本文關(guān)鍵詞：Hippo通路主要組分與小鼠原始卵泡池大小的時(shí)序相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景及目的: 闡明原始卵泡啟動(dòng)的分子機(jī)制對(duì)于防治女性不孕癥和卵巢早衰具有重要意義。最近研究表明，卵巢皮層密度變化能觸發(fā)原始卵泡的啟動(dòng)，而在果蠅中的研究顯示由多個(gè)癌基因（Mst/Lats/Yap）參與的Hippo信號(hào)通路可感知卵巢細(xì)胞密度的變化。本課題探究Hippo通路主要組份MST、LATS、YAP與小鼠原始卵泡池大小的時(shí)序相關(guān)性以及原始卵泡啟動(dòng)前后的表達(dá)變化，為進(jìn)一步了解卵巢的功能及其調(diào)控機(jī)理增添新資料。 方法: 1.利用Western blot、Real-time PCR及免疫組化等方法檢測(cè)出生后3d、1m、5m及16m等不同月齡小鼠卵巢中mst、lats和yap mRNA及蛋白的表達(dá)變化及定位，分析Hippo信號(hào)通路主要組分與原始卵泡池大小的時(shí)序相關(guān)性。 2.建立小鼠原始卵泡體外培養(yǎng)模型，利用Western blot、Real-time PCR及免疫組化等方法檢測(cè)mst、lats和yap mRNA及蛋白在原始卵泡啟動(dòng)前后表達(dá)變化。 3.利用Western blot檢測(cè)原始卵泡啟動(dòng)前后及卵泡發(fā)育過程中P-YAP蛋白表達(dá)變化，分析P-YAP/YAP比值變化情況。 結(jié)果： 1．Western blot結(jié)果顯示：MST蛋白以3d組含量最高，此后隨著月齡的增長，MST含量顯著減少（p0.05），但1m、5m、16m三組之間表達(dá)并無顯著性差異（p0.05）；LATS蛋白表達(dá)亦呈現(xiàn)與MST的變化趨勢(shì)（p0.05，p0.01，p0.05），但16m與5m相比較卻顯著增多（p0.05）；YAP蛋白表達(dá)以3d組最低，此后1m、5m、16m組顯著升高（p0.05，p0.01，p0.01），而16m與5m組比較顯著減少（p0.05）。P-YAP蛋白表達(dá)與3d組相比，1m、5m、16m均顯著增多（p 0.05），但1m、5m、16m三組之間表達(dá)無顯著性差異（p0.05）；隨著月齡增加，P-YAP/YAP比值均顯著減少（p 0.05），但16m與5m組比較無顯著性差異（p0.05）。 2. Real-time PCR結(jié)果顯示：隨著小鼠月齡的增長，mst、lats mRNA表達(dá)均表現(xiàn)為3d最多，此后逐漸減少（p0.05，p0.01，p0.01），然而16m組表達(dá)顯著高于5m組（p0.05）；yap mRNA表達(dá)3d最少，此后極為顯著增多，（p0.01，p0.001，p0.01），但16m組表達(dá)顯著低于5m組（p0.05）。 3.免疫組化結(jié)果顯示：MST、LATS、YAP在原始卵泡中均主要分布于卵母細(xì)胞質(zhì)中，在初級(jí)卵泡、次級(jí)卵泡和成熟卵泡的卵母細(xì)胞質(zhì)、卵周膜及顆粒細(xì)胞中均有表達(dá)，且在次級(jí)卵泡中強(qiáng)表達(dá)于顆粒細(xì)胞，在閉鎖卵泡中則少表達(dá)或無表達(dá)。此外，P-YAP亦表達(dá)于卵巢卵泡中，在原始卵泡的卵母細(xì)胞質(zhì)中有表達(dá)，在初級(jí)卵泡、次級(jí)卵泡及成熟卵泡中主要分布于卵母細(xì)胞質(zhì)、卵周膜和顆粒細(xì)胞，在閉鎖卵泡中主要分布于顆粒細(xì)胞中。 4.3日齡小鼠卵巢體外培養(yǎng)8天后，HE染色結(jié)果顯示原始卵泡大量啟動(dòng)發(fā)育為初級(jí)卵泡，Western blot及免疫組化結(jié)果均顯示PCNA蛋白表達(dá)顯著增加（p 0.05），提示小鼠原始卵泡Waymouth體外培養(yǎng)體系成功建立。 5.