本文關(guān)鍵詞：衰老大鼠模型的建立及增齡對(duì)大鼠腸黏膜上皮屏障的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分衰老大鼠模型的建立[背景]社會(huì)日趨老年化,與衰老相關(guān)的各種老年疾病及如何延緩衰老成為老齡化社會(huì)關(guān)注的重點(diǎn)與熱點(diǎn)。研究衰老需要衰老動(dòng)物模型。理論上,以自然衰老動(dòng)物為模型進(jìn)行研究最理想,但自然衰老動(dòng)物存在飼養(yǎng)周期長(zhǎng)、價(jià)格昂貴、來(lái)源稀缺同源性差等缺點(diǎn),不能被廣泛使用。因此,學(xué)者開(kāi)始探討、研究建立衰老動(dòng)物模型,來(lái)滿足科研的需要。到目前為止,常用的人工動(dòng)物衰老模型主要有：D-半乳糖(D-galactose, D-gal)注射、β-淀粉樣蛋白注射、快速老化小鼠、輻照Y射線、臭氧損傷、去除胸腺等方法建立衰老模型。這些衰老模型各有利弊。其中,多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)證實(shí),D-gal可使許多組織出現(xiàn)類似衰老的退行性改變,如與自然衰老相似的生化改變、免疫功能低下、基因表達(dá)與調(diào)控異常、細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖能力下降及細(xì)胞退行性改變。且D-gal皮下注射這一方法簡(jiǎn)便易行、價(jià)格低廉、結(jié)果穩(wěn)定。因此,實(shí)驗(yàn)性衰老模型——D-gal模型已成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究老年病常用的病理模型。[目的]本實(shí)驗(yàn)采用國(guó)內(nèi)最常用的建立衰老動(dòng)物模型方法,即通過(guò)對(duì)SD大鼠采取D-半乳糖連續(xù)皮下注射的方法建立衰老大鼠模型,并對(duì)其相關(guān)的衰老指標(biāo)進(jìn)行初步分析與評(píng)價(jià),來(lái)觀察大鼠在衰老過(guò)程中體重、衰老指標(biāo)如超氧化物歧化酶(supemxide dismutate, SOD)、丙二醛(malondiadehycle, MDA)等方面的變化。同時(shí)利用該衰老大鼠模型,對(duì)后續(xù)研究提供衰老實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。[材料和方法](1)選取3月齡SD大鼠10只(A組)、12月齡SD大鼠10只(B組)、24月齡衰老模型SD大鼠10只(C組),其中24月齡衰老模型大鼠由3月齡SD大鼠予D-gal按0.125g·kg-1·d1劑量皮下連續(xù)注射40d的方法建立。各組均常規(guī)攝食和飲水飼養(yǎng)40d,飼養(yǎng)期間每10天測(cè)量各組大鼠體重變化,飼養(yǎng)40d后測(cè)量各組大鼠血清SOD活力、MDA含量；取大鼠胸腺、脾臟稱重,計(jì)算胸腺、脾臟指數(shù)。(2)比較3月齡組(A組)、12月齡組(B組)和24月齡衰老模型組(C組)間體重、血清SOD活力、MDA含量、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)的差異。[結(jié)果](1)常規(guī)飲食飼養(yǎng)40d后,24月齡衰老模型鼠(C組)、12月齡大鼠(B組)與3月齡大鼠(A組)相比,體重增長(zhǎng)均減慢[24月齡(41.3±11.1)g,12月齡(85.6±10.9)g,3月齡(125.3±15.2)g,P0.05],且24月齡衰老模型鼠體重增長(zhǎng)較12月齡亦減慢(P0.05)。(2)24月齡衰老模型鼠(C組)、12月齡大鼠(B組)與3月齡大鼠(A組)相比,血清SOD活力下降[24月齡(50.48±10.12)U/m1,12月齡(58.40±5.57)U/ml,3月齡(66.38±5.39)U/m1,P0.05],且24月齡衰老模型鼠血清SOD活力較12月齡亦下降(P0.05)。