本文關(guān)鍵詞：納微球新型佐劑對HPV L1五聚體蛋白的包埋及其免疫效應(yīng)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：人乳頭狀瘤病毒（HPV, human papillomavirus）感染是引起尖銳濕疣、宮頸癌等疾病的主要病原。研究和開發(fā)有效的HPV疫苗是清除和阻斷HPV感染的行之有效的策略。與已上市的以VLP為靶抗原的人乳頭狀瘤病毒疫苗相比，從大腸桿菌中純化獲得的HPV L1五聚體是一種很有潛力的低成本宮頸癌及生殖器疣等疾病的預(yù)防性候選疫苗。近些年來，生物可降解的納微粒子和脂質(zhì)體被廣泛應(yīng)用于藥物遞送與佐劑系統(tǒng)。本文以聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）和lecithin-PLGA為載體材料，包埋HPV L1五聚體抗原蛋白，構(gòu)建粒徑均一的PLGA-Ag和lecithin-PLGA納微球，探討其作為疫苗佐劑時(shí)對免疫效果的影響。本論文完成的工作主要包括以下三個(gè)方面： 1.采用快速膜乳化技術(shù)結(jié)合溶劑萃取法成功制備了PLGA載HPV L1五聚體抗原微球，并考察了內(nèi)水相pH值、內(nèi)水相緩沖體系濃度、初乳制備方式、抗原濃度等對PLGA微球包埋抗原的包埋率和裝載量的影響。在此基礎(chǔ)上，制備了粒徑分別為0.43μm和1.38μm的PLGA載抗原微球，其表面圓整光滑，載藥量分別為66.56μg/mg、47.335μg/mg，包埋率分別是73.78%、65.69%。 2.考察載HPV L1五聚體抗原PLGA微球粒徑對體內(nèi)免疫應(yīng)答強(qiáng)度和水平的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同粒徑的載抗原PLGA微球產(chǎn)生了與鋁鹽佐劑相似的中和抗體和特異性抗體IgG滴度和極顯著高于鋁鹽佐劑的IFN-γ水平（P0.01），表明PLGA微球在增強(qiáng)體液免疫應(yīng)答的同時(shí)，更有助于增強(qiáng)細(xì)胞免疫應(yīng)答。另外，大粒徑載抗原PLGA微球組（1.38μm）產(chǎn)生的IgG滴度（2.3倍）和中和抗體滴度（3.8倍）顯著高于小粒徑載抗原PLGA納微球組（0.43μm）(P0.05或P0.01)。在細(xì)胞因子方面，大粒徑的載抗原PLGA微球（1.38μm）能更顯著提高IL-6（4.7倍）、IL-4（1.5倍）的分泌水平，增強(qiáng)Th2型免疫應(yīng)答；而小粒徑載抗原PLGA微球（0.43μm）顯著提升IFN-γ的分泌水平（2.1倍），增強(qiáng)Th1型免疫應(yīng)答。這表明大粒徑載抗原PLGA微球有助于體液免疫應(yīng)答的提升，而小粒徑載抗原PLGA微球則有助于細(xì)胞免疫應(yīng)答的提升。 3.采用快速膜乳化技術(shù)結(jié)合溶劑揮發(fā)法成功制備了高載藥量和高包埋率的lecithin-PLGA載HPV L1五聚體抗原的復(fù)合納微顆粒，誘導(dǎo)了顯著高于鋁鹽佐劑的中和抗體滴度（P0.05）和極顯著高于PLGA納微球佐劑的中和抗體滴度和特異性抗體IgG滴度（P0.01）。在細(xì)胞因子方面，lecithin-PLGA-Ag納微球誘導(dǎo)了顯著高于鋁鹽佐劑的IFN-γ的分泌水平（P0.05），，但顯著低于PLGA載抗原微球；同時(shí)lecithin-PLGA-Ag納微球誘導(dǎo)了顯著高于鋁鹽佐劑的IL-6水平（P0.05）和相似的IL-4水平，以及顯著高于載抗原PLGA微球的IL-4和IL-6分泌水平（P0.05）。這表明lecithin-PLGA載抗原復(fù)合納微顆粒是一個(gè)很有潛力的疫苗遞送與佐劑系統(tǒng)，它能產(chǎn)生優(yōu)于鋁鹽佐劑和PLGA納微球的高水平的抗體滴度，以及顯著高于鋁鹽佐劑的細(xì)胞免疫應(yīng)答水平。
【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 圖表清單12-14
• 第一章 緒論14-37
• 1.1 人乳頭狀瘤病毒概述及研究進(jìn)展14-22
• 1.1.1 人乳頭狀瘤病毒概述14
• 1.1.2 人乳頭狀瘤病毒分子生物學(xué)特征14-17
• 1.1.3 人乳頭狀瘤病毒的分類與型別17-18
• 1.1.4 人乳頭狀瘤病毒的相關(guān)疾病18-20
• 1.1.5 人乳頭狀瘤病毒疫苗現(xiàn)狀及研究進(jìn)展20-22
• 1.2 疫苗學(xué)免疫基礎(chǔ)22-28
• 1.2.1 固有免疫23-25
• 1.2.2 適應(yīng)性免疫25-26
• 1.2.3 體液免疫應(yīng)答26
• 1.2.4 細(xì)胞免疫應(yīng)答26-28
• 1.3 疫苗佐劑概述28-33
• 1.3.1 疫苗佐劑的種類及研究現(xiàn)狀28-30