利用Western blot及Real-time PCR檢測(cè)原始卵泡啟動(dòng)前后MST、LATS、YAP表達(dá)量變化，結(jié)果顯示：mst mRNA及蛋白表達(dá)均顯著減少（p 0.05）；latsmRNA及蛋白表達(dá)均顯著減少（p 0.05）；yap mRNA及蛋白表達(dá)均顯著增多（p0.05，p 0.01）；P-YAP蛋白表達(dá)顯著增多（p 0.05），P-YAP/YAP比值顯著減少（p 0.05）。 結(jié)論： 1. Hippo通路主要組份MST、LATS、YAP在小鼠卵巢內(nèi)均有表達(dá)，且與原始卵泡池大小存在著時(shí)序相關(guān)性。 2.在小鼠卵巢原始卵泡啟動(dòng)前后，，Hippo通路主要組份的表達(dá)及定位發(fā)生了改變。。 3.原始卵泡啟動(dòng)可能與P-YAP/YAP比值顯著下降有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：hippo 原始卵泡池 卵泡發(fā)育 小鼠
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R321.1
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 第1章 引言11-15
• 第2章 材料與方法15-24
• 2.1 材料15-17
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物15
• 2.1.2 主要試劑15-16
• 2.1.3 主要儀器16-17
• 2.2 方法17-24
• 2.2.1 原始卵泡的體外培養(yǎng)17-18
• 2.2.2 Western blot18-19
• 2.2.3 Real-time PCR19-21
• 2.2.4 免疫組織化學(xué)21-23
• 2.2.5 統(tǒng)計(jì)分析23-24
• 第3章 結(jié)果24-34
• 3.1 Hippo 通路主要組份在不同月齡小鼠卵巢中的表達(dá)及變化24-30
• 3.1.1 Western blot 檢測(cè) MST、LATS、YAP 蛋白表達(dá)量變化24-25
• 3.1.2 Real-time PCR 檢測(cè) mst、lats、yap mRNA 表達(dá)量變化25-26
• 3.1.3 免疫組化檢測(cè) MST、LATS、YAP 在卵巢組織中的分布26-29
• 3.1.4 Western blot 檢測(cè) P-YAP 蛋白表達(dá)，分析 P-YAP/YAP 比值29-30
• 3.2 建立小鼠原始卵泡體外培養(yǎng)體系，檢測(cè)相關(guān)卵泡發(fā)育指標(biāo)30-31
• 3.3 mst,lats,yapmRNA及蛋白在原始卵泡啟動(dòng)前后的表達(dá)量變化及P-YAP/YAP 比值分析31-34
• 第4章 討論34-37
• 4.1 小鼠選用分組依據(jù)34
• 4.2 Hippo 信號(hào)通路在小鼠卵巢中的表達(dá)及動(dòng)態(tài)變化34-35
• 4.3 Hippo通路在小鼠原始卵泡“啟動(dòng)”與“靜息”維持中可能扮演的角色35-37
• 第5章 結(jié)論37-38
• 致謝38-39
• 攻讀學(xué)位期間研究成果39-40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 綜述43-51
• 參考文獻(xiàn)49-51

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 肖紅梅;鐘群;盧光t;;不孕癥相關(guān)因素及病因分析[J];國際病理科學(xué)與臨床雜志;2007年02期

2 謝水玲;沈建箴;;Hippo通路在腫瘤發(fā)生中的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2012年08期

  本文關(guān)鍵詞：Hippo通路主要組分與小鼠原始卵泡池大小的時(shí)序相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：319706