本文關(guān)鍵詞：定經(jīng)湯對(duì)卵巢早衰模型大鼠胃腸功能的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【目的】 用聲-光-電復(fù)合應(yīng)激刺激法建立卵巢早衰大鼠模型，給予定經(jīng)湯進(jìn)行治療，通過(guò)觀(guān)察大鼠胃肌條的收縮、胃電慢波、胃排空率、小腸推進(jìn)率、胃酸、胃蛋白酶活性、ICC等，探討定經(jīng)湯對(duì)卵巢早衰模型大鼠胃腸功能的影響和調(diào)整機(jī)制。 【方法】 1.卵巢早衰大鼠模型的制備。購(gòu)買(mǎi)一批SPF級(jí)SD雌性大鼠，體重180-220g，適應(yīng)性飼養(yǎng)5d后，每天定時(shí)用顯微鏡觀(guān)察陰道涂片，選擇有2個(gè)連續(xù)正常動(dòng)情周期的大鼠用于造模實(shí)驗(yàn)，其余淘汰。篩選后的大鼠隨機(jī)分為正常組和卵巢早衰模型組，每組20只，共40只。主要刺激方法：采用聲-光-電復(fù)合應(yīng)激刺激大鼠（聲、光同時(shí)刺激10s，再加電擊足底，聲-光-電3種刺激同時(shí)維持60s后聲-光刺激停止，電擊足底維持5s，總計(jì)時(shí)間75s。每日進(jìn)行3次，1h內(nèi)完成）。附加應(yīng)激方法：禁食24h，禁水24h，電擊足底，4℃冷水游泳5min，通宵照明，夾尾1min，45℃烘箱熱烘5min，每天隨機(jī)給予一種刺激。連續(xù)造模20d，通過(guò)觀(guān)察大鼠的體征，動(dòng)情周期，組織形態(tài)學(xué)，促卵泡成熟激素（FSH）和雌二醇（E2）水平的變化，判斷造模是否成功。 2.定經(jīng)湯對(duì)大鼠胃竇環(huán)行平滑肌收縮的影響。將20只雌性大鼠隨機(jī)分為正常組（10只）和模型組（10只），正常組正常飼養(yǎng)，模型組按照第一部分的方法造模。造模20d后，制備大鼠胃竇環(huán)形肌，用MP150生物信號(hào)采集系統(tǒng)同時(shí)記錄安置在各恒溫灌流肌機(jī)槽中的胃平滑肌條的收縮活動(dòng)，觀(guān)察正常組和模型組胃肌條收縮幅度，頻率的差異。將56只雌性大鼠進(jìn)行造模，連續(xù)造模20d后，將大鼠隨機(jī)分為全方組、主藥對(duì)組、無(wú)主藥對(duì)組、疏肝組和補(bǔ)腎組、無(wú)鈣組和阿托品組7組，每組8只。給予各組大鼠高、中、低3個(gè)濃度相應(yīng)的藥物，觀(guān)察定經(jīng)湯及其拆方對(duì)卵巢早衰模型大鼠胃竇平滑肌收縮的影響，確定最佳濃度和最佳配方，后續(xù)實(shí)驗(yàn)均用此配方。 3.定經(jīng)湯對(duì)大鼠胃電慢波的影響。將30只雌性大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、給藥組，每組10只。從造模的第一天開(kāi)始，正常組和模型組灌胃生理鹽水，給藥組用定經(jīng)湯灌胃。連續(xù)20d后，用美國(guó)BIOPAC公司MP150多導(dǎo)生理記錄儀以及AcqKnowledge軟件記錄各組大鼠胃電慢波的胃電慢波頻率、峰峰值等指標(biāo)。 4.定經(jīng)湯對(duì)大鼠胃排空和小腸推進(jìn)率的影響。將30只雌性大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、給藥組，每組10只。從造模的第一天開(kāi)始，正常組和模型組灌胃生理鹽水，給藥組用定經(jīng)湯灌胃。連續(xù)造模20d，大鼠禁食（不禁水、藥）24h，正常組和模型組灌胃生理鹽水，給藥組灌胃定經(jīng)湯，30min后灌服2%葡聚糖藍(lán)2000溶液，每只0.4ml。再經(jīng)20min后頸推脫臼處死動(dòng)物，開(kāi)腹取全部胃腸，測(cè)定胃排空和小腸推進(jìn)率。 5.定經(jīng)湯對(duì)大鼠胃酸和胃蛋白酶活性的影響。