一種新的快速擴增EBV和CMV特異性T細(xì)胞技術(shù)用于過繼細(xì)胞治療的實驗研究
發(fā)布時間:2021-06-30 19:36
在過去的十年間,造血干細(xì)胞移植(hematopoietic stem cell transplantation,HSCT)領(lǐng)域取得了一些重要進展,提高了患者的生存率,但病毒感染仍然是移植相關(guān)死亡的一個重要危險因素。造血干細(xì)胞移植后患者免疫力低下,皰疹病毒特別是EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)和巨細(xì)胞病毒(cytomegaoviyns,CMV)是異基因造血干細(xì)胞移植后最常見的病毒感染。無論是EB病毒原發(fā)性感染或是巨細(xì)胞病毒的再活化,都可能會危及患者的生命。移植后EBV感染的常規(guī)治療包括降低免疫抑制劑量、抗病毒藥物、CD20單克隆抗體、化療以及抗原特異性T細(xì)胞輸注等。單純的減少或者停用免疫抑制劑會增加移植物抗宿主病的風(fēng)險,阿昔洛韋或更昔洛韋等抗病毒藥物抑制病毒在體內(nèi)的復(fù)制,而EBV和CMV進入體內(nèi)后為細(xì)胞內(nèi)感染且大部分處于潛伏周期,處于此階段的感染,抗病毒藥物對之無效。盡管很多病例報道了CD20單克隆抗體治療移植后淋巴組織增生性疾病(post-transplant lymphoproliferativediseases, PTLD)的有效性,但它會導(dǎo)致超過6個月的B...
【文章來源】:鄭州大學(xué)河南省 211工程院校
【文章頁數(shù)】:125 頁
【學(xué)位級別】:博士
【部分圖文】:
EBVLMP1Ag159-167的質(zhì)譜鑒定(左)和純度分析結(jié)果(右)
圖 1.2 EBV LMP1Ag159-167 的質(zhì)譜鑒定(左)和純度分析結(jié)果(右)BV-LCL 的形態(tài)學(xué)觀察 EBV 上清與人外周血單個核細(xì)胞培養(yǎng) 2~3 天后,倒置顯微鏡下可見淋巴細(xì)胞形態(tài)增大,明顯母細(xì)胞化,胞質(zhì)豐富,懸浮生長。培觀察,可見大量的集落,聚集成團(圖 1.3),培養(yǎng)液顏色變成黃色L 適宜在偏酸性環(huán)境生長,故每次可以半換液。EBV-LCL 細(xì)胞可穩(wěn)定傳代。BV-LCL 表面抗原的鑒定表達用流式細(xì)胞儀檢測 EBV-LCL 表面分子 CD19 的表達,可見培養(yǎng)前占 3.45%。培養(yǎng) 4 周后,B 細(xì)胞表面標(biāo)記占 98.67%,證明此細(xì)胞(圖 1.4)。
1.12 統(tǒng)計學(xué)分析實驗數(shù)據(jù)采用SPSS16.0進行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,多組間均數(shù)的比較采用重復(fù)測量方差分析,組間兩兩比較用最小顯著差法(LSD)。以α=0.05為檢驗水準(zhǔn),P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2 結(jié)果2.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察種板時,復(fù)蘇的 PBMC,顯微鏡下觀察可見細(xì)胞圓形、大小不等,透亮度較好。培養(yǎng)前三天,細(xì)胞形態(tài)無明顯變化,顯微鏡下可見少量的細(xì)胞碎片。培養(yǎng)一周左右,部分細(xì)胞體積變大,可見細(xì)胞集落形成。0μmol/L 組和 1μmol/L 組細(xì)胞均長勢良好,5μmol/L 組細(xì)胞形成克隆的數(shù)目則明顯減少,倒置顯微鏡下可以觀察到較多的細(xì)胞碎片。流式細(xì)胞儀檢測培養(yǎng) 14 天的細(xì)胞,與培養(yǎng)前的 PBMC相比,細(xì)胞體積明顯增大,5μmol/L 組細(xì)胞可見較多的碎片,如圖 2.1。
