20-HETE通過δPKC誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡的研究
發(fā)布時(shí)間:2017-04-25 17:03
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【摘要】:20-羥二十烷四烯酸(20-Hydroxyeicosatetraenoic acid,20-HETE),是細(xì)胞色素P450ω-羥化酶催化花生四烯酸(Arachidonic Acid,AA)代謝產(chǎn)生的一種小分子活性化合物,在調(diào)節(jié)心血管功能等方面具有重要作用。本實(shí)驗(yàn)室前期研究結(jié)果表明:20-HETE可經(jīng)線粒體通路誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡;并證實(shí)20-HETE可經(jīng)PKC依賴性途徑誘導(dǎo)NADPH氧化酶衍生產(chǎn)物ROS產(chǎn)生增多,導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。為了揭示δPKC亞型在20-HETE所誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡中的作用,本文通過外源性加入δPKC抑制劑Rottlerin,研究δPKC對(duì)20-HETE誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡以及20-HETE誘導(dǎo)的線粒體膜電位下降的作用。研究發(fā)現(xiàn),20-HETE可經(jīng)δPKC作用于線粒體通路誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡。方法及結(jié)果如下:1)利用酶標(biāo)儀,以MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞存活率,結(jié)果發(fā)現(xiàn)20-HETE顯著降低細(xì)胞存活率至74.04±5.03%,,而使用Rottlerin能夠抑制20-HETE的這種作用,使存活率升至91.10±5.08%;2)利用激光共聚焦顯微鏡,以原位末端標(biāo)記(TUNEL)法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,結(jié)果發(fā)現(xiàn)20-HETE能夠誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡,而Rottlerin能夠顯著抑制由20-HETE引起的心肌細(xì)胞凋亡作用;3)利用激光共聚焦顯微鏡,以JC-1為熒光探針檢測(cè)線粒體膜電位,結(jié)果發(fā)現(xiàn)Rottlerin能夠顯著抑制由20-HETE引起的心肌細(xì)胞線粒體膜電位的下降。上述研究結(jié)果表明:δPKC介導(dǎo)了20-HETE誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡的線粒體通路。這為進(jìn)一步完善20-HETE誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡的機(jī)制提供了理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】:20-HETE 心肌細(xì)胞凋亡 δPKC
【學(xué)位授予單位】:東北師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2013
【分類號(hào)】:R363
【目錄】:
- 摘要4-5
- Abstract5-7
- 引言7-11
- 材料和方法11-16
- 1、實(shí)驗(yàn)材料11-12
- 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物11
- 1.2 主要儀器11
- 1.3 試劑及藥品11-12
- 1.4 主要溶液的配制12
- 2、實(shí)驗(yàn)方法12-16
- 2.1 乳鼠心肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)12-13
- 2.2 MTT 比色法測(cè)定心肌細(xì)胞的凋亡13
- 2.3 TUNEL試劑盒檢測(cè)細(xì)胞凋亡13-14
- 2.4 線粒體膜電位ΔΨm檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡14-15
- 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法15-16
- 實(shí)驗(yàn)結(jié)果16-20
- 1、Rottlerin 對(duì) 20-HETE 誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞存活率下降的影響16-17
- 2、Rottlerin 對(duì) 20-HETE 誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡的影響17-18
- 3、Rottlerin 對(duì) 20-HETE 誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞線粒體膜電位ΔΨm 下降的影響18-20
- 討論20-22
- 結(jié)論22
- 創(chuàng)新點(diǎn)22-23
- 參考文獻(xiàn)23-25
- 英文縮寫25-26
- 致謝26
【參考文獻(xiàn)】
中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條
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本文編號(hào):326666
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