發(fā)布時間：2017-04-27 03:00

  本文關(guān)鍵詞：6-羥多巴胺去除股動脈交感神經(jīng)的動物模型建立及相關(guān)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：多種原因所導(dǎo)致的大范圍骨缺損、骨不連的修復(fù)，一直是骨科領(lǐng)域的一項世界性難題，，至今尚未得到有效解決。目前常用的修復(fù)方法有自體骨移植和異體骨移植，但這些方法都存有各自缺點，限制了其臨床應(yīng)用，難以達到滿意的效果。骨組織工程的出現(xiàn)提供了全新的思路和方法，采用組織工程技術(shù)構(gòu)建的骨移植物可以滿足缺損的不同形狀和大小要求。 血液的供應(yīng)和神經(jīng)支配在人體組織和器官的發(fā)生、發(fā)育和成熟過程中都起到至關(guān)重要的作用；血管化、神經(jīng)化的組織工程骨的構(gòu)建是其由實驗室走向臨床的重要環(huán)節(jié)和關(guān)鍵技術(shù)。我們以往的研究證實了血管束、感覺神經(jīng)束移植在組織工程骨神經(jīng)化的形成中具有同等的作用，并可顯著促進骨的形成。然而，該血管束富含交感神經(jīng)纖維，其神經(jīng)化作用是血管本身的作用、還是血管壁上的交感神經(jīng)的作用？仍然是一個未知的問題。因此，本實驗通過6-OHDA化學(xué)性去交感神經(jīng)的方法去除兔股動脈交感神經(jīng)纖維，建立兔股動脈去交感神經(jīng)模型，對比去交感神經(jīng)血管與含交感神經(jīng)血管對組織工程骨神經(jīng)化的作用及其骨缺損修復(fù)效果進行單因素分析，以探明血管束的神經(jīng)化作用究竟是血管本身的作用，還是血管壁上交感神經(jīng)的獨立作用。 第一部分明確股動脈、股靜脈交感神經(jīng)分布情況，確定6-OHDA最佳濃度 目的： 1、通過乙醛酸單胺熒光染色方法明確股動脈、股靜脈交感神經(jīng)分布。 2、通過對比不同濃度6-OHDA去交感神經(jīng)效果，確定藥物最佳濃度。 方法： 1、獲取健康新西蘭兔的股動脈、股靜脈，剔除周圍組織，使用乙醛酸激發(fā)單胺熒光染色檢測股動脈、股靜脈交感神經(jīng)分布。2、分離新西蘭兔股動脈采用不同濃度藥物處理。按照所使用6-OHDA濃度的不同，將實驗組分為0.05mg/mL、0.075mg/mL、0.1mg/mL和0.125mg/mL組，每組各4只兔子。實驗組采用Krebs緩沖液含不同濃度的6-OHDA和質(zhì)量百分比為0.1%的抗壞血酸處理；對照組采用Krebs緩沖液僅含0.1%的抗壞血酸，對照組使用4只兔子。分別用乙醛酸激發(fā)單胺熒光染色檢測股動脈組織變化、交感神經(jīng)分布，并通過Western blot表明檢測酪酸羥化酶（TH）蛋白表達水平的差異。 結(jié)果： 1、乙醛酸染色表明：股動脈、股靜脈中均有交感神經(jīng)分布，股動脈有密集的交感神經(jīng)呈網(wǎng)狀和放射狀分布，而股靜脈交感神經(jīng)分布比較稀疏。2、乙醛酸染色表明：與對照組相比，0.05mg/mL和0.075mg/mL組交感神經(jīng)減少不明顯，0.1mg/mL和0.125mg/mL組交感神經(jīng)顯著減少；對照組、0.05mg/mL組、0.075mg/mL組、0.1mg/mL組和0.125mg/mL組熒光OD值平均分別為32.43±8.02、31.05±7.81、25.76±8.60、14.98±3.89、15.36±5.20。0.05mg/mL和0.075mg/mL組交感神經(jīng)含量與對照組相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；0.1mg/mL和0.125mg/mL組交感神經(jīng)含量與對照組相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。0.1mg/mL組和0.125mg/mL組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。TH與內(nèi)參蛋白β-actin熒光強度掃描結(jié)果比值的統(tǒng)計結(jié)果：對照組、0.05mg/mL組、0.075mg/mL組、0.1mg/mL組和0.125mg/mL組TH/β-actin比值平均分別為0.70±0.08、0.63±0.12、0.61±0.11、0.19±0.08、0.19±0.06。Western blot表明：0.1mg/mL組和0.125mg/mL組與對照組相比蛋白表達量均顯著減少（P0.05），0.05mg/mL組和0.075mg/mL組與對照組相比，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論： 1、股動脈、股靜脈中均有大量交感神經(jīng)纖維分布。