【參考文獻】:
期刊論文
[1]異基因造血干細(xì)胞移植后發(fā)生巨細(xì)胞病毒感染的臨床分析[J]. 郭智,陳惠仁,劉曉東,邊佳明,何學(xué)鵬,樓金星,陳鵬,楊凱,劉丹,張媛. 中國實驗血液學(xué)雜志. 2012(04)
[2]CFP21-ELISPOT方法的建立及其在結(jié)核分枝桿菌感染診斷中的應(yīng)用[J]. 謝富佳,譚繼英,喬梅,梁正羽,王世婷,唐克峰,祝秉東,楊燕,章國平. 中國病原生物學(xué)雜志. 2011(09)
[3]河南省骨髓庫漢族捐獻者HLA-A、B、DR高分辨基因多態(tài)性調(diào)查分析[J]. 王兆福,張伯偉,馬茹,杜娟,孔大為. 中國組織工程研究與臨床康復(fù). 2011(31)
[4]應(yīng)用ELISPOT方法篩選確定HIV-1 B’/C亞型疫苗六種抗原的H-2d限制的T細(xì)胞表位[J]. 齊香榮,高瑛瑛,陸柔劍,鄧瑤,孟昕,譚文杰,阮力. 病毒學(xué)報. 2011(01)
[5]HLA高分辨分型模棱兩可組合研究和問題解決的進展[J]. 李恒聰,吳國光. 中國實驗血液學(xué)雜志. 2010(05)
[6]自體CIK細(xì)胞過繼免疫治療晚期非小細(xì)胞肺癌的臨床研究[J]. 李文,宋立強,劉吉福. 陜西醫(yī)學(xué)雜志. 2010(02)
[7]人B淋巴母細(xì)胞系體外培養(yǎng)方法的優(yōu)化及其影響因素[J]. 劉敏娟,孫靜,許云云,臧志遠,劉柳,張學(xué)光. 蘇州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2010(01)
[8]36380名河北漢族HLA供者基因多態(tài)性及其分布特征[J]. 王振雷,何路軍,劉艷平,喬芳,張颯,趙倩,王遠花,謝續(xù),李茵. 中國輸血雜志. 2008(03)
[9]兒童造血干細(xì)胞移植后巨細(xì)胞病毒感染的臨床研究[J]. 秦茂權(quán),謝正德,王彬,周翾,朱光華,馮濤,吳敏媛. 臨床兒科雜志. 2007(07)
[10]20596名漢族造血干細(xì)胞供者HLA多態(tài)性統(tǒng)計學(xué)分析[J]. 孫繼麗,杜可明,傅敏,孫瑛,金曄,謝軍華,季蕓,楊健豪,稽月華,張錚,毛臻,劉達莊,錢開誠. 中國輸血雜志. 2006(05)
博士論文
[1]EB病毒潛伏膜蛋白2A特異性CTL表位篩選及免疫功能研究[D]. 王冰.南京醫(yī)科大學(xué) 2009
本文編號:3258359
【文章來源】:鄭州大學(xué)河南省 211工程院校
【文章頁數(shù)】:125 頁
【學(xué)位級別】:博士
【部分圖文】:
EBVLMP1Ag159-167的質(zhì)譜鑒定(左)和純度分析結(jié)果(右)
圖 1.2 EBV LMP1Ag159-167 的質(zhì)譜鑒定(左)和純度分析結(jié)果(右)BV-LCL 的形態(tài)學(xué)觀察 EBV 上清與人外周血單個核細(xì)胞培養(yǎng) 2~3 天后,倒置顯微鏡下可見淋巴細(xì)胞形態(tài)增大,明顯母細(xì)胞化,胞質(zhì)豐富,懸浮生長。培觀察,可見大量的集落,聚集成團(圖 1.3),培養(yǎng)液顏色變成黃色L 適宜在偏酸性環(huán)境生長,故每次可以半換液。EBV-LCL 細(xì)胞可穩(wěn)定傳代。BV-LCL 表面抗原的鑒定表達用流式細(xì)胞儀檢測 EBV-LCL 表面分子 CD19 的表達,可見培養(yǎng)前占 3.45%。培養(yǎng) 4 周后,B 細(xì)胞表面標(biāo)記占 98.67%,證明此細(xì)胞(圖 1.4)。
