本文關(guān)鍵詞：中性粒細(xì)胞自發(fā)性凋亡相關(guān)miRNA的鑒定及功能研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：中性粒細(xì)胞（polymorphonuclear neutrophil，PMN）是人體重要的炎癥細(xì)胞，參與機(jī)體對病原微生物的防御，在人體非特異性免疫反應(yīng)起著重要的作用。中性粒細(xì)胞自骨髓釋放至外周血循環(huán)后其生命期限僅24~48h，一旦進(jìn)入血液循環(huán)即啟動自發(fā)性凋亡程序來維持其數(shù)量的平衡和內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，對炎癥的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸起著重要的作用。miRNA是一類非編碼小RNA,長度約為18~24個核苷酸，它通過與靶mRNA的3'端非編碼區(qū)域結(jié)合，降解mRNA或阻止mRNA的翻譯，發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)作用。本研究通過檢測自發(fā)性凋亡進(jìn)程中中性粒細(xì)胞差異表達(dá)的miRNA，探討miRNA在中性粒細(xì)胞自發(fā)性凋亡過程中的作用，為中性粒細(xì)胞自發(fā)性凋亡機(jī)制的研究提供新思路，也為炎癥性疾病的診斷及治療方法的選擇提供新的依據(jù)。方法：（1）分離人外周靜脈血中性粒細(xì)胞，鑒定其活力與純度，并分組培養(yǎng)不同的時間。對照組：新鮮分離（0h）中性粒細(xì)胞；實驗組：分離后分別培養(yǎng)12h和24h的中性粒細(xì)胞；（2）分別收集各組細(xì)胞并提取總RNA；（3）應(yīng)用數(shù)字基因表達(dá)譜技術(shù)（DGE）檢測和篩選0h和24h中性粒細(xì)胞差異表達(dá)的mRNA，差異超過2倍為有意義結(jié)果；（4）應(yīng)用Affymetrix miRNA芯片檢測和篩選對照組和實驗組差異表達(dá)的miRNA，，差異超過2倍為有意義結(jié)果；（5）從篩選出的差異表達(dá)的miRNA中選取4個（miR-4419a、miR-487b、miR-4417、 miR-432）進(jìn)行Northern Blot檢測，驗證芯片結(jié)果的可靠性；（6）對差異表達(dá)的miRNA應(yīng)用www.mirbase.org、www.targetscan.org和mirdb.org三個數(shù)據(jù)庫進(jìn)行靶基因預(yù)測，對三個數(shù)據(jù)庫的結(jié)果取交集；得到的結(jié)果再與DGE結(jié)果相結(jié)合，篩選二者的共同結(jié)果；（7）將從靶基因預(yù)測和DGE共同的結(jié)果中選取2個與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)的基因（PKCβ和MCL1），應(yīng)用RT-PCR和Western Blot進(jìn)行表達(dá)檢測，確定miRNA、相關(guān)靶基因與中性粒細(xì)胞自發(fā)性凋亡的相關(guān)性。結(jié)果：（1）DGE共篩選出差異表達(dá)的基因1,317個，其中包含多個與細(xì)胞凋亡相關(guān)的基因；（2）miRNA芯片結(jié)果：以0h組為對照，12h組表達(dá)上調(diào)的miRNA有21個，下調(diào)的有21個，24h組表達(dá)上調(diào)的有41個，下調(diào)的有22個，其中12h和24h組共同上調(diào)的有13個，共同下調(diào)的有11個；（3）Northern Blot檢測miR-4419a、miR-432和miR-487b表達(dá)上調(diào)，miR-4417表達(dá)下調(diào)，結(jié)果與芯片結(jié)果一致；（4）生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示：PKCβ可能為miR-432和miR-199a的靶基因，MCL1可能為miR-4539的靶基因；（5）RT-PCR結(jié)果顯示：PKCβ表達(dá)降低，而其上游的miRNA（miR-432和miR-199a）表達(dá)升高，與DGE結(jié)果一致；MCL1表達(dá)降低，其上游的miRNA（miR-4539）表達(dá)升高，與DGE結(jié)果一致；（6）Western Blot檢測結(jié)果顯示PKCβ表達(dá)降低，MCL1表達(dá)降低。結(jié)論：（1）獲得了中性粒細(xì)胞自發(fā)性凋亡過程中的mRNA差異表達(dá)譜；（2）獲得了中性粒細(xì)胞自發(fā)性凋亡過程中的miRNA差異表達(dá)譜，且結(jié)果可靠；（3）PKCβ、MCL1可能參與調(diào)控中性粒細(xì)胞自發(fā)性凋亡；（4）miR-432和miR-199a可能通過下調(diào)PKCβ的表達(dá)參與調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞自發(fā)性凋亡；（5）miR-4539可能通過下調(diào)MCL1的表達(dá)參與調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞自發(fā)性凋亡。
【關(guān)鍵詞】：中性粒細(xì)胞 自發(fā)性凋亡 miRNA miR-432 miR-199a miR-4539 MCL1 PKCβ
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-12
• 材料與方法12-24
• 結(jié)果24-35
• 討論35-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 英漢縮略名詞對照表45-46
• 致謝46-47
• 綜述47-58
• 參考文獻(xiàn)54-58

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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  本文關(guān)鍵詞：中性粒細(xì)胞自發(fā)性凋亡相關(guān)miRNA的鑒定及功能研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：321582