本文關(guān)鍵詞：扶正清熱利濕方治療泛耐藥大腸埃希氏菌尿路感染小鼠模型實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：尿路感染(urinary tract infection, UTI,簡(jiǎn)稱尿感)是指病原體在機(jī)體內(nèi)尿路中生長(zhǎng)繁殖,侵犯尿路粘膜或組織而引起的尿路炎癥,是臨床上最常見的感染性疾病之一。它主要由細(xì)菌感染引起,其中以大腸桿菌最為常見。導(dǎo)致尿路感染的大腸桿菌又稱為致病性大腸桿菌或致腎盂腎炎大腸桿菌(uropathogenic Escherichia coli,UPEC)。在本研究的前期階段,我們針對(duì)UPEC尿路感染的發(fā)病機(jī)制及治療方法進(jìn)行了一系列研究,發(fā)現(xiàn)細(xì)菌耐藥是臨床治療UPEC尿路感染的關(guān)鍵和難點(diǎn)。為了達(dá)到預(yù)想的結(jié)果,進(jìn)一步尋找安全有效的抗生素替代治療方案有著十分重要的現(xiàn)實(shí)意義,而這也正是發(fā)揮中醫(yī)辨證論治優(yōu)勢(shì)所在。因此,尋找新的具有治療價(jià)值的復(fù)方扶正清熱利濕方已成為尿路感染研究的重要內(nèi)容。扶正清熱利濕方,是包含了十多種扶正清熱利濕方成分的一種復(fù)方藥,從中醫(yī)辨證論治角度來講,它可以達(dá)到清熱利濕通淋,滋陰補(bǔ)腎健脾,以扶正祛邪的治療效果。 因此,本論文以前期研究結(jié)果所篩選出的致病性強(qiáng)、耐藥性廣、生物膜陽(yáng)性且產(chǎn)ESBL的UPEC菌株為研究對(duì)象,采用尿道插管法來建立UPEC尿路感染的小鼠模型,以扶正清熱利濕方和抗生素(亞胺培南)對(duì)小鼠模型進(jìn)行干預(yù),并通過監(jiān)測(cè)治療前后小鼠的癥狀、體征以及各項(xiàng)生理指標(biāo)的變化,評(píng)估扶正清熱利濕方對(duì)UPEC菌尿路感染的治療效果。最后得出結(jié)論：扶正清熱利濕方對(duì)高致病、多重耐藥UPEC尿路感染小鼠模型具有治療作用,且與抗生素亞胺培南的療效相當(dāng)。 本課題主要從以下幾個(gè)方面進(jìn)行研究： 首先,基于實(shí)驗(yàn)室前期在扶正清熱利濕方抗菌上的研究結(jié)果,結(jié)合國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)已報(bào)道的大腸桿菌毒力因子以及耐藥基因的分布及作用分析結(jié)果,共挑選了95株臨床分離UPEC菌株對(duì)UPEC中廣泛分布的24對(duì)毒力基因進(jìn)行篩選,最終得到了致病性都很強(qiáng)的15株UPEC菌,并對(duì)致病性都很強(qiáng)的15株大腸桿菌進(jìn)行了有關(guān)毒力表型的相關(guān)檢測(cè)及耐藥譜的分析；最終得出的結(jié)論：UPEC5、UPEC10、 UPEC169菌,均出現(xiàn)溶血現(xiàn)象、其中UPEC10和UPEC169菌屬生物膜陽(yáng)性菌株,且常見抗生素的耐藥率高,同時(shí),UPEC10菌株還是ESBL陽(yáng)性菌株,且耐藥性更廣。進(jìn)而結(jié)合95株臨床分離UPEC菌株對(duì)常見抗生素的耐藥性分析其中毒力基因、耐藥基因的分布及其與耐藥性的內(nèi)在關(guān)系；最終我們得出結(jié)論：毒力、耐藥基因數(shù)與抗生素的耐藥程度有顯著的相關(guān)性,而且攜帶毒力基因越多的分離株,耐藥性越強(qiáng)；耐藥基因分布率高的產(chǎn)ESBL的UPEC菌株對(duì)常見抗生素的耐藥性普遍很高。 其次,在構(gòu)建GFP綠色熒光標(biāo)記菌株過程中,關(guān)鍵是篩選出用于建立尿路感染模型的UPEC菌株。