本文關鍵詞：抗菌肽attacin在家蠅胚胎細胞的表達及生物學活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：以家蠅抗菌肽attacin為目標基因，用自行建立的家蠅胚胎細胞系（MDEC-07114）及含有桿狀病毒穿梭載體的Bacmid構(gòu)建家蠅胚胎細胞真核表達系統(tǒng)，對表達產(chǎn)物抗菌肽attacin進行抗菌、熱穩(wěn)定性等生物學活性研究。 方法：1、全基因合成家蠅抗菌肽attacin，，將目的基因attacin克隆入PUC57質(zhì)粒，重組質(zhì)粒經(jīng)雙酶切后連接到pFastBacTMHTA供體質(zhì)粒，制備重組桿狀病毒BacmidDNA；2、重組桿狀病毒Bacmid DNA轉(zhuǎn)染家蠅胚胎細胞MDEC-07114，提取培養(yǎng)上清和細胞裂解物粗蛋白，SDS-PAGE檢測目的蛋白，鎳柱純化粗蛋白；3、SDS-PAGE和Western-Blot檢測、鑒定蛋白表達情況；4、表達產(chǎn)物生物學活性檢測：對革蘭氏陰性菌（大腸桿菌）和革蘭氏陽性菌（金黃葡萄球菌、枯草芽孢桿菌）的抑制作用；經(jīng)60-100℃水浴1-30min的熱穩(wěn)定性；經(jīng)pH5.0-10.0的酸堿作用后的耐受性。結(jié)果：1、成功構(gòu)建含家蠅抗菌肽attacin基因的桿狀病毒表達載體（Bacmid-pFastBacTM-attacin）；2、重組桿狀病毒Bacmid DNA成功轉(zhuǎn)染家蠅胚胎細胞，細胞出現(xiàn)直徑變大、停止生長、分離等現(xiàn)象；3、經(jīng)SDS-PAGE檢測培養(yǎng)上清和細胞裂解物粗蛋白均含有分子量為24KD的目的蛋白；4、鎳柱純化粗蛋白后經(jīng)SDS-PAGE和Western-Blot檢測證實含目的蛋白；5、生物學活性檢測：表達產(chǎn)物抗菌肽attacin可抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌活性；經(jīng)60-100℃水浴1-30min及pH5.0-10.0酸堿作用后抗菌肽對大腸桿菌的抑菌活性影響不明顯。 結(jié)論：家蠅胚胎細胞MDEC-07114可用于桿狀病毒-真核表達系統(tǒng)表達抗菌肽attacin；表達產(chǎn)物抗菌肽attacin具有生物學活性。
【關鍵詞】：抗菌肽 attacin 家蠅胚胎細胞 表達 生物學活性
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：Q78;R384.2
【目錄】：

• 英漢縮略詞對照表4-5
• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 前言8-10
• 材料與方法10-23
• 結(jié)果23-35
• 討論35-39
• 結(jié)論39
• 參考文獻39-42
• 綜述：家蠅抗菌肽及其基因工程研究進展42-52
• 參考文獻49-52
• 致謝52-53
• 作者簡介53-54

【參考文獻】

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  本文關鍵詞：抗菌肽attacin在家蠅胚胎細胞的表達及生物學活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：307616