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登革病毒在宿主選擇壓力下基因組核苷酸變異與毒力的相關研究

發(fā)布時間:2017-04-23 15:09

  本文關鍵詞:登革病毒在宿主選擇壓力下基因組核苷酸變異與毒力的相關研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。


【摘要】:像其它蟲媒病毒一樣,登革病毒在自然環(huán)境下通常是維持在脊椎動物宿主和蚊介媒蟲間循環(huán)傳播。隨著時間的推移,登革病毒的基因分型呈上升趨勢。由于登革熱在許多區(qū)域仍持續(xù)存在和流行,為了更好地對該病進行有效的防控,本研究針對登革病毒在自然界中不同宿主的選擇壓力下,可能會產生的變異,從而導致毒力以及與宿主相互作用關系的變化進行深入探索。 本研究一方面利用人肝癌細胞(Huh7)和蚊蟲細胞(C6/36)模擬自然界中登革病毒(DEN-2)在宿主間交替?zhèn)鞑パh(huán)以及連續(xù)傳播;另一方面利用節(jié)肢動物(埃及伊蚊)與脊椎動物體(昆明乳鼠)模擬自然界中病毒在宿主間交替?zhèn)鞑パh(huán)。采用空斑滴定法與實時熒光定量PCR法分析病毒間的病毒滴度及適應性變化;通過對乳鼠神經毒力及病毒在蚊蟲體內的感染、傳播和增殖能力分析病毒變異株的生物學特性和分子特征的研究。本研究的主要結果如下: 1. DEN-2病毒在不同細胞內傳代的病毒毒力的改變及基因演化。 在實驗條件下,,適應性的降低發(fā)生在交替?zhèn)鞔牟《,且病毒復制能力較親代病毒弱;而連續(xù)傳代病毒的適應性呈增加趨勢,其病毒復制能力較強。此外,交替?zhèn)鞔《緦γ浇槲孟x的感染、增殖能力及小鼠半數(shù)致死量(LD50)較親代病毒低。結果初步說明了而交替?zhèn)鞔牟《局晔菧p毒的。通過對細胞傳代病毒變異株的ORF基因序列進行對比分析,表明E307、NS4B-20位氨基酸位點的變化可能導致了交替?zhèn)鞔《局甓玖Φ臏p弱;而E155、E186及E293氨基酸位點的變化可能導致連續(xù)傳代病毒株毒力的增強。 2. DEN-2病毒媒介與宿主間交替循環(huán)傳播的毒力改變及基因演化。 在實驗條件下,登革病毒在埃及伊蚊與昆明乳鼠體內的傳播循環(huán)中,第4個循環(huán)獲得的變異毒株(P4-Alt mice病毒株)對媒介蚊蟲的感染、傳播、增殖能力及小鼠半數(shù)致死量(LD50)較親代病毒有明顯增強。結果初步說明了P4-Altmice病毒株是增毒的。通過對病毒的ORF基因序列進行對比分析,表明M蛋白、E71、E129、E390、E491、NS1-190和NS2A-34氨基酸位點的突變很可能是導致毒力增強的原因。 本研究結果更好地理解選擇壓力下登革病毒進化與帶來疾病有關未來的問題。為推測登革病毒在自然界中的發(fā)生、發(fā)展趨勢以及新毒株的出現(xiàn)提供了理論依據。
【關鍵詞】:登革病毒 適應性 毒力 基因分析 毒力位點
【學位授予單位】:安徽醫(yī)科大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2013
【分類號】:R373.33
【目錄】:
  • 中文摘要5-6
  • Abstract6-8
  • 前言8-9
  • 1 材料與方法9-19
  • 1.1 材料9-11
  • 1.2 方法11-19
  • 2 結果19-43
  • 2.1 DEN-2 病毒模擬自然界在 Huh7,C6/36 細胞內傳代的病毒變異株的結果19-34
  • 2.2 DEN-2 病毒模擬自然界在埃及伊蚊與昆明乳鼠體內交替循環(huán)傳播的結果34-43
  • 3. 討論43-50
  • 4 結論50-51
  • 5 參考文獻51-56
  • 致謝56-57
  • 附錄 157-58
  • 附錄 258-59
  • 附錄 359-61
  • 已接受文章61-72
  • 已完成投稿文章72-90
  • 個人簡歷90-91
  • 綜述91-95
  • 參考文獻95

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  本文關鍵詞:登革病毒在宿主選擇壓力下基因組核苷酸變異與毒力的相關研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。



本文編號:322584

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