根據(jù)前期研究分析的結(jié)果,選用致病性強(qiáng)、耐藥性廣、生物膜陽(yáng)性且產(chǎn)ESBL的UPEC10作為本實(shí)驗(yàn)研究的試驗(yàn)菌株；采用電轉(zhuǎn)法將GFP熒光質(zhì)粒轉(zhuǎn)入實(shí)驗(yàn)菌株UPEC10中,進(jìn)行抗性篩選,并在熒光顯微鏡下篩選熒光細(xì)菌,最終得出結(jié)論：熒光質(zhì)粒已被轉(zhuǎn)入到UPEC10中,熒光標(biāo)記菌株UPEC10-GFP構(gòu)建成功。這為后期順利確定尿路感染模型構(gòu)建是否成功以及把握尿路感染過程中小鼠體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化差異,奠定了一定的基礎(chǔ)。 通過抗菌機(jī)制的初步研究,采用微量稀釋的方法對(duì)MIC/MBC以及扶正清熱利濕方的耐藥性進(jìn)行了檢測(cè),最終得出的結(jié)論是：扶正清熱利濕方對(duì)UPEC10菌的最小抑菌濃度MIC是125mg/ml,最小殺菌濃度MBC是250mg/ml;扶正清熱利濕方逆轉(zhuǎn)了UPEC10菌的耐藥性；于此同時(shí),采用MTT法和微量稀釋法來檢測(cè)生物膜的形成以及扶正清熱利濕方對(duì)生物膜形成的影響,最終得出的結(jié)論是：無(wú)論扶正清熱利濕方在預(yù)先包被或不包被的情況下,扶正清熱利濕方本身對(duì)生物膜的形成都具有一定的抑制作用；而生物膜的存在導(dǎo)致UPEC10菌對(duì)抗生素的抵抗力增強(qiáng)。 最后,在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,針對(duì)熒光報(bào)告UPEC10-GFP感染小鼠的濃度和劑量進(jìn)行了摸索和試驗(yàn),獲得了最佳的菌液感染濃度和最佳劑量,并成功建立了熒光報(bào)告UPEC10-GFP菌感染小鼠模型；然后,采用扶正清熱利濕方和亞胺培南(IPM)對(duì)感染成功的小鼠模型進(jìn)行干預(yù)；最后,通過對(duì)其小鼠脾臟、腎臟、膀胱和尿液進(jìn)行菌落計(jì)數(shù),分析臟器中的細(xì)菌清除率,評(píng)價(jià)扶正清熱利濕方對(duì)多重耐藥UPEC10-GFP菌尿路感染小鼠模型的治療作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,扶正清熱利濕方治療后,各臟器中細(xì)菌計(jì)數(shù)均低于模型組和抗生素組,尿液中的細(xì)菌計(jì)數(shù)與小鼠模型臟器指數(shù)均低于模型組,但與抗生素組相當(dāng)。同時(shí),經(jīng)灌胃小鼠制備的含藥血清對(duì)細(xì)菌具有一定的抑菌效果。 通過以上實(shí)驗(yàn),可以進(jìn)一步得出結(jié)論：生物膜的存在使得UPEC耐藥性增加,更加不利于細(xì)菌的生長(zhǎng),而扶正清熱利濕方可以抑制UPEC生物膜形成,降低UPEC菌在小鼠體內(nèi)的定殖和生存能力,以此,在治療過程中,扶正清熱利濕方抑制UPEC菌在臟器中寄生的能力可能會(huì)優(yōu)于抗生素。通過扶正清熱利濕方復(fù)方治療法,細(xì)菌雖然仍部分存在,卻可以抑制細(xì)菌在臟器中寄生,同時(shí),通過生物膜改觀,臟器炎癥損傷也相應(yīng)地減小。 綜上所述,扶正清熱利濕方對(duì)高致病、多重耐藥UPEC尿路感染小鼠模型具有治療作用,且與抗生素亞胺培南的療效相當(dāng)。通過扶正清熱利濕方治療后,又可以通過生物膜改觀來減少臟器的炎癥損傷。 因此,扶正清熱利濕方治療UPEC菌引起的尿道感染具有重要的現(xiàn)實(shí)意義；然而,扶正清熱利濕方能夠一定程度降低細(xì)菌的耐藥性,使其對(duì)多種抗生素的敏感性增加,提示我們可能與通過消除致病菌的某些質(zhì)粒有一定關(guān)系；所以,關(guān)于其逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性的具體有效機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：尿路感染 扶正清熱利濕方 大腸埃希菌 UPEC
