發(fā)布時間：2017-04-25 20:17

  本文關鍵詞：脲原體感染與非淋菌性尿道炎的Meta分析及PCR-ELISA檢測法的初步建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 探討解脲脲原體(Ureaplasma urealyticum, Uu)、微小脲原體(Ureaplasma parvum, Up)感染與男性非淋菌性尿道炎(nongonococcal urethritis, NGU)的相關性,通過系統(tǒng)性回顧分析,揭示在男性非淋菌性尿道炎中Uu, Up感染對疾病的作用,為鑒別檢測Uu和Up提供依據(jù)。通過將傳統(tǒng)的PCR檢測方法與微孔板核酸雜交以及酶顯色技術相結合,建立起用于Uu, Up檢測和鑒別的PCR-ELISA方法,并對該方法進行初步的臨床應用性評價。 方法 采用Meta分析的方法,檢索2000-2011年公開發(fā)表的有關Uu,Up感染與男性非淋菌性尿道炎的文獻,并應用Review Manager5.0軟件進行綜合定量評價,計算其優(yōu)勢比(OR)等。應用生物素標記的U4,U5引物進行PCR擴增,利用Primer在線軟件反向查出Uu,Up擴增出的核酸序列并根據(jù)NCBI在線Blast軟件設計出Uu,Up特異性捕獲探針,將捕獲探針包被到DNA-BINDTM微孔板上并與PCR產(chǎn)物進行雜交,引入辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素檢測系統(tǒng)進行顯色,從而初步構建出PCR-ELISA檢測方法。通過對生殖支原體G37、β-溶血性鏈球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌等參考菌和Uu代表菌株血清型8,Up代表菌株血清型3進行PCR-ELISA方法檢測以驗證該方法的特異性。同時隨機選取了天津醫(yī)科大學第二醫(yī)院計劃生育科不孕癥檢查的38例女性陰道拭子樣本用于初步評估本方法的臨床有效性。 結果 本次Meta分析共納入中英文文獻11篇包括病例組研究對象1824例和對照組研究對象1584例。脲原體(Uu+Up)總體感染率與NGU的關系合并OR值為1.23,95%CI(0.91,1.68),顯著性檢驗P=0.18。其中Uu感染與NGU的關系OR值為1.65,95%CI(1.10,2.47,),顯著性檢驗P=0.02,而Up感染與NGU的關系OR值為0.57,95%CI(0.45,0.72),顯著性檢驗P0.00001。本研究自行設計了用于檢測鑒別Uu和Up的捕獲探針,序列如下,Uu捕獲探針：5'AGC AAT TAA CTT CGC TGAAGG C3'; Up捕獲探針：5'GGC AAT TAA TTT CGC TAG TGG T3'。同時利用U4,U5引物對,Uu, Up捕獲探針和DNA-BINDTM微孔板等初步構建出PCR-ELISA法用于檢測和鑒別Uu,Up。在特異性實驗中,本法可較好的區(qū)分檢測Uu和Up,并且不與其他參考菌發(fā)生非特異性擴增或雜交反應。隨后,應用38例隨機選取的女性陰道拭子樣本,初步評估了所建PCR-ELISA方法的臨床有效性,其中檢出陽性樣本26例,包括Up感染21例,Uu感染3例,Uu, Up共感染2例,陰性結果12例,陽性檢出率為68.42%。本方法與傳統(tǒng)的培養(yǎng)法相比,應用Kappa檢驗進行一致性驗證,Kappa值為0.687。以培養(yǎng)法為檢測標準則PCR-ELISA法敏感度為88.89%(24/27),特異度為81.82%(9/11)。 結論 Uu主要分布在NGU組中,與Up相比具有更高的致病力,是男性非淋菌性尿道炎的致病因子之一；而Up則有相對較低的毒性,多以寄居的形式存在。因此,進行Uu和Up區(qū)分檢測對于流行病學調查和致病機制的研究將具有重要意義。本研究將PCR擴增、微孔板核酸雜交和酶顯色技術相結合初步構建出PCR-ELISA檢測方法用于檢測和鑒別Uu, Up。與傳統(tǒng)培養(yǎng)法相比,PCR-ELISA法能有效的進行脲原體的檢測并可同時鑒別出Uu和Up。本方法操作簡單,無需特殊的儀器設備并且所需試劑均為商品化產(chǎn)品。本研究所建立的PCR-ELISA法通過一對特異性捕獲探針將Uu和Up檢測和鑒別出來,與以往的PCR-ELISA法相比無需引入地高辛及其抗體,不僅減少了操作步驟,而且成本經(jīng)濟效應較好,適合推廣到各類基層醫(yī)學微生物實驗室。本法是一種有效的Uu, Up檢出和鑒別工具,可作為目前臨床Uu, Up檢測的重要補充方法。
【關鍵詞】：解脲脲原體 微小脲原體 非淋菌性尿道炎 Meta分析 PCR-ELISA
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R392;R695
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號說明11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 一、解脲脲原體微小脲原體與非淋菌性尿道炎關系Meta的分析15-24
• 1.1 材料和方法15
• 1.1.1 資料來源15
• 1.1.2 文獻納入與剔除標準15
• 1.1.3 統(tǒng)計學處理15
• 1.2 結果15-21
• 1.2.1 文獻基本情況15-16
• 1.2.2 各種研究結果的異質性檢驗16
• 1.2.3 脲原體與NGU的關系16
• 1.2.4 Uu感染與NGU的關系16
• 1.2.5 Up感染與NGU的關系16-21
• 1.3 討論21-23
• 1.4 小結23-24
• 二、PCR-ELISA法檢測鑒別解脲脲原體微小脲原體方法的初步建立24-38
• 2.1 材料和方法24-29
• 2.1.1 實驗材料24-26
• 2.1.2 試驗方法26-29
• 2.1.3 統(tǒng)計學處理29
• 2.2 結果29-34
• 2.2.1 Up,Uu特異性捕獲探針設計29-30
• 2.2.2 PCR-ELISA方法特異性驗證30-31
• 2.2.3 臨床樣本培養(yǎng)結果31
• 2.2.4 臨床樣本PCR-ELISA法檢測結果31-34
• 2.3 討論34-37
• 2.4 小結37-38
• 結論38-39
• 參考文獻39-44
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明44-45
• 附錄45-46
• 綜述46-66
• 綜述參考文獻58-66
• 致謝66

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 曾文軍;陳群;皮紅泉;梅艷娟;王柳均;曹玉平;;解脲脲原體生物群及抗精子抗體與男性不育的相關性探討[J];山東醫(yī)藥;2011年07期

  本文關鍵詞：脲原體感染與非淋菌性尿道炎的Meta分析及PCR-ELISA檢測法的初步建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：327026