本文關(guān)鍵詞：NGF促進雪旺細胞增殖及其NF-KB表達上調(diào)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：目前，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)NGF對雪旺細胞的增殖具有促進作用。同時，在雪旺細胞增殖的過程中發(fā)現(xiàn)有NF-KB的表達�，F(xiàn)已明確NF-KB的表達對細胞具有抗凋亡、促增殖的效果。本實驗據(jù)此就NGF促進SCs的增殖及其與NF-KB的表達上調(diào)是否存在某種關(guān)系進行了研究.旨在為進一步明確雪旺細胞增殖的機制提供相關(guān)數(shù)據(jù)。 方法：選擇健康家兔十只，給予5%戊巴比妥鈉(50mg/kg)麻醉，無菌條件下取出坐骨神經(jīng)，分離培養(yǎng)出雪旺細胞，并進行S-100免疫細胞化學鑒定，以鑒定細胞純度，將細胞密度調(diào)整至1×105/ml后，接種到預涂有鼠尾膠的三個培養(yǎng)皿，分別計為實驗組（加入40ng/ml的NGF）；阻斷組（加入40ng/ml的NGF和anti-NGFR）；對照組（加入等量PBS）。置于37℃含5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天，熒光顯微鏡下觀察S-100熒光標記陽性細胞并計數(shù)，提取RNA及蛋白進行相關(guān)檢測，每組應進行三次重復實驗。然后進行統(tǒng)計學分析。 結(jié)果：接種后的第24h開始，可以倒置顯微鏡下觀察到貼壁生長的具有明顯形態(tài)的雪旺細胞，鏡下觀察所有分組的細胞都包含兩類，雪旺細胞胞核為長形或圓形；胞體為立體感強、非常飽滿的梭形體，兩端有細長的突起，胞體周圍長有亮帶，即生長暈，細胞數(shù)量占絕大多數(shù)。另一種細胞即成纖維細胞，胞核很淺，具2~3個核仁，胞體扁平、大且不規(guī)則，常常出現(xiàn)多而短的突起，數(shù)量較少。所有分組的雪旺細胞均呈“端端相對，極極相對”等旋渦排列或網(wǎng)狀排列，逐漸形成片狀，有如“地毯”。 S-100免疫組化檢測鑒定，對胞漿為棕褐色的陽性細胞進行計數(shù)，結(jié)果為：本研究體外培養(yǎng)的雪旺細胞純度達到了91％。OD值結(jié)果顯示：實驗組中，，雪旺細胞24~72h增殖速率明顯加強，72h后增殖依然強勁，至第5d達到峰值，最后漸漸緩慢下降；期間與對照組在每一時間節(jié)點均出現(xiàn)顯著差異。自CLSM上進行圖像采集顯示：阻斷組和實驗組雪旺細胞的NF-KB綠色熒光同樣多出現(xiàn)于胞漿區(qū)；實驗組強度較正常組顯著提高，而阻斷組與對照組無明顯差別。經(jīng)LeiCaConfoeal圖像分析軟件分析，結(jié)果顯示：阻斷組與實驗組均出現(xiàn)顯著差異（p＜0.01），而對照組與阻斷組組無顯著差異（p＞0.05）。對照組、阻斷組、實驗組雪旺細胞中NF-KB mRNA進行實時熒光定量PCR檢測后，實驗組較對照組、阻斷組出現(xiàn)顯著增高，而阻斷組和對照組相比，無顯著差異。 結(jié)論：1.采用組織貼塊法、差速貼壁法與低濃度胰蛋白酶消化法、G-418相結(jié)合的純化形式，可以建立良好的家兔坐骨神經(jīng)SCs原代培養(yǎng)模型。 2.添加40ng/L的外源性NGF可以顯著提高SCs的增殖速率，同時NF-KB表達明顯上調(diào)。添加NGF+anti-NGFR組的SCs細胞增殖速率和NF-KB的表達水平都與對照組無明顯區(qū)別.由此可以說明NGF是通過與P75結(jié)合來促進雪旺細胞增殖和提高NF-KB表達水平的。 3.NF-KB表達在SCs增殖過程中表達上調(diào)，且增殖最快的實驗組中表達上調(diào)的最高，且大量實驗研究表明NF-KB的表達可以抑制細胞的凋亡，促進細胞的增殖。所以推測NF-KB的高表達對雪旺細胞的增殖具有一定的作用，但若要證實其與SCs增殖具有直接的關(guān)聯(lián)性還需后續(xù)實驗繼續(xù)探討。
【關(guān)鍵詞】：雪旺細胞 NGF NF-KB
【學位授予單位】：桂林醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 英漢縮略詞對照表10-11
• 前言11-13
• 1 材料與方法13-22
• 1.1 實驗動物取材13
• 1.2 設備及器械13-14
• 1.3 藥物及試劑14-15
• 1.4 溶液配制15-16
• 1.5 實驗方法16-18
• 1.6 MTT 比色鑒定18-21
• 1.7 統(tǒng)計學分析21-22
• 2 結(jié)果22-28
• 2.1 體外培養(yǎng)的雪旺細胞形態(tài)特點22-23
• 2.2 體外培養(yǎng)的雪旺細胞形態(tài)特點23-24
• 2.3 MTT 比色實驗24-25
• 2.4 不同實驗組別雪旺細胞內(nèi) NF-KB 的表達水平比較25-26
• 2.5 不同實驗組別雪旺細胞內(nèi)NF-KB-mRNA的表達26-28
• 3 討論28-32
• 3.1 雪旺細胞體外培養(yǎng)28-29
• 3.2 P75 與 NGF、NF-kB 的關(guān)聯(lián)性29-30
• 3.3 NGF、P75 與 NF-KB 的表達30-32
• 4 結(jié)論32-33
• 參考文獻33-38
• 綜述38-54
• 參考文獻48-54
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文目錄54-55
• 致謝55-56
• 附件56

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  本文關(guān)鍵詞：NGF促進雪旺細胞增殖及其NF-KB表達上調(diào)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：319674