目的:為了制備抗體效價高、特異性好,可有效滿足RERG基因（Ras-related and estrogen-regulated growth inhibitor）上蛋白的相關測定,填補RERG多克隆抗體的研究空白。方法:試驗使用已經(jīng)在實驗室中克隆的RERG基因序列用于原核表達載體,構建原核表達載體pET32a-RERG;隨后進行RERG蛋白的原核表達;完成RERG蛋白的純化以及大白兔RERG多克隆抗體的制備與純化。結果:通過Western-blot鑒定發(fā)現(xiàn)RERG的目的條帶單一;使用ELISA檢測純化后的抗體效價,說明其效價達到合格抗體標準。結論:試驗制作的RERG抗體效價高、特異性好,可有效滿足RERG蛋白的相關測定,填補了RERG的多克隆抗體的研究空白。 

【文章來源】：黑龍江醫(yī)藥科學. 2019,42(05)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

HIs－ＲEＲG蛋白純化結果1．誘導前樣品;2．誘導后的樣品;3．超聲后上清;4．超聲后沉淀;M．marker

時，添加異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)對重組肌抑素表達進行誘導，同時做陰性對照:pEGX－T4－1和未加IPTG的BL21－pEGX－ＲEＲG。收集細胞，離心，SDS－PAGE檢測。3．2融合蛋白ＲEＲG表達及純化將各組份樣品進行SDS－PAGE分析，10%SDS－PAGE150V70min電泳顯示在預期大小位置出現(xiàn)明顯誘生條帶，與預期大小48ku一致，初步表明融合蛋白ＲEＲG得到了表達，表達形式為包涵體，見圖2。采用鎳瓊脂糖親和層析方法對目的蛋白進行純化后，得到單一的目的條帶，大小為48ku，見圖3，與目的蛋白大小一致，表明目的蛋白成功得到純化。圖3融合蛋白ＲEＲG的表達M．蛋白Marker;1．XGBNWXＲHis－ＲEＲG蛋白質圖4融合蛋白ＲEＲG的Western－blot鑒定M．蛋白Marker;1．融合蛋白ＲEＲG·2·黑龍江醫(yī)藥科學2019年10月第42卷第5期

離心，SDS－PAGE檢測。3．2融合蛋白ＲEＲG表達及純化將各組份樣品進行SDS－PAGE分析，10%SDS－PAGE150V70min電泳顯示在預期大小位置出現(xiàn)明顯誘生條帶，與預期大小48ku一致，初步表明融合蛋白ＲEＲG得到了表達，表達形式為包涵體，見圖2。采用鎳瓊脂糖親和層析方法對目的蛋白進行純化后，得到單一的目的條帶，大小為48ku，見圖3，與目的蛋白大小一致，表明目的蛋白成功得到純化。圖3融合蛋白ＲEＲG的表達M．蛋白Marker;1．XGBNWXＲHis－ＲEＲG蛋白質圖4融合蛋白ＲEＲG的Western－blot鑒定M．蛋白Marker;1．融合蛋白ＲEＲG·2·黑龍江醫(yī)藥科學2019年10月第42卷第5期

【參考文獻】：
期刊論文
[1]沙門氏菌絲氨酸蛋白酶YihE的原核表達及多克隆抗體制備[J]. 張志強,吳同壘,李永慧,王志仙,李蘊玉,張召興,賈青輝,李佩國.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2017(19)
[2]GST-CBX2-1融合蛋白表達載體的構建及其在原核細胞中的表達[J]. 劉婷雋,洪澤輝,胡安康.  黑龍江醫(yī)藥科學. 2017(03)



本文編號：3137133