本文關(guān)鍵詞：E2泛素交聯(lián)酶RAD6在人類細(xì)胞周期中調(diào)控基因表達(dá)的機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：細(xì)胞周期是指連續(xù)分裂的細(xì)胞從一次有絲分裂結(jié)束開始到下一次分裂結(jié)束,由一個細(xì)胞分裂為兩個相同子細(xì)胞的過程,是細(xì)胞最基本的反應(yīng)。要保證整個分裂過程的精確性,就必須對細(xì)胞周期進(jìn)程中相關(guān)基因的表達(dá)進(jìn)行精確的調(diào)控,以確保細(xì)胞周期中各個事件的有序運(yùn)行。在細(xì)胞內(nèi),有一系列的機(jī)制調(diào)控著整個網(wǎng)絡(luò)的正常運(yùn)行,而蛋白的泛素化修飾便是其中至關(guān)重要的一環(huán)。 蛋白的泛素化修飾在蛋白質(zhì)的降解和功能調(diào)節(jié)中起著重要的作用。泛素化修飾過程一般需要三類酶來參與,分別是E1泛素激活酶、E2泛素交聯(lián)酶以及E3泛素-蛋白連接酶。這三類酶協(xié)同作用,可以為特定的蛋白質(zhì)底物打上不同形式的泛素化修飾(單泛素化或者多泛素化)。現(xiàn)在,人們對于蛋白質(zhì)的多泛素化修飾已經(jīng)有了足夠深入的了解,普遍認(rèn)為多泛素化修飾一般會導(dǎo)致底物蛋白質(zhì)的降解。生物體內(nèi)折疊異常或者功能執(zhí)行完畢的蛋白質(zhì)會先被打上多泛素化的標(biāo)簽,然后通過“泛素-蛋白酶體”途徑被降解掉。單泛素化修飾對蛋白質(zhì)的影響往往比較復(fù)雜,它一般不會導(dǎo)致蛋白質(zhì)底物的降解,而是對其生物學(xué)功能有著重要的調(diào)控作用。RAD6就是一種相當(dāng)重要的E2泛素交聯(lián)酶,它廣泛地參與到諸如DNA損傷修復(fù)、組蛋白修飾以及基因表達(dá)等多種生物學(xué)過程中。 本研究首先在人類肝臟細(xì)胞HL-7702中對RAD6分別進(jìn)行過表達(dá)和沉默實(shí)驗(yàn),然后檢測HL-7702細(xì)胞在細(xì)胞周期進(jìn)程以及細(xì)胞增殖能力方面的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明過表達(dá)RAD6能夠促進(jìn)細(xì)胞從G1期向S期轉(zhuǎn)變,增強(qiáng)細(xì)胞的增殖能力,而RAD6的沉默所產(chǎn)生影響則截然相反。因?yàn)樵缬性S多文獻(xiàn)報道細(xì)胞周期蛋白D1(CCND1)是決定細(xì)胞從G1期向S期轉(zhuǎn)變的關(guān)鍵因子,由此可以推測RAD6對細(xì)胞的影響可能是通過調(diào)控CCND1的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。對CCND1表達(dá)水平的分析以及RNA干擾實(shí)驗(yàn)的結(jié)果也證實(shí)RAD6確實(shí)是通過調(diào)控CCND1的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞周期進(jìn)程以及細(xì)胞增殖能力的影響。為了進(jìn)一步了解RAD6調(diào)控CCND1表達(dá)的分子機(jī)制,本研究通過染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)來分析RAD6對CCND1啟動子區(qū)域組蛋白的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明過表達(dá)RAD6能夠提高CCND1基因啟動子區(qū)域中組蛋白H2B的單泛素化的水平和H3K4三甲基化的水平,從而促進(jìn)CCND1的轉(zhuǎn)錄。在了解了RAD6與CCND1的相互作用對于細(xì)胞周期進(jìn)程以及細(xì)胞增殖的影響后,本研究又通過生物信息學(xué)的方法來分析其在臨床上的應(yīng)用價值。Kaplan-Meier生存率分析和基因表達(dá)水平的分析均表明,在乳腺癌病人的臨床樣品中RAD6與CCND1之間存在明確的對應(yīng)關(guān)系,能在一定程度上反映出癌癥的發(fā)生與發(fā)展,為病人的治療提供了理論基礎(chǔ)。 綜上所述,本研究系統(tǒng)地闡述了在人類細(xì)胞中RAD6通過調(diào)控CCND1的表達(dá)來參與細(xì)胞周期進(jìn)程的調(diào)節(jié),進(jìn)而調(diào)控了細(xì)胞的增殖。這一分子機(jī)制的發(fā)現(xiàn)填補(bǔ)了相關(guān)基礎(chǔ)領(lǐng)域的理論空白。同時,臨床樣品的分析結(jié)果也使得RAD6與CCND1有望成為乳腺癌分子診斷及預(yù)后的分子標(biāo)志物,對臨床醫(yī)學(xué)也具有重要的應(yīng)用價值。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)胞周期 泛素化 RAD6 CCND1 組蛋白修飾