• 1.3.2 聚合物納微球作為疫苗佐劑的研究現(xiàn)狀30-33
• 1.4 立題依據(jù)和目標(biāo)33-37
• 1.4.1 論文立題依據(jù)33-35
• 1.4.2 論文工作目標(biāo)的策略35-37
• 第二章 粒徑均一、大小可控的載 HPV L1 五聚體 PLGA 納微球的制備37-49
• 2.1 引言37
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料和方法37-40
• 2.2.1 試劑與儀器37-38
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法38-40
• 2.3 結(jié)果分析40-48
• 2.3.1 內(nèi)水相 pH 值對抗原包埋的影響40-41
• 2.3.2 內(nèi)水相緩沖體系濃度對抗原包埋的影響41-42
• 2.3.3 納微球初乳制備方式對抗原包埋的影響42-44
• 2.3.4 改變抗原濃度對抗原包埋的影響44-45
• 2.3.5 不同粒徑載 HPV L1 五聚體的 PLGA 納微球的制備45-47
• 2.3.6 優(yōu)選條件下載抗原納微球的體外釋放行為47-48
• 2.4 本章小結(jié)48-49
• 第三章 PLGA 納微球粒徑對 HPV 疫苗免疫效果的調(diào)控研究49-63
• 3.1 引言49-51
• 3.2 材料與方法51-55
• 3.2.1 材料與儀器51-52
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法52-55
• 3.3 結(jié)果分析55-60
• 3.3.1 納微球粒徑對抗體水平的影響55-56
• 3.3.2 納微球粒徑對脾細(xì)胞上清中細(xì)胞因子水平的影響—Luminex 法56-58
• 3.3.3 納微球粒徑對脾細(xì)胞上清中細(xì)胞因子水平的影響—ELISA 法58-59
• 3.3.4 納微球粒徑對脾細(xì)胞中分泌相關(guān)細(xì)胞因子的細(xì)胞數(shù)的影響59-60
• 3.4 討論60-61
• 3.5 本章小結(jié)61-63
• 第四章 載 HPV L1 五聚體抗原的 lecithin-PLGA 微球的免疫效果研究63-74
• 4.1 前言63-64
• 4.2 實(shí)驗(yàn)64-68
• 4.2.1 試劑與儀器64-65
• 4.2.2 實(shí)驗(yàn)方法65-68
• 4.3 結(jié)果分析68-72
• 4.3.1 PLGA 載抗原微球表征68
• 4.3.2 納微球抗體水平分析68-69
• 4.3.3 納微球脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子水平分析—Luminex 法69-70
• 4.3.4 納微球?qū)ζ⒓?xì)胞上清中細(xì)胞因子水平分析—ELISA 法70-71
• 4.3.5 納微球粒徑對脾細(xì)胞中分泌相關(guān)細(xì)胞因子的細(xì)胞數(shù)的影響71-72
• 4.4 討論72-73
• 4.5 本章小結(jié)73-74
• 結(jié)論與展望74-77
• 1. 結(jié)論74-75
• 2. 論文創(chuàng)新點(diǎn)75
• 3. 展望75-77
• 參考文獻(xiàn)77-86
• 攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果86-87
• 致謝87-88
• 附錄88

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 殷德政;熊卓;張人佶;顏永年;劉利;;相分離法制備PLGA微米-納米多孔結(jié)構(gòu)研究[J];材料導(dǎo)報(bào);2006年S2期

2 曾燁婧;王連艷;馬光輝;馬潤宇;;快速膜乳化法制備載紫杉醇聚乳酸類微球[J];過程工程學(xué)報(bào);2010年03期

3 許雪梅;;人乳頭瘤病毒及宮頸癌疫苗的研究——解讀2008年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2008年10期

4 龔向東,葉順章,張君炎,張國成,邵長庚,梁國鈞,姜文華,夏強(qiáng),王全佩;1991～2001年我國性病流行病學(xué)分析[J];中華皮膚科雜志;2002年03期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉大維;預(yù)防性人乳頭瘤病毒病毒樣顆粒疫苗的研究[D];吉林大學(xué);2008年

  本文關(guān)鍵詞：納微球新型佐劑對HPV L1五聚體蛋白的包埋及其免疫效應(yīng)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：329451