膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎小鼠的癥狀?[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2010年06期

3 許華;王建;王遲鵑;張麗媛;常國(guó)強(qiáng);藺亞妮;張洪菊;張玉娟;張海瑞;李慶華;龐天翔;;含笑內(nèi)酯對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎小鼠模型治療作用研究[J];中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2014年03期

4 劉維超;李玲玉;萬春平;李兆福;鄭喜;祁燕;吳晶金;彭江云;;蠲痹顆粒對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎小鼠Th17/Treg細(xì)胞平衡調(diào)控作用的研究[J];風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎;2014年04期

5 史燁;馬潔;蘇兆亮;楊先知;馬斌;田潔;劉艷;劉青玲;邵啟祥;許化溪;呂力為;王勝軍;;膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎小鼠Th17細(xì)胞的檢測(cè)及意義[J];江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2010年04期

6 羅心靜;莫選榮;周玲玲;;NF-κB和AP-1在膠原性關(guān)節(jié)炎小鼠滑膜組織中的表達(dá)及活性升高[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2012年11期

7 牛廣華;高玉潔;孫旭;高明利;郭鶴;呂丹;都靜;;異種雙份臍血干細(xì)胞移植對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎小鼠IL-4及TNF-α mRNA表達(dá)的影響[J];國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2012年12期

8 趙穎杰;潘琳;王吉波;;RNA干擾實(shí)驗(yàn)性治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎小鼠模型的建立[J];山東醫(yī)藥;2009年27期

9 牛廣華;高玉潔;孫旭;都靜;明彩榮;高明利;;異種臍血干細(xì)胞移植膠原性關(guān)節(jié)炎小鼠Bcl-2和Bax的表達(dá)(英文)[J];中國(guó)組織工程研究;2012年10期

10 徐世杰,呂愛平,張春英,王安民,崔巍,滕靜如,李艷,王少君;切除卵巢所致腎虛對(duì)Ⅱ型膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎小鼠IL-2和IL-6含量的影響[J];中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志;1998年10期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 俞海國(guó);劉詢薇;錢小青;張雅媛;;Wnt5a及DKK-1在膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎小鼠中的表達(dá)及意義[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（下冊(cè)）[C];2012年

2 俞海國(guó);錢小青;劉洵薇;;Wnt5a及DKK-1在膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎小鼠中的表達(dá)及意義[A];第17次全國(guó)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 唐璐;人腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)基因關(guān)節(jié)炎小鼠模型構(gòu)建及應(yīng)用[D];廣東藥學(xué)院;2015年

2 張娜;黃芪糖蛋白干預(yù)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎小鼠T細(xì)胞免疫應(yīng)答的實(shí)驗(yàn)研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

3 孫杰;蜂毒干預(yù)膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎小鼠模型的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2014年

4 胡銀秀;CCL20在膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎小鼠中的表達(dá)及抗CCL20對(duì)關(guān)節(jié)炎小鼠的治療作用[D];蘇州大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：蜂毒干預(yù)膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎小鼠模型的蛋白質(zhì)組學(xué)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：329842