2、6-OHDA去除股動脈交感神經(jīng)的最佳濃度為0.1mg/ml。 第二部分股動脈去交感神經(jīng)動物模型的建立 目的： 探討6-OHDA在體內(nèi)去除兔股動脈交感神經(jīng)的可行性，旨在為研究單純血管本身在組織工程骨中有無神經(jīng)化的作用提供理想的動物實驗?zāi)Ｐ汀?方法： 分離新西蘭兔股動脈采用不同藥物處理。實驗組采用Krebs緩沖液含0.1mg/mL6-OHDA和質(zhì)量百分比為0.1%的抗壞血酸處理；對照組采用Krebs緩沖液僅含0.1%的抗壞血酸，對照組使用4只兔子。為確定藥物干預(yù)后交感神經(jīng)恢復(fù)的時間，將實驗組分為7d、14d和28d取材組，每組各4只兔子。分別用蘇木精-伊紅(HE)染色法、乙醛酸激發(fā)單胺熒光染色檢測股動脈組織變化、交感神經(jīng)分布，并通過Westernblot表明檢測酪酸羥化酶（TH）和神經(jīng)肽Y（NPY）蛋白表達水平的差異。 結(jié)果： HE染色表明：與對照組相比，實驗組股動脈組織血管壁結(jié)構(gòu)完整，無明顯形態(tài)學(xué)改變。乙醛酸染色表明：對照組股動脈可見大量交感神經(jīng)呈網(wǎng)狀和放射狀分布；7d和14d取材組交感神經(jīng)幾乎不可見，28d取材組有少量交感神經(jīng)；對照組、7d取材組、14d取材組及28d取材組熒光OD值平均分別為32.40±7.42、15.30±3.79、15.20±2.18、23.65±8.20。3個取材組交感神經(jīng)含量與對照組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；28d組與7d、14d組相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。TH和NPY與內(nèi)參蛋白β-actin熒光強度掃描結(jié)果比值的統(tǒng)計結(jié)果：對照組、7d取材組、14d取材組及28d取材組TH/β-actin比值平均分別為0.70±0.08、0.19±0.08、0.20±0.06、0.33±0.06；對照組、7d取材組、14d取材組及28d取材組NPY/β-actin比值平均分別為0.68±0.14、0.14±0.02、0.17±0.02、0.53±0.10。Western blot表明：兩種蛋白表達量變化趨勢相同，各實驗組與對照組相比蛋白表達量均顯著減少（P0.05），28d組與7d、14d組相比表達量增多，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論： 體內(nèi)局部應(yīng)用6-OHDA可有效去除股動脈交感神經(jīng)纖維，是一種可行的血管壁去交感神經(jīng)實驗方法；建立了一個理想的化學(xué)去股動脈交感神經(jīng)的動物模型。
【關(guān)鍵詞】：股動脈 交感神經(jīng)系統(tǒng) 羥多巴胺
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R-332;R651.3
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 中文摘要6-10
• Abstract10-14
• 前言14-15
• 文獻回顧15-23
• 1 骨組織工程15-16
• 2 交感神經(jīng)系統(tǒng)對骨代謝的影響16
• 3 交感神經(jīng)切除術(shù)16-23
• 第一部分 明確股動脈、股靜脈交感神經(jīng)分布情況；確定 6-OHDA 最佳濃度23-36
• 1 材料與儀器23-24
• 2 實驗方法24-27
• 3 結(jié)果27-32
• 4 討論32-36
• 第二部分 股動脈去交感神經(jīng)動物模型的建立36-48
• 1 材料與儀器36-37
• 2 實驗方法37-39
• 3 結(jié)果39-43
• 4 討論43-48
• 小結(jié)48-49
• 參考文獻49-59
• 個人簡歷和研究成果59-60
• 致謝60

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王偉;張麗娟;李燕;黃海霞;劉萍;曲瑞瑤;;帕金森病模型大鼠結(jié)腸電-機械活動的改變[J];首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2009年04期

2 吳珊鵬;林欣;;動脈外膜交感神經(jīng)網(wǎng)剝脫切除術(shù)后肢體骨內(nèi)壓、血液流變學(xué)、神經(jīng)肽改變的實驗研究[J];中國醫(yī)藥導(dǎo)報;2010年36期

  本文關(guān)鍵詞：6-羥多巴胺去除股動脈交感神經(jīng)的動物模型建立及相關(guān)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：329734