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R-332;R285.5
【目錄】：

• 摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 英文縮略表14-15
• 第一章 文獻(xiàn)綜述15-21
• 1.1 尿路感染的病原菌及其耐藥性的研究進(jìn)展15-16
• 1.2 尿路感染的途徑及其致病性的研究進(jìn)展16-17
• 1.3 尿路感染的發(fā)病機(jī)制及其中藥治療的研究進(jìn)展17-19
• 1.4 本課題的主要研究?jī)?nèi)容及其相關(guān)的方法研究19-21
• 第二章 引言21-23
• 1 研究背景21
• 2 研究目的和意義21-23
• 第三章 泛耐藥大腸桿菌(UPEC)的毒力表型與耐藥性分析23-45
• 1 材料23-24
• 1.1 實(shí)驗(yàn)菌株和基因23
• 1.2 抗菌藥物23-24
• 1.3 主要培養(yǎng)基與試劑24
• 1.4 主要試劑與培養(yǎng)基的配制24
• 1.5 實(shí)驗(yàn)儀器24
• 2 方法24-29
• 2.1 毒力基因的篩選與分析24-26
• 2.2 ESBL耐藥基因的篩選以及在95株UPEC臨床分離菌中的分布26-27
• 2.3 95株UPEC臨床分離株的耐藥性分析27-28
• 2.4 毒力表型的檢測(cè)與觀察28
• 2.5 UPEC生物膜的形成以及對(duì)耐藥性的影響28-29
• 3 結(jié)果29-41
• 3.1 毒力基因的篩選與分析29-33
• 3.2 ESBL耐藥基因的篩選以及在95株臨床UPEC分離菌中的分布33-34
• 3.3 95株UPEC臨床分離株的耐藥性分析34-36
• 3.4 毒力與耐藥的關(guān)系：毒力基因分布與耐藥關(guān)系36-39
• 3.5 毒力表型的檢測(cè)與觀察39-40
• 3.6 UPEC生物膜的形成及其對(duì)耐藥性的影響40-41
• 4 分析和討論41-45
• 4.1 95株臨床UPEC分離株毒力基因分布與耐藥性關(guān)系的分析41-42
• 4.2 UPEC分離菌株中ESBLs菌株的耐藥性分析以及與毒力基因分布的關(guān)系42-43
• 4.3 UPEC生物膜的形成以及與耐藥性的關(guān)系43-45
• 第四章 GFP綠色熒光標(biāo)記菌株的構(gòu)建45-49
• 1 材料45
• 1.1 實(shí)驗(yàn)菌株和所用試劑45
• 1.2 主要儀器45
• 2 方法45-46
• 2.1 菌株的篩選45-46
• 2.2 UPEC10的感受態(tài)細(xì)胞制備46
• 2.3 將GFP的熒光質(zhì)——PS858質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)入U(xiǎn)PEC菌株46
• 3 結(jié)果46-47
• 4 分析與結(jié)論47-49
• 第五章 熒光報(bào)告UPEC小鼠模型的建立49-55
• 1 材料49
• 1.1 實(shí)驗(yàn)菌株與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物49
• 1.2 實(shí)驗(yàn)器械49
