本文關(guān)鍵詞：骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞移植治療糖尿病模型大鼠周圍神經(jīng)病變的經(jīng)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景： 糖尿病是由多種病因引起的一種內(nèi)分泌代謝紊亂性疾病，其并發(fā)癥對(duì)人體造成的危害很大。糖尿病神經(jīng)病變，尤其是糖尿病周圍神經(jīng)病變（diabetic peripheral neuropathy，DPN），是最常見的糖尿病并發(fā)癥之一。在DPN的諸多因素中，氧化應(yīng)激和血管受損起著至關(guān)重要的作用。諸多研究表明，改善氧化應(yīng)激狀態(tài)和修復(fù)受損的血管有利于神經(jīng)病變的恢復(fù)。內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelial progenitor cells，EPCs）作為一種干細(xì)胞，具有分化成血管內(nèi)皮細(xì)胞且參與新血管形成的功能。研究表明，EPCs數(shù)量的減少和功能受損與血管功能受損密切相關(guān)。應(yīng)用EPCs移植能有效修復(fù)受損血管、治療缺血性疾病。EPCs移植對(duì)糖尿病神經(jīng)病變是否有效，是否改善氧化應(yīng)激且有益于神經(jīng)修復(fù)尚缺乏足夠研究。目前，該領(lǐng)域研究是國內(nèi)外學(xué)者關(guān)注的熱點(diǎn)問題。目的： 采用大鼠骨髓EPCs移植治療糖尿病模型大鼠坐骨神經(jīng)病變，移植前后測(cè)定坐骨神經(jīng)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度（motor nerve conduction velocity，MNCV）、觀察坐骨神經(jīng)病理學(xué)變化并檢測(cè)核轉(zhuǎn)錄因子κB（nuclear transcription factor-kappa B，NF-κB）及髓鞘堿性蛋白（myelin basic protein，MBP）的表達(dá)，評(píng)價(jià)EPCs移植治療DPN的療效并探討其機(jī)制。方法：1大鼠骨髓EPCs的分離、培養(yǎng)及鑒定1.1大鼠骨髓EPCs的分離與培養(yǎng) 用密度梯度離心法從大鼠骨髓中分離單個(gè)核細(xì)胞，用培養(yǎng)基將細(xì)胞重懸后接種于用人纖維連接蛋白包被的培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。1.2大鼠骨髓EPCs的鑒定 用雙熒光染色法和matrigel凝膠成血管實(shí)驗(yàn)鑒定EPCs。2DPN模型大鼠的制備 雄性SD大鼠，體重220-240g，適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后禁食12小時(shí)，次日用1%鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）一次性大量腹腔注射制備糖尿病模型大鼠，72小時(shí)后針刺尾尖取血測(cè)空腹血糖，血糖值≥16.7mmol/L為糖尿病造模成功的標(biāo)準(zhǔn)。在用STZ造糖尿病模型前我們測(cè)定10只血糖正常大鼠的坐骨神經(jīng)MNCV，糖尿病大鼠分別在4、8、12周時(shí)取10只測(cè)定其坐骨神經(jīng)MNCV。與血糖正常大鼠相比，當(dāng)糖尿病大鼠的坐骨神經(jīng)MNCV減慢，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義時(shí)，我們認(rèn)為DPN模型大鼠造模成功。3實(shí)驗(yàn)分組 NC組：血糖正常大鼠（10只） A組：DPN模型大鼠（10只） B組：DPN模型大鼠+生理鹽水（10只） C組：DPN模型大鼠+EPCs（10只）4移植體外培養(yǎng)的EPCs C組大鼠成糖尿病模型12周時(shí)，收集從正常大鼠骨髓中提取并培養(yǎng)至第7天的EPCs，用生理鹽水溶解后沿坐骨神經(jīng)肌肉注射1ml（含1×106個(gè)細(xì)胞）；B組大鼠成糖尿病模型12周時(shí)沿坐骨神經(jīng)注射等量生理鹽水。5坐骨神經(jīng)MNCV的測(cè)定 NC組和A組在糖尿病12周時(shí)，B組和C組在移植治療4周時(shí)測(cè)定MNCV。方法：用10%水合氯醛（3ml/kg）麻醉大鼠后，暴露其坐骨神經(jīng)，用NTS-2000肌電圖與誘發(fā)電位儀測(cè)定坐骨神經(jīng)MNCV。6坐骨神經(jīng)病理學(xué)標(biāo)本的制備 NC組和A組在糖尿病12周時(shí)，B組和C組在移植治療4周時(shí)制備病理學(xué)標(biāo)本。方法：制備HE染色標(biāo)本和電鏡標(biāo)本，在光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡下觀察坐骨神經(jīng)的病理學(xué)改變。7坐骨神經(jīng)中NF-κB和MBP的測(cè)量 NC組和A組在糖尿病12周時(shí)，B組和C組在移植治療4周時(shí)檢測(cè)NF-κB和MBP的表達(dá)。方法：用免疫組織化學(xué)法在光學(xué)顯微鏡下觀察大鼠坐骨神經(jīng)中NF-κB和MBP的表達(dá)。結(jié)果： 1用密度梯度離心法在體外成功分離培養(yǎng)獲得大量EPCs。 2糖尿病12周時(shí)大鼠的坐骨神經(jīng)MNCV較血糖正常大鼠明顯減慢，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。 3坐骨神經(jīng)MNCV與NC組相比，A組和B組的MNCV明顯減慢，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）；C組的MNCV與NC組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。 