本文關(guān)鍵詞：表面電荷對(duì)納微球佐劑效果的影響之細(xì)胞水平研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目前疫苗佐劑的發(fā)展包括優(yōu)化抗原至抗原提呈細(xì)胞（APCs）（如巨噬細(xì)胞）的遞呈途徑。納微球作為佐劑成為近年來(lái)疫苗遞呈系統(tǒng)研究的大熱點(diǎn)。本課題采用乙肝表面抗原為模型抗原，首次探討了巨噬細(xì)胞對(duì)粒徑均的不同表面電荷聚乳酸（PLA）納微球的攝取行為以及活化情況。 首先利用快速膜乳化技術(shù)，制備得到了PLA納微球，納微球粒徑均 性好、表面光滑、球形完整，其平均粒徑為900nm，其多分散性指數(shù)為0.029。 然后將定量PLA納微球分別添加到1%（w/v）的殼聚糖（CS）、殼聚糖鹽酸鹽（CSC）以及聚乙烯亞胺（PEI）溶液中，利用靜電作用直接對(duì)微球鍍層，使納微球的表面帶有正電荷。SEM和粒徑分布結(jié)果表明修飾后對(duì)PLA納微球形貌、粒徑分布和分散性沒(méi)有影響，但是PLA、PLA-CS、PLA-CSC、PLA-PEI的表面電荷依次增高。其中PLA的平均電位為-21.3mV，PLA-CS的平均電位為7.5mV，，PLA-CSC的平均電位為13.1mV，PLA-PEI的平均電位為31.7mV。 表面電荷的增加，顯著的提高了PLA微球?qū)BsAg的吸附效率�？瞻譖LA微球?qū)BsAg的吸附率僅為3.89%，采用殼聚糖和殼聚糖鹽酸鹽修飾的PLA微球，對(duì)HBsAg吸附率分別為23.97%和58.68%，而聚乙烯亞胺修飾的PLA微球?qū)BsAg的吸附效率可高達(dá)62.63%。 最后，采用三種巨噬細(xì)胞考察表面電荷對(duì)納微球作為佐劑的效果影響。小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的考察結(jié)果表明表面電荷的增加，有利于抗原的攝取，MHC I和MHC II的表達(dá)以及IL-1β、IL-6、IL-12和TNF-α這幾種細(xì)胞因子的分泌，表明表面電荷的增加可更好的激活巨噬細(xì)胞，繼而產(chǎn)生更強(qiáng)的免疫應(yīng)答。
【關(guān)鍵詞】：納微球 佐劑 巨噬細(xì)胞 攝取 活化
【學(xué)位授予單位】：北京化工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R392;TQ460.1
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 縮略詞12-13
• 第一章 緒論13-24
• 1.1 本課題研究背景13-21
• 1.1.1 乙肝現(xiàn)狀13
• 1.1.2 乙肝引起的免疫概述13-15
• 1.1.3 治療性乙肝疫苗的研究現(xiàn)狀15-17
• 1.1.4 疫苗佐劑概述17-19
• 1.1.5 納微球作為佐劑的研究現(xiàn)狀19-21
• 1.2 本課題的立題依據(jù)21-22
• 1.3 本課題的研究?jī)?nèi)容、目的和意義22-24
• 第二章 粒徑均一可控的納微球的制備和鍍層修飾24-36
• 2.1 引言24-25
• 2.2 材料與方法25-29
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料25-26
• 2.2.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑25
• 2.2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器（參見(jiàn)附錄）25-26
• 2.2.2 微球的制備方法26-27
• 2.2.2.1 粒徑為 900 nm 納微球的制備26
• 2.2.2.2 粒徑為 400 nm 納米球的制備26-27
• 2.2.3 納微球表面形貌觀察27
• 2.2.4 納微球粒徑及分布測(cè)定27
• 2.2.5 PLA 納微球 PVA 殘留量測(cè)定27-28
• 2.2.6 PLA 納微球的修飾28-29
• 2.2.7 FITC 標(biāo)記抗原的制備29
• 2.2.8 抗原吸附29
• 2.2.9 乙肝表面抗原吸附率的測(cè)定29
• 2.3 結(jié)果與討論29-34
• 2.3.1 所制備的粒徑為 900 nm 微球29-30
• 2.3.2 所制備的粒徑為 400 nm 微球30-31
• 2.3.3 PVA 的殘留量31
• 2.3.4 修飾后 PLA 納微球的表征31-33
• 2.3.5 修飾后 PLA 納微球?qū)乖奈铰?/span>33-34
• 2.4 本章小結(jié)34-36
• 第三章 納微球表面電荷對(duì)巨噬細(xì)胞系 RAW 264.7 行為的影響36-49
• 3.1 引言36
• 3.2 材料與方法36-40
