本文關(guān)鍵詞：鏈霉菌NOV-0827次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菍?duì)鏈霉菌（Streptomyces）NOV-0827菌株的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行分離純化，希望從中獲得結(jié)構(gòu)新穎或生物活性多樣的化合物。 Hsp90作為抗癌藥物的分子靶點(diǎn)備受關(guān)注。特別是毒性較小的Hsp90C-端抑制劑是目前藥物篩選的重點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)在一株鏈霉菌NOV-0827產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)了一類(lèi)具有抗腫瘤活性的化合物，TLC結(jié)果提示活性組分含有香豆素類(lèi)化合物，結(jié)合HPLC、HPLC-MSn信息，初步鑒定含有novobiocin（新生霉素）。對(duì)菌株NOV-0827的發(fā)酵工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化，初步設(shè)計(jì)出了該菌株的最佳發(fā)酵條件，并對(duì)其進(jìn)行大量發(fā)酵。采用大孔吸附樹(shù)脂柱層析、硅膠柱層析、反相C18柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱層析、半制備HPLC等分離手段對(duì)菌株NOV-0827的次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行分離純化，共分離到3個(gè)化合物，NOV-0827-A、NOV-0827-B和NOV-0827-C。對(duì)獲得的化合物進(jìn)行紫外、紅外、質(zhì)譜、核磁等方法分析，分別與文獻(xiàn)中報(bào)道的香豆素類(lèi)抗生素新生霉素（novobiocin），大環(huán)內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素GT-32A和GT-32B同質(zhì)。經(jīng)過(guò)MTT法來(lái)檢測(cè)化合物的抗腫瘤活性，結(jié)果顯示化合物NOV-0827-B和NOV-0827-C均對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620具有較強(qiáng)的增殖抑制活性，其IC50值分別為1.107μmol/mL和5.358μmol/mL。 本研究是首次從同一株陸生鏈霉菌NOV-0827產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物中同時(shí)分離到新生霉素（novobiocin）及其他兩個(gè)具有抗腫瘤活性的大環(huán)內(nèi)酰胺類(lèi)化合物，這兩個(gè)大環(huán)內(nèi)酰胺類(lèi)化合物具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性，有可能成為一類(lèi)新的具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖活性的天然化學(xué)治療藥物，具有較強(qiáng)的開(kāi)發(fā)前景。且近期國(guó)內(nèi)外研究表明，新生霉素是Hsp90的C-端抑制劑，具有抗癌作用和調(diào)節(jié)作用，并能與抗癌藥聯(lián)合應(yīng)用，故在抗腫瘤治療方面也具有良好的應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：鏈霉菌 新生霉素 發(fā)酵優(yōu)化 分離純化 結(jié)構(gòu)鑒定 抗腫瘤活性
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R378
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-8
• 縮略詞語(yǔ)8-9
• 前言9-13
• 第一部分 鏈霉菌 NOV-0827 的菌種選育13-19
• 1 實(shí)驗(yàn)材料13-15
• 1.1 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備與儀器13-14
• 1.2 主要試劑與原材料14
• 1.3 實(shí)驗(yàn)菌株14
• 1.4 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件14-15
• 2 實(shí)驗(yàn)方法15-16
• 2.1 菌種的活化及自然選育15
• 2.2 菌株篩選15
• 2.3 篩選菌株穩(wěn)定性試驗(yàn)15
• 2.4 菌絲體生長(zhǎng)形態(tài)觀察15-16
• 2.5 菌種保藏16
• 3 結(jié)果與討論16-18
• 3.1 自然選育結(jié)果16
• 3.2 菌株篩選結(jié)果16-17
• 3.3 篩選菌株穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果17
• 3.4 菌絲體生長(zhǎng)形態(tài)觀察17-18
• 4 小結(jié)18-19
• 第二部分 鏈霉菌 NOV-0827 發(fā)酵條件的優(yōu)化19-31
• 1 實(shí)驗(yàn)材料19-20
• 1.1 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備與儀器19
• 1.2 主要試劑與原材料19-20
• 1.3 實(shí)驗(yàn)菌株20
• 1.4 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件20
• 2 實(shí)驗(yàn)方法20-23
• 2.1 單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)20-21
• 2.2 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)21-22
• 2.3 發(fā)酵過(guò)程的影響因素及其控制22-23
• 3 結(jié)果與討論23-30
• 3.1 單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果23-24
• 3.2 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果24-27
• 3.3 搖瓶的最優(yōu)發(fā)酵條件27-30
• 4 小結(jié)30-31
• 第三部分 鏈霉菌 NOV-0827 次級(jí)代謝產(chǎn)物的提取及分離純化31-39
• 1 實(shí)驗(yàn)材料31-32
• 1.1 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備與儀器31
• 1.2 主要試劑與耗材31-32
• 2 實(shí)驗(yàn)方法32-35
• 2.1 活性組分的薄層色譜分析32
• 2.2 HPLC 分析及制備條件32
• 2.3 中壓反相制備色譜條件32-33
• 2.4 發(fā)酵產(chǎn)物的提取和純化33-35
• 3 結(jié)果與討論35-38
• 3.1 發(fā)酵液 HPLC 分析35-36
• 3.2 中低壓制備色譜檢測(cè)36
• 3.3 HPLC 制備后單體的分析檢測(cè)36-37
• 3.4 TLC 分析37-38
• 4 小結(jié)38-39
• 第四部分 化合物的結(jié)構(gòu)鑒定39-47
• 1 實(shí)驗(yàn)儀器及材料39
• 2 實(shí)驗(yàn)方法39-40
• 2.1 紫外光譜分析39
• 2.2 紅外光譜分析39-40
• 2.3 質(zhì)譜分析40
• 2.4 NMR 分析40
• 3 結(jié)果與討論40-46
• 3.1 化合物 NOV-0827-A 的結(jié)構(gòu)鑒定40-42
• 3.2 化合物 NOV-0827-B 的結(jié)構(gòu)鑒定42-44
• 3.3 化合物 NOV-0827-C 的結(jié)構(gòu)鑒定44-46
• 4 小結(jié)46-47
• 第五部分 化合物抗腫瘤活性的鑒定47-50
• 1 實(shí)驗(yàn)儀器及材料47
• 2 實(shí)驗(yàn)原理及方法47-48
• 2.1 四氮唑鹽（microculture tetrozolium,MTT）還原法原理47
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法47-48
• 3 結(jié)果與討論48-49
• 4 小結(jié)49-50
• 結(jié)語(yǔ)50-52
• 致謝52-53
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 附圖56-63
• 綜述63-95
• 參考文獻(xiàn)91-95

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 吳麗賢;許建華;;以熱休克蛋白90為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥研究進(jìn)展[J];海峽藥學(xué);2005年06期

2 孟帥;山廣志;李卓榮;;Hsp90抑制劑的研究進(jìn)展[J];中國(guó)抗生素雜志;2011年04期

3 陸云飛;新生霉素的抗癌作用以及對(duì)鬼臼乙叉甙的調(diào)節(jié)作用[J];腫瘤防治研究;1995年06期

4 姚靜;山廣志;李卓榮;;熱休克蛋白90抑制劑的研究進(jìn)展[J];中國(guó)新藥雜志;2006年20期

5 吳麗賢;許建華;張昆仲;溫彩霞;黃秀旺;;新生霉素抑制K562細(xì)胞增殖與阻斷Hsp90伴侶功能的關(guān)系[J];腫瘤防治研究;2007年11期

  本文關(guān)鍵詞：鏈霉菌NOV-0827次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：308334