1.12 統(tǒng)計學(xué)分析實驗數(shù)據(jù)采用SPSS16.0進行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,多組間均數(shù)的比較采用重復(fù)測量方差分析,組間兩兩比較用最小顯著差法(LSD)。以α=0.05為檢驗水準(zhǔn),P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2 結(jié)果2.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察種板時,復(fù)蘇的 PBMC,顯微鏡下觀察可見細(xì)胞圓形、大小不等,透亮度較好。培養(yǎng)前三天,細(xì)胞形態(tài)無明顯變化,顯微鏡下可見少量的細(xì)胞碎片。培養(yǎng)一周左右,部分細(xì)胞體積變大,可見細(xì)胞集落形成。0μmol/L 組和 1μmol/L 組細(xì)胞均長勢良好,5μmol/L 組細(xì)胞形成克隆的數(shù)目則明顯減少,倒置顯微鏡下可以觀察到較多的細(xì)胞碎片。流式細(xì)胞儀檢測培養(yǎng) 14 天的細(xì)胞,與培養(yǎng)前的 PBMC相比,細(xì)胞體積明顯增大,5μmol/L 組細(xì)胞可見較多的碎片,如圖 2.1。
【參考文獻】:
期刊論文
[1]異基因造血干細(xì)胞移植后發(fā)生巨細(xì)胞病毒感染的臨床分析[J]. 郭智,陳惠仁,劉曉東,邊佳明,何學(xué)鵬,樓金星,陳鵬,楊凱,劉丹,張媛. 中國實驗血液學(xué)雜志. 2012(04)
[2]CFP21-ELISPOT方法的建立及其在結(jié)核分枝桿菌感染診斷中的應(yīng)用[J]. 謝富佳,譚繼英,喬梅,梁正羽,王世婷,唐克峰,祝秉東,楊燕,章國平. 中國病原生物學(xué)雜志. 2011(09)
[3]河南省骨髓庫漢族捐獻者HLA-A、B、DR高分辨基因多態(tài)性調(diào)查分析[J]. 王兆福,張伯偉,馬茹,杜娟,孔大為. 中國組織工程研究與臨床康復(fù). 2011(31)
[4]應(yīng)用ELISPOT方法篩選確定HIV-1 B’/C亞型疫苗六種抗原的H-2d限制的T細(xì)胞表位[J]. 齊香榮,高瑛瑛,陸柔劍,鄧瑤,孟昕,譚文杰,阮力. 病毒學(xué)報. 2011(01)
[5]HLA高分辨分型模棱兩可組合研究和問題解決的進展[J]. 李恒聰,吳國光. 中國實驗血液學(xué)雜志. 2010(05)
[6]自體CIK細(xì)胞過繼免疫治療晚期非小細(xì)胞肺癌的臨床研究[J]. 李文,宋立強,劉吉福. 陜西醫(yī)學(xué)雜志. 2010(02)
[7]人B淋巴母細(xì)胞系體外培養(yǎng)方法的優(yōu)化及其影響因素[J]. 劉敏娟,孫靜,許云云,臧志遠,劉柳,張學(xué)光. 蘇州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2010(01)
[8]36380名河北漢族HLA供者基因多態(tài)性及其分布特征[J]. 王振雷,何路軍,劉艷平,喬芳,張颯,趙倩,王遠花,謝續(xù),李茵. 中國輸血雜志. 2008(03)
[9]兒童造血干細(xì)胞移植后巨細(xì)胞病毒感染的臨床研究[J]. 秦茂權(quán),謝正德,王彬,周翾,朱光華,馮濤,吳敏媛. 臨床兒科雜志. 2007(07)
[10]20596名漢族造血干細(xì)胞供者HLA多態(tài)性統(tǒng)計學(xué)分析[J]. 孫繼麗,杜可明,傅敏,孫瑛,金曄,謝軍華,季蕓,楊健豪,稽月華,張錚,毛臻,劉達莊,錢開誠. 中國輸血雜志. 2006(05)
博士論文
[1]EB病毒潛伏膜蛋白2A特異性CTL表位篩選及免疫功能研究[D]. 王冰.南京醫(yī)科大學(xué) 2009
本文編號:3258359
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