• 2 方法49-50
• 2.1 熒光報(bào)告UPEC10~(-GFP)菌株感染小鼠模型的最佳濃度以及感染劑量的確定49-50
• 2.2 熒光報(bào)告UPEC10~(-GFP)菌株感染小鼠模型的建立50
• 3. 結(jié)果50-52
• 3.1 熒光報(bào)告UPEC10~(-GFP)菌株感染小鼠模型的最佳濃度以及感染劑量的確定50-52
• 3.2 熒光報(bào)告UPEC10~(-GFP)菌株感染小鼠模型的建立52
• 4 分析與結(jié)論52-55
• 第六章 扶正清熱利濕方和抗生素治療感染55-65
• 1 材料55
• 1.1 實(shí)驗(yàn)菌株與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物55
• 1.2 實(shí)驗(yàn)器械55
• 1.3 所需試劑、藥物與培養(yǎng)基55
• 1.4 扶正清熱利濕方藥物組成55
• 1.5 藥物的配制與煎煮55
• 2 方法55-56
• 3 結(jié)果56-62
• 4 分析與討論62-65
• 第七章 抗菌作用初步分析65-77
• 1 材料65-66
• 1.1 實(shí)驗(yàn)菌株和主要試劑65
• 1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物65
• 1.3 主要培養(yǎng)基以及配制65
• 1.4 抗菌藥物以及紙片65-66
• 1.5 扶正清熱利濕方藥物組成66
• 1.6 實(shí)驗(yàn)儀器66
• 2. 方法66-69
• 2.1 扶正清熱利濕方對(duì)UPEC10菌的體外抑菌/殺菌作用66-67
• 2.2 扶正清熱利濕方的作用下,UPEC10耐藥性變化的分析67
• 2.3 扶正清熱利濕方對(duì)UPEC生物膜形成的影響67-68
• 2.4 扶正清熱利濕方作用下,UPEC10菌對(duì)抗生素的敏感性變化的實(shí)驗(yàn)68
• 2.5 含藥血清抑菌作用分析68-69
• 3 結(jié)果69-75
• 3.1 扶正清熱利濕方對(duì)UPEC10菌的體外抑菌/殺菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果69
• 3.2 扶正清熱利濕方的作用下,UPEC10耐藥性變化的分析69-71
• 3.3 扶正清熱利濕方對(duì)UPEC生物膜形成的影響71-73
• 3.4 扶正清熱利濕方作用下,UPEC10菌對(duì)抗生素的敏感性變化的實(shí)驗(yàn)73-75
• 3.5 含藥血清抑菌作用分析75
• 4 分析與討論75-77
• 第八章 結(jié)論與展望77-79
• 參考文獻(xiàn)79-85
• 致謝85-87
• 在讀期間發(fā)表論文情況87

【參考文獻(xiàn)】

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7 汪復(fù);朱德妹;胡付品;阮斐怡;倪語(yǔ)星;孫景勇;徐英春;張小江;胡云健;艾效曼;俞云松;楊青;孫自鏞;李麗;賈蓓;黃文祥;卓超;蘇丹虹;魏蓮花;吳玲;張朝霞;季萍;王傳清;薛建昌;張泓;李萬(wàn)華;徐元宏;沈繼錄;單斌;杜艷;;2009年中國(guó)CHINET細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)[J];中國(guó)感染與化療雜志;2010年05期

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  本文關(guān)鍵詞：扶正清熱利濕方治療泛耐藥大腸埃希氏菌尿路感染小鼠模型實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：314251