本文關(guān)鍵詞：臨床應(yīng)用PRP制備方法的比較研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：用對兔脂肪干細(xì)胞（adipose-derived stem cells， ADSCs）增殖的影響來驗(yàn)證Tubex和傳統(tǒng)二次離心法制備自體富血小板血漿（platelet-rich plasma，PRP)各自生物學(xué)效應(yīng)，來探討一種安全、快速、高效制備PRP的方法。 方法：1選用新西蘭大白兔，雄性，取兔附睪部區(qū)脂肪墊，Ⅰ型膠原酶消化法培養(yǎng)兔ADSCs，并觀察細(xì)胞形態(tài)特征。 2選取P4第4代ADSCs進(jìn)行成脂、成骨誘導(dǎo)分化及染色來鑒定ADSCs。 3PRP的制備采用兔心臟穿刺抽血，，二次離心的方法,并行血小板計(jì)數(shù)及血小板回收率的計(jì)算。 4將第4代細(xì)胞分為空白組(完全培養(yǎng)基180μl+單純DMEM培養(yǎng)基20μl)；對照組（細(xì)胞180ul+單純DMEM培養(yǎng)基20ul）、全血組（細(xì)胞180ul+全血血漿20ul）、Tubex制備的PRP組（細(xì)胞180ul+PRP20ul）、傳統(tǒng)二次離心法制備的PRP組（細(xì)胞180ul+PRP20ul）。采用CCK-8法(Cell-Counting Kit-8)檢測不同作用時(shí)間（24h、48h、72h）各組對ADSCs增殖活動(dòng)的影響。 5將全血、Tubex制備的PRP及傳統(tǒng)二次離心法制備的PRP采用雙抗夾心法（ELISA）檢測其中血小板源性生長因子（platelet derived growth facto，PDGF-AB）的濃度。 結(jié)果：1原代細(xì)胞提取后鏡下觀其形狀為圓形、大小不等。培養(yǎng)24小時(shí)后可見有少量的細(xì)胞貼壁形狀為不規(guī)則細(xì)長型，可有像偽足一樣的突起。3天后鏡下觀大量細(xì)胞已經(jīng)貼壁生長，形狀為比較細(xì)的長梭形，細(xì)胞開始增大并可見核分裂相，梭形細(xì)胞逐漸增多。5天后細(xì)胞的密度明顯增加，呈現(xiàn)出團(tuán)簇狀、并向各個(gè)方向伸展形成集落，大小不一，多為長梭形。細(xì)胞融合在80％-90%時(shí)即可胰酶傳代。 2成骨誘導(dǎo)三周茜素紅染色呈陽性，成脂誘導(dǎo)兩周油紅O染色呈陽性， 3全血血小板計(jì)數(shù)為（260.2±96.8）×109/L；傳統(tǒng)二次離心法提取的PRP血小板計(jì)數(shù)為(1508.8±557.0)×109/L; Tubex提取的PRP血小板計(jì)數(shù)為（3140.0±291.5）×109/L。Tubex制備的PRP血小板計(jì)數(shù)是全血的12.06倍，是傳統(tǒng)二次離心法制備的PRP的2.08倍 4按血小板回收率計(jì)算公式計(jì)算Tubex制備的PRP和傳統(tǒng)二次離心法制備的PRP的回收率，結(jié)果：Tubex制備的PRP血小板回收率為82.86％，傳統(tǒng)方法回收率為72.54％。 5CCK-8法顯示Tubex提取的PRP與傳統(tǒng)二次離心法提取的PRP對ADSCs有明顯的增殖作用。Tubex提取的PRP組在與傳統(tǒng)組比較，其差異有顯著地統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。 6PRP中血小板源性生長因子PDGF-AB的濃度采用ELISA法檢測，結(jié)果顯示：Tubex制備的PRP中PDGF-AB的濃度明顯高于傳統(tǒng)二次離心法制備的PRP及全血PDGF-AB的濃度，其差異均有顯著地統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。 結(jié)論：1提取兔附睪部區(qū)脂肪墊分離培養(yǎng)的細(xì)胞，經(jīng)誘導(dǎo)分化并染色鑒定證實(shí)為ADSCs。 2通過Tubex和傳統(tǒng)二次離心法成功提取兔PRP，經(jīng)血小板計(jì)數(shù)及ELISA法檢測其中血小板生長因子PDGF-AB的濃度，證實(shí)Tubex是一種更加快速、安全、高效制備PRP的方法。 3Tubex制備的PRP與傳統(tǒng)方法制備的PRP相比，能夠更加高效，快速的促進(jìn)ADSCs的增殖。
【關(guān)鍵詞】：Tubex 富血小板血漿 脂肪干細(xì)胞 細(xì)胞增殖 PDGF-AB
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-12
• 材料和方法12-17
• 1. 材料12-14
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物12
• 1.2 實(shí)驗(yàn)試劑12
• 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器12-13
• 1.4 主要試劑及配制13-14
• 2. 方法14-17
• 2.1 兔脂肪來源干細(xì)胞的分離與培養(yǎng)14-15
• 2.2 PRP 的制備15-16
• 2.3 兔脂肪來源干細(xì)胞的增殖實(shí)驗(yàn)（CCK-8）16
• 2.4 雙抗體夾心檢測 PDGF-AB 的濃度16-17
• 結(jié)果17-20
• 1.原代及傳代細(xì)胞形態(tài)17-18
• 2.ADSCs 誘導(dǎo)染色18-19
• 3.全血和 PRP 血小板計(jì)數(shù)19
• 4.血小板回收率的計(jì)算19
• 5.兔脂肪來源干細(xì)胞的增殖實(shí)驗(yàn)的結(jié)果19-20
• 6.雙抗體夾心（ELISA 法）檢測 PDGF-AB 的濃度的結(jié)果20
• 討論20-23
• 結(jié)論23-24
• 參考文獻(xiàn)24-26
• 綜述26-34
• 參考文獻(xiàn)31-34
• 致謝34-35

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 田衛(wèi)東,王大章,喬鞠,陳偉輝;生長因子網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)對骨形成作用的研究 Ⅲ.bFGF對人胚成骨樣細(xì)胞增殖及分化的影響[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;1998年04期

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5 王悅;朱U

本文編號(hào)：326266