本文關(guān)鍵詞：NGF促進(jìn)雪旺細(xì)胞增殖及其NF-KB表達(dá)上調(diào)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：目前，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)NGF對雪旺細(xì)胞的增殖具有促進(jìn)作用。同時，在雪旺細(xì)胞增殖的過程中發(fā)現(xiàn)有NF-KB的表達(dá)。現(xiàn)已明確NF-KB的表達(dá)對細(xì)胞具有抗凋亡、促增殖的效果。本實(shí)驗(yàn)據(jù)此就NGF促進(jìn)SCs的增殖及其與NF-KB的表達(dá)上調(diào)是否存在某種關(guān)系進(jìn)行了研究.旨在為進(jìn)一步明確雪旺細(xì)胞增殖的機(jī)制提供相關(guān)數(shù)據(jù)。 方法：選擇健康家兔十只，給予5%戊巴比妥鈉(50mg/kg)麻醉，無菌條件下取出坐骨神經(jīng)，分離培養(yǎng)出雪旺細(xì)胞，并進(jìn)行S-100免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定，以鑒定細(xì)胞純度，將細(xì)胞密度調(diào)整至1×105/ml后，接種到預(yù)涂有鼠尾膠的三個培養(yǎng)皿，分別計(jì)為實(shí)驗(yàn)組（加入40ng/ml的NGF）；阻斷組（加入40ng/ml的NGF和anti-NGFR）；對照組（加入等量PBS）。置于37℃含5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天，熒光顯微鏡下觀察S-100熒光標(biāo)記陽性細(xì)胞并計(jì)數(shù)，提取RNA及蛋白進(jìn)行相關(guān)檢測，每組應(yīng)進(jìn)行三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)。然后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果：接種后的第24h開始，可以倒置顯微鏡下觀察到貼壁生長的具有明顯形態(tài)的雪旺細(xì)胞，鏡下觀察所有分組的細(xì)胞都包含兩類，雪旺細(xì)胞胞核為長形或圓形；胞體為立體感強(qiáng)、非常飽滿的梭形體，兩端有細(xì)長的突起，胞體周圍長有亮帶，即生長暈，細(xì)胞數(shù)量占絕大多數(shù)。另一種細(xì)胞即成纖維細(xì)胞，胞核很淺，具2~3個核仁，胞體扁平、大且不規(guī)則，常常出現(xiàn)多而短的突起，數(shù)量較少。所有分組的雪旺細(xì)胞均呈“端端相對，極極相對”等旋渦排列或網(wǎng)狀排列，逐漸形成片狀，有如“地毯”。 S-100免疫組化檢測鑒定，對胞漿為棕褐色的陽性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，結(jié)果為：本研究體外培養(yǎng)的雪旺細(xì)胞純度達(dá)到了91％。OD值結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組中，，雪旺細(xì)胞24~72h增殖速率明顯加強(qiáng)，72h后增殖依然強(qiáng)勁，至第5d達(dá)到峰值，最后漸漸緩慢下降；期間與對照組在每一時間節(jié)點(diǎn)均出現(xiàn)顯著差異。自CLSM上進(jìn)行圖像采集顯示：阻斷組和實(shí)驗(yàn)組雪旺細(xì)胞的NF-KB綠色熒光同樣多出現(xiàn)于胞漿區(qū)；實(shí)驗(yàn)組強(qiáng)度較正常組顯著提高，而阻斷組與對照組無明顯差別。經(jīng)LeiCaConfoeal圖像分析軟件分析，結(jié)果顯示：阻斷組與實(shí)驗(yàn)組均出現(xiàn)顯著差異（p＜0.01），而對照組與阻斷組組無顯著差異（p＞0.05）。對照組、阻斷組、實(shí)驗(yàn)組雪旺細(xì)胞中NF-KB mRNA進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR檢測后，實(shí)驗(yàn)組較對照組、阻斷組出現(xiàn)顯著增高，而阻斷組和對照組相比，無顯著差異。 結(jié)論：1.采用組織貼塊法、差速貼壁法與低濃度胰蛋白酶消化法、G-418相結(jié)合的純化形式，可以建立良好的家兔坐骨神經(jīng)SCs原代培養(yǎng)模型。 2.添加40ng/L的外源性NGF可以顯著提高SCs的增殖速率，同時NF-KB表達(dá)明顯上調(diào)。添加NGF+anti-NGFR組的SCs細(xì)胞增殖速率和NF-KB的表達(dá)水平都與對照組無明顯區(qū)別.由此可以說明NGF是通過與P75結(jié)合來促進(jìn)雪旺細(xì)胞增殖和提高NF-KB表達(dá)水平的。 3.NF-KB表達(dá)在SCs增殖過程中表達(dá)上調(diào)，且增殖最快的實(shí)驗(yàn)組中表達(dá)上調(diào)的最高，且大量實(shí)驗(yàn)研究表明NF-KB的表達(dá)可以抑制細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)細(xì)胞的增殖。所以推測NF-KB的高表達(dá)對雪旺細(xì)胞的增殖具有一定的作用，但若要證實(shí)其與SCs增殖具有直接的關(guān)聯(lián)性還需后續(xù)實(shí)驗(yàn)繼續(xù)探討。
【關(guān)鍵詞】：雪旺細(xì)胞 NGF NF-KB
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 英漢縮略詞對照表10-11
• 前言11-13
• 1 材料與方法13-22
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物取材13
• 1.2 設(shè)備及器械13-14
• 1.3 藥物及試劑14-15
• 1.4 溶液配制15-16
• 1.5 實(shí)驗(yàn)方法16-18
• 1.6 MTT 比色鑒定18-21
• 1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析21-22
• 2 結(jié)果22-28
• 2.1 體外培養(yǎng)的雪旺細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)22-23
• 2.2 體外培養(yǎng)的雪旺細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)23-24
• 2.3 MTT 比色實(shí)驗(yàn)24-25
• 2.4 不同實(shí)驗(yàn)組別雪旺細(xì)胞內(nèi) NF-KB 的表達(dá)水平比較25-26
• 2.5 不同實(shí)驗(yàn)組別雪旺細(xì)胞內(nèi)NF-KB-mRNA的表達(dá)26-28
• 3 討論28-32
• 3.1 雪旺細(xì)胞體外培養(yǎng)28-29
• 3.2 P75 與 NGF、NF-kB 的關(guān)聯(lián)性29-30
• 3.3 NGF、P75 與 NF-KB 的表達(dá)30-32
• 4 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-38
• 綜述38-54
• 參考文獻(xiàn)48-54
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄54-55
• 致謝55-56
• 附件56

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本文編號：319674