本文關(guān)鍵詞：海藻糖對(duì)UVB照射皮膚的保護(hù)作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的： 1.探討海藻糖對(duì)UVB照射所致HaCaT細(xì)胞光損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制； 2.觀察海藻糖軟膏劑對(duì)大鼠及小鼠皮膚慢性UVB光損傷的抑制作用； 3.對(duì)產(chǎn)海藻糖合成酶的假單胞菌A50進(jìn)行小罐發(fā)酵條件及透性化技術(shù)摸索。 研究方法： 1. HaCaT細(xì)胞UVB照射損傷模型建立：以波長(zhǎng)為315nm的UVB光源為唯一光源，以不同劑量照射HaCaT細(xì)胞，再孵育48h后以CTG法檢測(cè)細(xì)胞活性，選擇HaCaT細(xì)胞50%左右死亡的劑量作為后期研究的照射劑量； 2.海藻糖對(duì)UVB照射所致HaCaT細(xì)胞的防護(hù)作用研究：向HaCaT細(xì)胞中加入不同濃度的海藻糖，再進(jìn)行UVB照射，孵育48h后以CTG法檢測(cè)細(xì)胞活性，選擇海藻糖的最佳作用濃度； 3.海藻糖對(duì)UVB照射所致HaCaT細(xì)胞的防護(hù)作用機(jī)制研究：用表達(dá)譜芯片分析海藻糖添加組與對(duì)照組差異表達(dá)的基因并進(jìn)行qRT-PCR驗(yàn)證，構(gòu)建差異基因慢病毒并感染細(xì)胞，對(duì)這些感染細(xì)胞再進(jìn)行紫外照射，檢測(cè)基因與生存率的關(guān)系，通過(guò)Western blot檢測(cè)γH2AX的表達(dá)與紫外照射、海藻糖添加及基因表達(dá)改變的關(guān)系。 4.海藻糖軟膏劑對(duì)大鼠及小鼠皮膚慢性UVB光損傷的抑制作用研究：制備海藻糖軟膏劑，以昆明小鼠（雄性）和SD大鼠（雄性）為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，均隨機(jī)分為6組，分別為：陰性對(duì)照組，造模組，軟膏劑基質(zhì)組，海藻糖高劑量組，海藻糖低劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組。每組5只，背部剃毛裸露皮膚，，每天接受UVB照射，其中小鼠照射30d，總照射劑量為86.4J/cm2；大鼠照射46d，總照射劑量為118.8J/cm2。待照射完畢后，小鼠取全血進(jìn)行血液生化及血常規(guī)檢測(cè)，取背部組織HE染色觀察皮膚病理改變，大鼠取背部組織HE染色觀察皮膚病理改變。 5.對(duì)產(chǎn)海藻糖合成酶菌株A50進(jìn)行5L發(fā)酵罐的發(fā)酵小試，研究發(fā)酵過(guò)程中菌體生長(zhǎng)、溶氧和產(chǎn)酶的關(guān)系；采用甲苯做透性化試劑，研究甲苯的加入量及加入時(shí)機(jī)，摸索A50細(xì)胞全細(xì)胞催化方法。 結(jié)果和結(jié)論： 1.建立紫外損傷細(xì)胞模型，48mJ/cm2為最合適的劑量； 2.0.5%海藻糖對(duì)UVB照射的HaCaT細(xì)胞有保護(hù)作用，可使細(xì)胞生存率恢復(fù)到75%左右； 3.利用表達(dá)譜芯片技術(shù)篩選及qRT-PCR驗(yàn)證，我們獲得了4種有意義的差異表達(dá)基因，分別是上調(diào)的uc021rnm.1，uc021qhm.1，uc002bro.1和下調(diào)的uc022boe.1，均屬于snoRNA基因。通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)構(gòu)建重組細(xì)胞，通過(guò)UV照射后細(xì)胞生存率的觀察，得到與海藻糖抗UVB損傷相關(guān)的基因uc021rnm.1。Western blot證實(shí)海藻糖和基因uc021rnm.1通過(guò)減輕UVB照射引起的DNA損傷而保護(hù)了細(xì)胞； 4.采用水包油劑型制作的海藻糖軟膏劑外觀呈白色，色澤均勻，質(zhì)地細(xì)膩，無(wú)粗糙感。置于39℃和4℃環(huán)境中存放6個(gè)月，無(wú)油水分離和腐敗變質(zhì)現(xiàn)象； 5.在小鼠皮膚慢性UVB光損傷的修復(fù)實(shí)驗(yàn)中，肉眼觀察發(fā)現(xiàn)，陽(yáng)性對(duì)照組和海藻糖高劑量組小鼠背部皮膚情況與陰性對(duì)照組小鼠類(lèi)似，海藻糖低劑量組小鼠背部部分區(qū)域紅腫，而基質(zhì)組和造模組小鼠背部紅腫嚴(yán)重，并伴有蛻皮現(xiàn)象，皮膚褶皺發(fā)硬，背毛基本沒(méi)有長(zhǎng)出；大鼠實(shí)驗(yàn)中陽(yáng)性對(duì)照組和海藻糖高劑量組有輕微紅斑產(chǎn)生，海藻糖低劑量組皮膚出現(xiàn)局部紅腫，基質(zhì)組和造模組皮膚皮損嚴(yán)重，結(jié)痂嚴(yán)重。 6.大鼠皮膚和小鼠皮膚的HE染色結(jié)果基本一致。海藻糖高劑量組實(shí)驗(yàn)鼠皮膚鏡下結(jié)構(gòu)基本正常，角質(zhì)化程度略大于陰性對(duì)照組，表皮略增厚，真皮腺體發(fā)達(dá)，膠原纖維形態(tài)正常；海藻糖低劑量組表皮增厚明顯，角質(zhì)化較重，真皮層膠原纖維少量斷裂，排列紊亂；基質(zhì)組與造模組，表皮顯著增厚，角質(zhì)化嚴(yán)重，真皮層內(nèi)膠原纖維大量斷裂，排列紊亂。 7.弱酸環(huán)境和碳源的補(bǔ)充有利于A50菌株增加產(chǎn)酶量； 8.海洋假單胞菌A50在5L發(fā)酵罐中的最高酶活力為4.08U/L，高于搖瓶水平； 9.將0.5%甲苯加入菌沉淀，可實(shí)現(xiàn)全細(xì)胞催化，但透性化試劑和透性化工藝還有待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：中波紫外線 HaCaT細(xì)胞 海藻糖 抗紫外損傷 表達(dá)譜芯片 snoRNA 海藻糖合成酶
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R3416
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 縮略詞10-12
• 前言12-16
• 第一部分 UVB 對(duì) HaCaT 細(xì)胞的損傷及海藻糖的保護(hù)作用16-43
• 一、實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器16-17
• 二、實(shí)驗(yàn)方法17-25
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-41
• 四、討論41-43
• 第二部分 海藻糖對(duì) UVB 照射動(dòng)物皮膚的保護(hù)作用43-55
• 一、實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器43-44
• 二、實(shí)驗(yàn)方法44-47
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果47-53
• 四、討論53-55
• 第三部分 產(chǎn)海藻糖合成酶的海洋假單胞菌 A50 產(chǎn)酶工藝研究55-69
• 一、實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器55-56
• 二、實(shí)驗(yàn)方法56-62
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果62-68
• 四、討論68-69
• 參考文獻(xiàn)69-72
• 發(fā)表論文和參與工作情況72-73
• 致謝73-74

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

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  本文關(guān)鍵詞：海藻糖對(duì)UVB照射皮膚的保護(hù)作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：313444