4HE染色結(jié)果A組：神經(jīng)纖維數(shù)量減少，髓鞘薄厚不均并出現(xiàn)空泡變性，軸索變細(xì)；B組：神經(jīng)纖維數(shù)量進(jìn)一步減少，髓鞘薄厚嚴(yán)重不均并出現(xiàn)嚴(yán)重空泡變性，軸索變細(xì)甚至消失；C組：髓鞘薄厚不均、空泡變性及軸索變性均較B組減輕，但較A組嚴(yán)重。 5電鏡結(jié)果A組:髓鞘薄厚不均，部分板層分離，呈彎曲扭轉(zhuǎn)狀態(tài)，部分增生到軸索內(nèi)，軸索變細(xì)；雪旺細(xì)胞細(xì)胞器變性，染色質(zhì)凝集，核膜不完整。B組:髓鞘薄厚嚴(yán)重不均，板層消失范圍更大，高度彎曲扭轉(zhuǎn)，軸索變細(xì)甚至閉鎖；雪旺細(xì)胞細(xì)胞器進(jìn)一步變性甚至消失，染色質(zhì)凝集甚至核固縮，核膜不完整；C組:髓鞘薄厚不均情況較輕，板層結(jié)構(gòu)大部分存在；雪旺細(xì)胞細(xì)胞器基本正常，核膜完整，染色質(zhì)呈凝集狀態(tài)。 6NF-κB表達(dá)情況與NC組相比，A組坐骨神經(jīng)中NF-κB表達(dá)增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；C組NF-κB表達(dá)量較A組減少（P＜0.05），但仍高于NC組（PPA＜0.01，PIOD＜0.05）。 7MBP表達(dá)情況與NC組相比，A組坐骨神經(jīng)中MBP表達(dá)減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）；C組MBP表達(dá)量與A組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），但較B組增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論： 1糖尿病模型大鼠成模12周后能成功構(gòu)建DPN模型大鼠； 2EPCs移植能改善DPN模型大鼠的坐骨神經(jīng)MNCV、脫髓鞘及軸索萎縮等病理學(xué)改變； 3EPCs移植能抑制NF-κB、增加MBP的表達(dá)，這可能有利于神經(jīng)損傷的修復(fù)。
【關(guān)鍵詞】：內(nèi)皮祖細(xì)胞 糖尿病模型大鼠 周圍神經(jīng)病變
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R587.2;R-332
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-13
• 英文縮略詞表13-14
• 1 引言14-16
• 2 材料和方法16-22
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料16-18
• 2.1.1 主要儀器與設(shè)備16
• 2.1.2 主要試劑16-17
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物17
• 2.1.4 檸檬酸緩沖液的配制17
• 2.1.5 磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline,PBS）的配制17-18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法18-21
• 2.2.1 大鼠骨髓 EPCs 的分離與培養(yǎng)18
• 2.2.2 大鼠骨髓 EPCs 的鑒定18-19
• 2.2.3 DPN 模型大鼠的制備19
• 2.2.4 實(shí)驗(yàn)分組19
• 2.2.5 移植體外培養(yǎng)的 EPCs19
• 2.2.6 坐骨神經(jīng) MNCV 的測(cè)定19-20
• 2.2.7 坐骨神經(jīng)病理學(xué)標(biāo)本的制備20-21
• 2.2.8 免疫組織化學(xué)法測(cè)量坐骨神經(jīng)中 NF-κB 的表達(dá)21
• 2.2.9 免疫組織化學(xué)法測(cè)量坐骨神經(jīng)中 MBP 的表達(dá)21
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析21-22
• 3 結(jié)果22-30
• 3.1 大鼠骨髓 EPCS 的分離與培養(yǎng)22
• 3.2 大鼠骨髓 EPCS 的鑒定22-23
• 3.2.1 雙熒光染色法鑒定 EPCs22-23
• 3.2.2 matrigel 凝膠成血管實(shí)驗(yàn)鑒定 EPCs23
• 3.3 DPN 模型大鼠23-24
• 3.4 各組大鼠的一般情況24
• 3.5 坐骨神經(jīng) MNCV24
• 3.6 坐骨神經(jīng)的病理學(xué)改變24-26
• 3.6.1 光學(xué)顯微鏡下觀察大鼠坐骨神經(jīng)的病理學(xué)改變24-25
• 3.6.2 透射電子顯微鏡下觀察大鼠坐骨神經(jīng)的超微結(jié)構(gòu)改變25-26
• 3.7 各組大鼠坐骨神經(jīng)中 NF-ΚB 的表達(dá)情況26-27
• 3.8 各組大鼠坐骨神經(jīng)中 MBP 的表達(dá)情況27-30
• 4 討論30-34
• 5 結(jié)論34-36
• 參考文獻(xiàn)36-38
• 文獻(xiàn)綜述38-56
• 參考文獻(xiàn)50-56
• 致謝56-57

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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  本文關(guān)鍵詞：骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞移植治療糖尿病模型大鼠周圍神經(jīng)病變的經(jīng)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：307840