本文關(guān)鍵詞：大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景在缺血性心臟病的治療中，心肌再生一直是國內(nèi)外研究的焦點。骨髓間充干細(xì)胞（BMSCs）易于獲取，在一定條件下，能在體外大量擴增，同時自體移植不存在倫理爭議，也沒有免疫排斥反應(yīng)且在體內(nèi)外不同誘導(dǎo)條件下可分化為內(nèi)皮細(xì)胞、成骨細(xì)胞、心肌細(xì)胞等優(yōu)勢[1-4]，備受關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，BMSCs在體內(nèi)、體外誘導(dǎo)環(huán)境下，均可分化為心肌樣細(xì)胞，但其機制尚不明確[5-7]。本實驗將大鼠BMSCs分別用5-氮胞苷(5-Aza)誘導(dǎo)和與心肌細(xì)胞(CM)共培養(yǎng)的方法進(jìn)行體外誘導(dǎo)，觀察大鼠BMSCs誘導(dǎo)分化后的生長情況和形態(tài)變化，及其在不同時間段分化為心肌樣細(xì)胞的能力及表達(dá)心肌樣細(xì)胞特異性標(biāo)記物cTnI、Cx43和心肌特異性轉(zhuǎn)錄因子GATA-4的差別，為今后進(jìn)一步研究BMSCs分化機制以及應(yīng)用于臨床治療缺血性心臟病提供一定的理論依據(jù)和技術(shù)手段。 目的研究體外不同誘導(dǎo)條件下大鼠BMSCs在不同時間段分化為心肌樣細(xì)胞的能力及表達(dá)心肌樣細(xì)胞特異性標(biāo)記物的差別。 方法分離培養(yǎng)SD大鼠BMSCs和SD乳鼠CM并鑒定。取第3代BMSCs分別進(jìn)行5-氮胞苷（5-Aza）誘導(dǎo)、與CM共培養(yǎng)及單獨培養(yǎng)。分別于第2、4、6、8、10周使用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況和形態(tài)變化，RT-PCR檢測每組心肌特異性基因cTnI、Cx43和心肌特異性轉(zhuǎn)錄因子GATA-4。 結(jié)果單獨培養(yǎng)組未見有搏動細(xì)胞, cTnI、Cx43和GATA-4基因表達(dá)陰性；5-aza誘導(dǎo)組于第2周時細(xì)胞呈梭形且排列方向趨于一致，未見有搏動細(xì)胞，cTnI、Cx43基因表達(dá)第8周達(dá)到高峰，GATA-4基因表達(dá)第4周達(dá)高峰；共培養(yǎng)組細(xì)胞多為梭形，成肌性排列，可見搏動頻率不一致的搏動細(xì)胞，cTnI、Cx43基因表達(dá)于第2-8周表達(dá)逐漸增加，GATA-4基因表達(dá)第6周達(dá)高峰；相同時段內(nèi),共培養(yǎng)組的GATA-4、cTnI、Cx43基因表達(dá)高于5-Aza誘導(dǎo)組(P0.05)。隨著培養(yǎng)時間的延長三組細(xì)胞崩解死亡的細(xì)胞數(shù)開始增多，培養(yǎng)12周后尤其明顯。 結(jié)論BMSCs經(jīng)5-Aza誘導(dǎo)或與CM共培養(yǎng),可轉(zhuǎn)化為心肌樣細(xì)胞并表達(dá)基因cTnI、Cx43和GATA-4，且共培養(yǎng)組BMSCs分化為心肌樣細(xì)胞的能力比5-Aza誘導(dǎo)組強。心肌微環(huán)境可促進(jìn)BMSCs定向分化為心肌樣細(xì)胞。
【關(guān)鍵詞】：大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 乳鼠心肌細(xì)胞 5 氮胞苷 共培養(yǎng) 誘導(dǎo)分化
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-6
• 摘要6-7
• 英文摘要7-9
• 1.前沿9-11
• 2.材料與方法11-20
• 2.1 材料11
• 2.1.1 實驗動物11
• 2.1.2 試劑及儀器11
• 2.2 實驗方法11-20
• 2.2.1 BMSCs 及 CM 的分離和培養(yǎng)11-12
• 2.2.2 BMSCs 和 CM 的鑒定12-17
• 2.2.2.1 BMSCs 的鑒定12
• 2.2.2.2 CM 的鑒定12-17
• 2.2.3 實驗分組17-18
• 2.2.4 RNA 提取及 RT-PCR18-20
• 2.2.4.1 RNA提取18
• 2.2.4.2 RT-PCR 過程18
• 2.2.4.3 PCR過程18-20
• 2.2.5 統(tǒng)計分析20
• 3.結(jié)果20-22
• 3.1 BMSCs培養(yǎng)情況20
• 3.2 CM的培養(yǎng)情況20
• 3.3 各組細(xì)胞形態(tài)與生長變化情況況20-21
• 3.4 各組RT-PCR結(jié)果21-22
• 4.討論22-23
• 5.結(jié)論23
• 6.參考文獻(xiàn)23-27
• 附錄27-28
• 致謝28-29
• 綜述29-33
• 參考文獻(xiàn)32-33

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：323152