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R329.28
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 符號說明10-11
• 1 前言11-17
• 1.1 細(xì)胞周期概述11-12
• 1.2 CCND1與G1-S期轉(zhuǎn)變12-13
• 1.3 蛋白的泛素化修飾13-14
• 1.4 RAD6的研究背景14-17
• 1.4.1 RAD6與DNA損傷修復(fù)15
• 1.4.2 RAD6在組蛋白修飾和基因表達(dá)調(diào)控中的作用15-16
• 1.4.3 RAD6在腫瘤發(fā)生與發(fā)展中的作用16
• 1.4.4 RAD6對抑癌基因p53的調(diào)控作用16-17
• 1.5 本研究的目的與意義17
• 2 實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器17-22
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料17
• 2.2 主要試劑17-21
• 2.3 主要儀器21-22
• 3 實(shí)驗(yàn)方法與步驟22-41
• 3.1 RAD6人類細(xì)胞表達(dá)載體的構(gòu)建22-29
• 3.2 RAD6在人類細(xì)胞中對基因表達(dá)的調(diào)控作用29-41
• 3.2.1 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染與蛋白表達(dá)水平的驗(yàn)證30-35
• 3.2.2 RAD6與細(xì)胞周期35
• 3.2.3 RAD6與細(xì)胞活力35-37
• 3.2.4 驗(yàn)證RAD6調(diào)控CCND1的表達(dá)37-38
• 3.2.5 RAD6的過表達(dá)與CCND1的沉默38
• 3.2.6 研究RAD6調(diào)控CCND1表達(dá)的機(jī)理38-41
• 3.3 RAD6與CCND1在臨床病例中的關(guān)系41
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析41-58
• 4.1 載體的構(gòu)建41-42
• 4.2 RAD6的過表達(dá)與沉默42-43
• 4.3 RAD6對細(xì)胞周期的影響43-45
• 4.4 RAD6對細(xì)胞活力的影響45-48
• 4.5 RAD6調(diào)控的CCND1表達(dá)48-50
• 4.6 RAD6的過表達(dá)與CCND1的RNA干擾50-52
• 4.7 RAD6調(diào)控CCND1表達(dá)的機(jī)理52-55
• 4.8 RAD6、CCND1與臨床病例55-58
• 5 總結(jié)與討論58-60
• 問題與展望60-61
• 附錄61-62
• 參考文獻(xiàn)62-66
• 致謝66-67
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表67

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;Expression of Egr-1,c-fos and cyclin D1 in esophageal cancer and its precursors:An immunohistochernical and in situ hybridization study[J];World Journal of Gastroenterology;2004年04期

  本文關(guān)鍵詞：E2泛素交聯(lián)酶RAD6在人類細(xì)胞周期中調(diào)控基因表達(dá)的機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：314133