將30只雌性大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、給藥組，每組10只。從造模的第一天開(kāi)始，正常組和模型組灌胃生理鹽水，治療組用定經(jīng)湯灌胃。實(shí)驗(yàn)20d后，將大鼠禁食不禁水24h，治療組用定經(jīng)湯灌胃，正常組和模型組用生理鹽水灌胃，1h后，用烏拉坦麻醉大鼠于腹部做切口，結(jié)扎幽門(mén)與十二指腸連接處，正常組和模型組由結(jié)扎部位向胃注入生理鹽水，治療組注入定經(jīng)湯，進(jìn)行胃酸和胃蛋白酶活性實(shí)驗(yàn)。 6. ICC超微結(jié)構(gòu)的觀(guān)察。打開(kāi)大鼠胃腔，取大鼠胃組織一塊。將大鼠胃標(biāo)本放在裝有涼Krebs液的容器內(nèi)，仔細(xì)去除胃內(nèi)容物，然后將組織平鋪于濾紙上，立即放入3%戊二醛固定，2%PBS沖洗，再用1%鋨酸固定2h，2%PBS沖洗，乙醇、丙酮梯度脫水，通過(guò)浸透，樹(shù)脂聚合，精確定位,，70nm超薄切片，1%醋酸鈾、枸櫞酸鉛染色，置透射電鏡下觀(guān)察正常組、卵巢早衰模型組、給藥組大鼠胃ICC超微結(jié)構(gòu)。 【結(jié)果】 1.造模后，與正常組進(jìn)行外在體征對(duì)比，模型組大鼠表現(xiàn)為體重增加緩慢，活動(dòng)減少，，反應(yīng)遲鈍，體毛黯淡無(wú)光澤。大便性狀發(fā)生改變，飲食量減少等癥狀；模型組與正常組相比，模型組促卵泡成熟激素（FSH）水平明顯升高，而雌二醇（E2）水平則明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P㩳0.01）；卵巢形態(tài)學(xué)上，正常組大鼠卵巢外觀(guān)顏色紅潤(rùn)，卵泡腔內(nèi)卵子生長(zhǎng)良好顆粒細(xì)胞豐富，有排卵后的出血點(diǎn)。而模型大鼠卵巢外觀(guān)顏色淡紅，卵泡內(nèi)為一空泡，無(wú)卵子生成，顆粒細(xì)胞少，無(wú)排卵后的出血點(diǎn)或出血點(diǎn)少。 2.與正常組相比，模型組的胃竇平滑肌收縮頻率低，幅度較小，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P㩳0.01）；定經(jīng)湯及其拆方對(duì)卵巢早衰模型大鼠胃竇平滑肌收縮有明顯的增強(qiáng)作用，其中高濃度的無(wú)主藥組作用最明顯。與給藥前對(duì)比，全方組和無(wú)主藥組胃竇肌條收縮力在高、中、低3個(gè)濃度水平都有明顯增強(qiáng)（P㩳0.01或P㩳0.05）；主藥組、補(bǔ)腎組和疏肝組在高濃度或中濃度水平有明顯增強(qiáng)（P㩳0.05）；與全方組對(duì)比，無(wú)鈣組和阿托品組給藥后收縮率明顯下降（P㩳0.01或P㩳0.05）。 3.模型組大鼠的胃電慢波峰峰值和頻率最小，圖形紊亂。模型組與正常組、給藥組均存在顯著性差異（P㩳0.01），說(shuō)明定經(jīng)湯能抑制卵巢早衰模型大鼠的胃電慢波節(jié)律紊亂，促進(jìn)胃平滑肌收縮； 4.模型組胃排空和小腸推進(jìn)率顯著低于正常組和給藥組（P㩳0.01），定經(jīng)湯能促進(jìn)卵巢早衰模型大鼠的胃排空和小腸推進(jìn)率。 5.模型組胃酸含量和胃蛋白酶活力顯著低于正常組和治療組（P㩳0.01），定經(jīng)湯有促進(jìn)胃酸分泌，促進(jìn)胃蛋白酶活性的作用。 6.通過(guò)透射電鏡觀(guān)察，與正常組相比，模型組大鼠胃的ICC總體數(shù)目不多，超微結(jié)構(gòu)較模糊，細(xì)胞器明顯減少，胞質(zhì)溶解，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴(kuò)張、線(xiàn)粒體明顯減少、腫脹等，說(shuō)明卵巢早衰模型大鼠的胃ICC受損。觀(guān)察給藥組后，發(fā)現(xiàn)定經(jīng)湯對(duì)卵巢早衰模型大鼠胃ICC有修復(fù)作用。 【結(jié)論】 1.