(3)24月齡衰老模型鼠(C組)、12月齡大鼠(B組)與3月齡大鼠(A組)相比,血清MDA含量增加[24月齡(11.83±3.13)nmol/ml,12月齡(8.41± 2.04)nmol/ml,3月齡(4.81±1.37)nmol/ml,P0.05],且24月齡衰老模型鼠血清MDA含量較12月齡亦增加(P0.05)。(4)24月齡衰老模型鼠(C組)、12月齡大鼠(B組)與3月齡大鼠(A組)相比,胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)均降低[胸腺指數(shù)：24月齡(0.089±0.006)g/100g,12月齡(0.107±0.005)g/100g,3月齡(0.230±0.011)g/100g,P0.05；脾臟指數(shù)：24月齡(0.147±0.011)g/100g,12月齡(0.138±0.007)g/100g,3月齡(0.305±0.017)g/100g,P0.05],且24月齡衰老模型鼠胸腺指數(shù)較12月齡亦降低(P0.05)。[結(jié)論]用D-gal按0.125g·kg-1·d-1劑量皮下連續(xù)注射40d的方法能成功建立衰老的大鼠模型。隨著年齡的增長(zhǎng),SD大鼠的體重增長(zhǎng)減慢,血清SOD活力、胸腺指數(shù)逐漸下降,血清MDA含量逐漸增加。第二部分X椓潿源笫蟪︷つど掀て琳系撓跋靃背景]隨著自然增齡,老年人機(jī)體在結(jié)構(gòu)和功能上出現(xiàn)各種退行性變化,腸道作為機(jī)體抵御病原體的第一道防線,在多種急慢性疾病的發(fā)生發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。因此抗腸道衰老也逐漸成為老年醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。腸道的屏障分為上皮屏障(機(jī)械屏障)、免疫屏障、生物屏障和化學(xué)屏障四類。其中以上皮屏障和免疫屏障尤為重要。研究表明,腸道的上皮屏障受多種致病因素(如營(yíng)養(yǎng)不良、氧化應(yīng)激、感染、酒精、惡性腫瘤、非甾體類藥物、創(chuàng)傷等)的影響。但增齡是否對(duì)腸黏膜上皮屏障功能產(chǎn)生影響,仍是老年醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域中的空白,與衰老相關(guān)的腸黏膜屏障損害方面還缺乏科學(xué)證據(jù)。[目的]觀察衰老大鼠腸黏膜上皮屏障結(jié)構(gòu)隨著增齡出現(xiàn)的變化,為腸道老化及延緩腸道衰老方面的研究提供理論依據(jù)。[材料和方法](1)選取3月齡SD大鼠10只(A組)、12月齡SD大鼠10只(B組)、24月齡衰老模型SD大鼠10只(C組),其中24月齡衰老模型大鼠由3月齡SD大鼠予D-gal按0.125g·kg-1·d1劑量皮下連續(xù)注射40d的方法建立。常規(guī)飼養(yǎng)40d后取各組大鼠末端回腸組織進(jìn)行常規(guī)HE染色,觀察形態(tài)學(xué)改變及絨毛高度、厚度等,運(yùn)用免疫組化技術(shù)Envision兩步法檢測(cè)小腸黏膜組織標(biāo)本中Occludin、ZO-1蛋白的水平；運(yùn)用半定量RT-PCR技術(shù)分析小腸黏膜組織標(biāo)本中Occludin mRNA、ZO-1 mRNA的表達(dá)水平；取各組大鼠肝臟、脾臟、腸系膜淋巴結(jié)組織進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng),計(jì)算腸道細(xì)菌移位率。(2)比較3月齡組(A組)、12月齡組(B組)和24月齡衰老模型組(C組)間小腸黏膜組織標(biāo)本中Occludin和ZO-1蛋白水平、Occludin mRNA和ZO-1mRNA的表達(dá)水平、腸道細(xì)菌移位率的差異。[結(jié)果](1)24月齡衰老模型鼠(C組)、12月齡大鼠(B組)小腸黏膜厚度及絨毛高度均較3月齡(A組)降低[小腸黏膜厚度：24月齡(87.6±6.32)μm,12月齡(131.8±5.22)μm,3月齡(162.9±7.28)μ m,P0.05；絨毛高度：24月齡(56.4±5.38)μm,12月齡(76.7±5.40)μ m,3月齡(108.1±6.42)μ m,P0.05],且24月齡衰老模型鼠小腸黏膜厚度及絨毛高度較12月齡亦降低(P0.05)。