本文關(guān)鍵詞：基因重組人源基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1α的色譜分離純化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：血管生長影響著多種疾病的生理病理過程,如臨床上可檢測到的實(shí)體瘤的生長、轉(zhuǎn)移以及近十幾年患病率逐年增高的心腦血管疾病等都有依賴于血管生長過程。目前,盡管人們已經(jīng)開發(fā)了不少能直接刺激血管的促血管生成因子,如VEGF、FGF、 Angiopoietin-I和Angiogenin等,但由于它們都可能會(huì)引起經(jīng)一氧化氮介導(dǎo)的低血壓、血管畸形以及血管通透性增加和滲漏等,致使無法對它們進(jìn)行新藥開發(fā)或應(yīng)用研究。而基質(zhì)細(xì)胞衍生因子la (stromal cell-derived factor-1α, SDF-1α)是1994年Nagasawa等在小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞系pA6分泌的細(xì)胞因子中發(fā)現(xiàn)的一種趨化因子,它可以通過間接影響骨髓來調(diào)節(jié)造血過程從而減少直接作用藥物的缺陷,并通過對人體內(nèi)部刺激因子的調(diào)節(jié)來進(jìn)行更加有效地治療。盡管它不能直接促進(jìn)血管新生,但可以聚集具有促血管新生作用的多種細(xì)胞到缺血局部。因此,SDF-1α是一種潛在的治療心肌缺血、腦缺血性以及潰瘍等疾病的藥物。 本文在我們前期工作的基礎(chǔ)上,對基因重組人源基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1α的分離純化過程進(jìn)行了研究。結(jié)果表明,重組菌E.Coli BL21(DE3)/pET15b-SDF-1α經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)、破菌和包涵體復(fù)性后,經(jīng)過SP-Sepharose Fast Flow陽離子交換和Sephadex G-75凝膠排阻兩步柱層析分離純化,可以得到具有生物活性和高純度的SDF-1α。SDS-PAGE蛋白電泳和高效凝膠色譜分析結(jié)果表明,所得到的SDF-1α的純度在96%以上；單核細(xì)胞THP-1的Transwell細(xì)胞小室培養(yǎng)結(jié)果表明,所得到的SDF-1α對THP-1細(xì)胞具有趨化活性。經(jīng)兩步柱層析分離純化后,SDF-1α的收率約為14%。
【關(guān)鍵詞】：基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1α 分離純化 陽離子交換層析 凝膠排阻層析
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R363;Q81
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-8
• 第一章 緒論8-13
• 1.1 血管生長藥物及其缺陷8-9
• 1.2 SDF-19-11
• 1.2.1 SDF-1的趨化能力9-10
• 1.2.2 SDF-1的間接治療作用10
• 1.2.3 SDF-1與心肌缺血10
• 1.2.4 SDF-1與腦缺血性疾病10-11
• 1.2.5 SDF-1與腫瘤11
• 1.3 本研究的目的及意義11-13
• 第二章 重組蛋白SDF-1α菌種的重培養(yǎng)13-17
• 2.1 實(shí)驗(yàn)思路13
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料13-14
• 2.2.1 菌種與質(zhì)粒13-14
• 2.2.2 試劑14
• 2.2.3 儀器設(shè)備14
• 2.2.4 培養(yǎng)基及主要試劑配制14
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法14-15
• 2.3.1 重組蛋白SDF-1α菌種的復(fù)壯14
• 2.3.2 質(zhì)粒的提取14-15
• 2.3.3 轉(zhuǎn)化15
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論15-16
• 2.5 本章小結(jié)16-17
• 第三章 SDF-1α的誘導(dǎo)表達(dá)和分離純化17-33
• 3.1 實(shí)驗(yàn)思路17-23
• 3.1.1 工程菌的誘導(dǎo)表達(dá)17-18
• 3.1.2 層析方法的選擇18-22
• 3.1.2.1 離子交換層析18-21
• 3.1.2.2 凝膠排阻層析21-22
• 3.1.3 蛋白電泳22-23
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料23-25
• 3.2.1 菌種及層析柱23
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑23
• 3.2.3 儀器設(shè)備23
• 3.2.4 培養(yǎng)基及主要試劑配制23-25
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法25-28
• 3.3.1 冷凍菌種培養(yǎng)、誘導(dǎo)表達(dá)25
• 3.3.2 菌體破碎25
• 3.3.3 變性和復(fù)性25-26
• 3.3.4 SP-Sepharose Fast Flow陽離子交換26
• 3.3.5 凝膠排阻26
• 3.3.6 脫鹽和凍干26-27
• 3.3.7 蛋白電泳27-28
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論28-32
• 3.4.1 SP-Sepharose Fast Flow陽離子交換結(jié)果28-29
• 3.4.2 凝膠排阻結(jié)果29-30
• 3.4.3 蛋白電泳結(jié)果30-32
• 3.4.3.1 重組菌E.Coli BL21(DE3)/pET15b-SDF-1α的表達(dá)30-31
• 3.4.3.2 兩步層析分離的電泳檢測31-32
• 3.5 本章小結(jié)32-33
• 第四章 重組蛋白SDF-1α的檢測33-40
• 4.1 實(shí)驗(yàn)思路33-34
• 4.1.1 純度和濃度33
• 4.1.2 活性33-34
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料34-35
• 4.2.1 細(xì)胞和試劑34
• 4.2.2 儀器設(shè)備34
• 4.2.3 培養(yǎng)基及試劑配制34-35
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法35-36
• 4.3.1 SDS-PAGE蛋白電泳和高效凝膠色譜35
• 4.3.2 Bradford法測量蛋白濃度35
• 4.3.3 Transwell細(xì)胞小室實(shí)驗(yàn)35-36
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論36-39
• 4.4.1 SDF-1α的分離純化結(jié)果36-37
• 4.4.2 重組SDF-1α的活性鑒定結(jié)果37-39
• 4.5 本章小結(jié)39-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-49
• 致謝49

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：基因重組人源基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1α的色譜分離純化，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：326242