復(fù)合心理刺激建立的卵巢早衰動(dòng)物模型和臨床卵巢早衰患者的癥狀基本相似，說(shuō)明此方法可行，同時(shí)也表明本實(shí)驗(yàn)造模成功。 2.定經(jīng)湯能促進(jìn)胃竇平滑肌條的收縮作用，其機(jī)制可能經(jīng)由膽堿能的M受體介導(dǎo)，并通過(guò)Ca2+通道發(fā)揮作用。 3.定經(jīng)湯能抑制卵巢早衰模型大鼠的胃電慢波節(jié)律紊亂，增加胃電慢波的頻率和峰峰值。 4.定經(jīng)湯能促進(jìn)大鼠的胃排空率和小腸推進(jìn)率，增強(qiáng)胃腸動(dòng)力。 5.定經(jīng)湯具有促進(jìn)胃酸分泌，增加胃液分泌量，促進(jìn)胃蛋白酶活性的作用。 6.復(fù)合心理刺激建立的卵巢早衰大鼠模型，胃ICC會(huì)受到損傷，而定經(jīng)湯對(duì)卵巢早衰模型大鼠受損的胃ICC有修復(fù)作用。
【關(guān)鍵詞】：定經(jīng)湯 卵巢早衰 胃竇平滑肌 胃電慢波 胃酸 ICC
【學(xué)位授予單位】：廣東藥學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R-332;R285.5
【目錄】：

• 摘要9-13
• 目的9
• 方法9-10
• 結(jié)果10-11
• 結(jié)論11-13
• Abstract13-17
• 前言17-22
• 1. 卵巢早衰簡(jiǎn)介17-18
• 2. 卵巢早衰的治療18-19
• 2.1. 雌孕激素替代治療18
• 2.2. 促排卵治療18
• 2.3. 免疫治療18
• 2.4. 贈(zèng)卵胚胎移植術(shù)18-19
• 2.5. 中醫(yī)治療19
• 3. 卵巢早衰的動(dòng)物模型19-20
• 3.1. 手術(shù)型 POF 模型19
• 3.2. 自身免疫 POF 模型19
• 3.3. 藥物所致 POF 模型19
• 3.4. 心理應(yīng)激 POF 模型19-20
• 3.5. 其它 POF 模型20
• 4. 課題研究依據(jù)20-21
• 4.1. 卵巢早衰和胃腸疾病的關(guān)系20-21
• 4.2. 定經(jīng)湯的臨床作用21
• 5. 課題研究意義21-22
• 第一部分 卵巢早衰動(dòng)物模型的制作及評(píng)價(jià)22-29
• 1. 材料22-23
• 1.1. 動(dòng)物與飼料22
• 1.2. 藥物與試劑22
• 1.3. 實(shí)驗(yàn)儀器22-23
• 2. 方法23-26
• 2.1. 卵巢早衰大鼠模型建立23-24
• 2.1.1. 動(dòng)物分組23
• 2.1.2. 動(dòng)物模型復(fù)制方法23-24
• 2.1.3. 動(dòng)物處死24
• 2.2. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)指標(biāo)觀(guān)察24-26
• 2.2.1. 大鼠外在體征觀(guān)察24
• 2.2.2. 大鼠動(dòng)情期變化觀(guān)察24
• 2.2.3. 促卵泡成熟激素（FSH）和雌二醇（E2）的含量測(cè)定24-25
• 2.2.4. 卵巢塊石蠟包埋和切片制作25
• 2.2.5. 卵巢的形態(tài)學(xué)觀(guān)察25-26
• 2.3. 統(tǒng)計(jì)分析26
• 3. 結(jié)果26-27
• 3.1. 大鼠外在體征變化26
• 3.2. 大鼠動(dòng)情周期變化26
• 3.3. 大鼠血清 E2、FSH 水平的變化26-27
• 3.4. 大鼠卵巢組織形態(tài)學(xué)的變化27
• 4. 討論27-29
• 第二部分 定經(jīng)湯及其拆方對(duì)卵巢早衰大鼠胃竇平滑肌收縮的影響29-37
• 1. 材料29-30
• 1.1. 動(dòng)物與飼料29
• 1.2. 藥物與試劑29-30
• 1.2.1. 中藥材29
• 1.2.2. 試劑29-30
• 1.3. 實(shí)驗(yàn)儀器30