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料（參見(jiàn)附錄）36
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器（參見(jiàn)附錄）36
• 3.2.3 CCK-8 法測(cè) RAW 264.7 細(xì)胞活力36-37
• 3.2.4 巨噬細(xì)胞系 RAW 264.7 對(duì)抗原的吞噬實(shí)驗(yàn)37-38
• 3.2.4.1 流式細(xì)胞儀分析37-38
• 3.2.4.2 激光掃描共聚焦顯微鏡分析38
• 3.2.5 巨噬細(xì)胞系 RAW 264.7 表達(dá)的 MHC I、MHC II、CD80 和 CD8638-39
• 3.2.6 細(xì)胞因子的檢測(cè)39
• 3.2.7 抗原與溶酶體的共定位實(shí)驗(yàn)39-40
• 3.3 結(jié)果與討論40-47
• 3.3.1 RAW 264.7 細(xì)胞活力40
• 3.3.2 RAW 264.7 對(duì)抗原的吞噬效果40-44
• 3.3.3 巨噬細(xì)胞系 RAW 264.7 表達(dá)的 MHC I、MHC II、CD80 和 CD86 結(jié)果44-46
• 3.3.4 細(xì)胞因子的檢測(cè)46
• 3.3.5 共定位結(jié)果46-47
• 3.4 本章小結(jié)47-49
• 第四章 納微球表面電荷對(duì)巨噬細(xì)胞系 J774A.1 行為的影響49-54
• 4.1 引言49
• 4.2 材料與方法49-52
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料49
• 4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器 (參見(jiàn)附錄)49-50
• 4.2.3 巨噬細(xì)胞 J774A.1 對(duì)抗原的吞噬實(shí)驗(yàn)50
• 4.2.4 巨噬細(xì)胞 J774A.1 表達(dá)的 MHC I 和 MHC II 的檢測(cè)50-52
• 4.3 結(jié)果與討論52-53
• 4.3.1 巨噬細(xì)胞 J774A.1 對(duì)抗原的吞噬結(jié)果52
• 4.3.2 巨噬細(xì)胞 J774A.1 表達(dá)的 MHC I 和 MHC II 的52-53
• 4.4 本章小節(jié)53-54
• 第五章 納微球表面電荷對(duì)原代小鼠腹腔巨噬細(xì)胞行為的影響54-64
• 5.1 引言54
• 5.2 材料與方法54-57
• 5.2.1 實(shí)驗(yàn)材料 (參見(jiàn)附錄)54
• 5.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器 (參見(jiàn)附錄)54
• 5.2.3 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的提取54-55
• 5.2.4 安全性實(shí)驗(yàn)55
• 5.2.5 抗原攝取情況的研究55-56
• 5.2.5.1 流式細(xì)胞儀的定量分析55
• 5.2.5.2 激光掃描共聚焦顯微鏡定性分析55-56
• 5.2.6 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表達(dá)的 MHC I 和 MHC II 的檢測(cè)56
• 5.2.7 細(xì)胞因子的檢測(cè)56-57
• 5.3 結(jié)果與討論57-63
• 5.3.1 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的存活率57
• 5.3.2 流式細(xì)胞儀的定量分析結(jié)果57-58
• 5.3.3 激光掃描共聚焦顯微鏡定性分析結(jié)果58-59
• 5.3.4 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表達(dá)的 MHC I 和 MHC II 的結(jié)果59-61
• 5.3.5 細(xì)胞因子分泌的結(jié)果61-63
• 5.4 本章小節(jié)63-64
• 第六章 結(jié)論與創(chuàng)新性64-66
• 6.1 本論文主要結(jié)論64-65
• 6.2 本論文創(chuàng)新性65-66
• 第七章 問(wèn)題與建議66-67
• 參考文獻(xiàn)67-72
• 附錄72-74
• 致謝74-75
• 研究成果及發(fā)表的學(xué)術(shù)論文75-76
• 作者及導(dǎo)師簡(jiǎn)介76-77
• 附件77-78

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