(2)24月齡衰老模型鼠(C組)、12月齡大鼠(B組)小腸黏膜組織中緊密連接蛋白(Occludin、ZO-1)表達(dá)均較3月齡(A組)減少[Occludin蛋白：24月齡(2.23±0.60)%,12月齡(4.21±0.61)%,3月齡(12.31±0.94)%,P0.05；ZO-1蛋白：24月齡(2.03±0.54)%,12月齡(4.02±0.65)%,3月齡(12.21±0.81)%,P0.05],且24月齡衰老模型鼠小腸黏膜組織中緊密連接蛋白(Occludin、ZO-1)表達(dá)較12月齡亦降低(PO.05)。(3)24月齡衰老模型鼠(C組)、12月齡大鼠(B組)小腸黏膜組織中Occludin mRNA和ZO-1mRNA相對(duì)表達(dá)量較3月齡(A組)明顯減少[Occludin mRNA:24月齡(0.20±0.03),12月齡(0.38±0.02),3月齡(0.66±0.03),P0.05； ZO-1mRNA:24月齡(0.18±0.03),12月齡(0.37±0.02),3月齡(0.63±0.03),P0.05],且24月齡衰老模型鼠小腸黏膜組織中Occludin mRNA和ZO-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量較12月齡亦減少(P0.05)。(4)3組大鼠間腸道細(xì)菌移位率無(wú)顯著差異。[結(jié)論]隨著年齡的增長(zhǎng),老年SD大鼠分別與壯年、青年SD大鼠相比,小腸黏膜厚度及絨毛高度降低,小腸黏膜組織中緊密連接蛋白(Occludin和ZO-1)減少,小腸黏膜組織中緊密連接蛋白mRNA (Occludin mRNA、ZO-1 mRNA)表達(dá)減少,但腸道細(xì)菌移位率無(wú)顯著差異。
【關(guān)鍵詞】：衰老 D-半乳糖 動(dòng)物模型 衰老 D-半乳糖 動(dòng)物模型 腸黏膜 連接蛋白類
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R339.38;R-332
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照4-6
• 中文摘要6-11
• 英文摘要11-15
• 第一部分 衰老大鼠模型的建立15-32
• 引言15-16
• 材料與方法16-20
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-25
• 討論25-31
• 結(jié)論31-32
• 第二部分 增齡對(duì)SD大鼠腸黏膜上皮屏障的影響32-53
• 引言32-34
• 材料與方法34-40
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-49
• 討論49-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 綜述56-61
• 參考文獻(xiàn)60-61
• 附錄一 研究生期間撰寫(xiě)發(fā)表論文及綜述61-70
• 附錄二 致謝70-71

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 黎介壽;腸衰竭——概念、營(yíng)養(yǎng)支持與腸粘膜屏障維護(hù)[J];腸外與腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng);2004年02期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 董會(huì)萍;D-半乳糖衰老模型建立及模型小鼠認(rèn)知功能障礙的研究[D];大連理工大學(xué);2008年

  本文關(guān)鍵詞：衰老大鼠模型的建立及增齡對(duì)大鼠腸黏膜上皮屏障的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：316218