• 2. 方法30-33
• 2.1. 定經(jīng)湯及其拆方組設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案30-32
• 2.1.1. 定經(jīng)湯中藥材的炮制30-31
• 2.1.2. 定經(jīng)湯及其拆方分組設(shè)計(jì)31-32
• 2.2. 動(dòng)物分組和模型復(fù)制32
• 2.3. 胃竇肌條制備32
• 2.4. 給藥方法32
• 2.5. 數(shù)據(jù)處理32
• 2.6. 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法32-33
• 3. 結(jié)果33-35
• 3.1. 正常組和模型組的胃竇平滑肌收縮結(jié)果33
• 3.2. 定經(jīng)湯及其拆方高濃度水平對(duì)胃竇平滑肌收縮的結(jié)果33
• 3.3. 定經(jīng)湯及其拆方中濃度水平對(duì)胃竇平滑肌收縮的結(jié)果33-34
• 3.4. 定經(jīng)湯及其拆方低濃度水平對(duì)胃竇平滑肌收縮的結(jié)果34
• 3.5. 鈣離子和阿托品對(duì)胃竇平滑肌收縮的影響34-35
• 4. 討論35-37
• 第三部分 定經(jīng)湯對(duì)卵巢早衰模型大鼠胃電慢波的影響37-41
• 1. 材料37
• 1.1. 動(dòng)物與飼料37
• 1.2. 藥物與試劑37
• 1.3. 實(shí)驗(yàn)儀器37
• 2. 方法37-38
• 2.1. 動(dòng)物模型復(fù)制37-38
• 2.2. 胃電慢波的記錄38
• 2.3. 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法38
• 3. 結(jié)果38-39
• 3.1. 胃電慢波38-39
• 4. 討論39-41
• 第四部分 定經(jīng)湯對(duì)卵巢早衰大鼠胃排空率和小腸推進(jìn)率的影響41-44
• 1. 材料41
• 1.1. 動(dòng)物與飼料41
• 1.2. 藥物與試劑41
• 1.3. 實(shí)驗(yàn)儀器41
• 2. 方法41-42
• 2.1. 動(dòng)物模型復(fù)制41-42
• 2.2. 胃排空和小腸推進(jìn)率42
• 2.3. 統(tǒng)計(jì)分析42
• 3. 結(jié)果42-43
• 4. 討論43-44
• 第五部分 定經(jīng)湯對(duì)卵巢早衰模型大鼠胃酸和胃蛋白酶活性的影響44-47
• 1. 材料44
• 1.1. 動(dòng)物與飼料44
• 1.2. 藥物與試劑44
• 2. 方法44-46
• 2.1. 動(dòng)物模型復(fù)制44-45
• 2.2. 給藥和手術(shù)方法45
• 2.3. 大鼠胃蛋白酶活性的檢測(cè)45
• 2.4. 大鼠胃酸分泌量的測(cè)定45
• 2.5. 統(tǒng)計(jì)分析45-46
• 3. 結(jié)果46
• 4. 討論46-47
• 第六部分 大鼠胃 ICC 超微結(jié)構(gòu)的觀(guān)察47-51
• 1. 材料47
• 1.1. 動(dòng)物與飼料47
• 1.2. 試劑47
• 1.3. 實(shí)驗(yàn)儀器47
• 2. 電鏡觀(guān)察47-48
• 3. 結(jié)果48-49
• 3.1. 正常大鼠胃 ICC 超微結(jié)構(gòu)觀(guān)察48
• 3.2. 卵巢功能性早衰大鼠胃 ICC 超微結(jié)構(gòu)觀(guān)察48-49
• 3.3. 定經(jīng)湯對(duì)卵巢功能性早衰大鼠胃 ICC 超微結(jié)構(gòu)的影響49
• 4. 討論49-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文56-57
• 英文縮略表57-58
• 致謝58

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：312347