本文關(guān)鍵詞：WIP1在端粒功能障礙引起的干細(xì)胞衰老及骨髓衰竭中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：WIP1(Wild-type p53-induced phosphatase)是一癌基因,在眾多癌癥細(xì)胞中高表達(dá),同時(shí)是p53負(fù)反饋調(diào)節(jié)環(huán)路的重要組成成分,參與調(diào)控細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)平衡。已有的研究發(fā)現(xiàn),p53及其上下游基因在端粒依賴的衰老進(jìn)程中起重要作用。然而,對(duì)于WIP1基因在端粒功能障礙而引起的衰老過程中的調(diào)節(jié)作用還不清楚。我們通過雜交,建立WIP1和Terc雙基因敲除小鼠品系。進(jìn)一步互交,建立WIP1基因缺失的G3Terc-/-(第三代端粒酶缺失)小鼠。在此基礎(chǔ)上,利用外周骨髓分析、體內(nèi)造血重建實(shí)驗(yàn)以及競(jìng)爭(zhēng)性骨髓移植實(shí)驗(yàn)等手段,對(duì)WIP1和Terc雙基因敲除小鼠的成年鼠及衰老小鼠的HSC的功能研究。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示W(wǎng)IP1敲除能夠延長(zhǎng)端粒酶缺失G3小鼠的壽命。WIP1缺失沒有改善G3小鼠骨髓中M細(xì)胞(CD11b+),B細(xì)胞(B220+),CD4+T,CD8+T的比例。在干細(xì)胞水平,WIP1缺失的G3小鼠中最純的干細(xì)胞(SLAM)數(shù)目較G3小鼠明顯增加,而長(zhǎng)期造血干細(xì)胞(LT),短期造血干細(xì)胞(ST)的數(shù)目沒有改變。在祖細(xì)胞水平,共同髓系祖細(xì)胞(CMP),粒細(xì)胞髓系祖細(xì)胞(GMP),巨核細(xì)胞紅系祖細(xì)胞(MEP)以及共同淋系祖細(xì)胞(CLP)的數(shù)目沒有變化。骨髓競(jìng)爭(zhēng)性移植實(shí)驗(yàn)和干細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性移植實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,供體為G3W1P1-/-來(lái)源的小鼠骨髓長(zhǎng)期造血干細(xì)胞造血重建能力低于G3小鼠。提示W(wǎng)IP1缺失沒有改善G3小鼠的造血重建能力。在對(duì)脾臟的中M細(xì)胞(CD11b+),B細(xì)胞(B220+),CD4+T,CD8+T的分析結(jié)果顯示,WIP1缺失沒有改善G3小鼠的脾臟中髓系浸潤(rùn)現(xiàn)象。其他組織器官的稱重結(jié)果顯示,與G3小鼠相比,G3WIP-/-小鼠脾臟,大腦,肝臟的重量沒有變化,腎臟,心臟,雄性小鼠的睪丸重量有明顯的增加。結(jié)果提示,WIP1缺失延長(zhǎng)端粒功能障礙小鼠的壽命,但是沒有改善造血系統(tǒng)的衰老。
【關(guān)鍵詞】：WIP1 端粒酶缺失小鼠 骨髓造血干細(xì)胞 競(jìng)爭(zhēng)性骨髓移植
【學(xué)位授予單位】：杭州師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 致謝5-6
• 摘要6-7
• Abstract7-8
• 1. 引言8-12
• 2. 材料與方法12-24
• 2.1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、試劑及相關(guān)儀器12-15
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物12
• 2.1.2 試劑12-14
• 2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器14-15
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法15-24
• 2.2.1 G3WIP1雙基因敲除小鼠的建立及PCR方法鑒定小鼠基因型15-17
• 2.2.2 骨髓細(xì)胞,脾臟細(xì)胞的分離17-19
• 2.2.3 流式細(xì)胞儀分析骨髓淋系及髓系細(xì)胞19
• 2.2.4 流式細(xì)胞儀分析骨髓長(zhǎng)期造血干/祖細(xì)胞比例19-20
• 2.2.5 磁珠法富集.造血干細(xì)胞及進(jìn)一步染色分析/分選20-21
• 2.2.6 骨髓造血干細(xì)胞自我更新及重建造血實(shí)驗(yàn)21-23
• 2.2.7 流式細(xì)胞儀分析外周血中各系細(xì)胞數(shù)量和比例23-24
• 2.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析24
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-37
• 3.1 PCR鑒定G3WIP1小鼠基因型24-25
• 3.2 WIP1敲除能夠延長(zhǎng)端粒酶缺失小鼠的壽命25-27
• 3.3 WIP1敲除沒有改善G3骨髓中的BMT比例27-28
• 3.4 WIP1缺失的G3小鼠中骨髓干/祖細(xì)胞的數(shù)目分析28-31
• 3.5 競(jìng)爭(zhēng)性移植實(shí)驗(yàn)檢測(cè)WIP1敲除后G3 HSC(造血干細(xì)胞)自我更新和造血重建能力31-32
• 3.6 長(zhǎng)期造血干細(xì)胞移植實(shí)驗(yàn)檢測(cè)WIP1敲除G3小鼠HSC自我更新和造血重建能力32-34
• 3.7 WIP1敲除沒有改善脾臟中髓系細(xì)胞入侵34-35
• 3.8 組織器官稱重35-37
• 4. 討論37-39
• 5. 結(jié)論39-41
• 6. 參考文獻(xiàn)41-43
• 附錄43

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李夏新;端粒、端粒酶與造血細(xì)胞[J];廣東醫(yī)學(xué);1998年12期

2 張如剛,袁金輝,謝弘;端粒酶與腫瘤[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;2000年01期

3 黃禮年,王安潮;端粒、端粒酶與腫瘤關(guān)系研究進(jìn)展[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年01期

4 張可瑩,李慶章;端粒、端粒相關(guān)蛋白及其與細(xì)胞衰老關(guān)系的研究進(jìn)展[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2004年05期

5 萬(wàn)德芬;端粒[J];世界科學(xué);1996年09期

6 劉春明;端粒與端粒酶的研究進(jìn)展[J];松遼學(xué)刊(自然科學(xué)版);2001年02期

7 王國(guó)超,方正,王紅庚,牛君仿;端粒酶與端粒的研究進(jìn)展[J];河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2002年S1期

8 蔣培余;端粒、端粒酶與腫瘤[J];生物學(xué)教學(xué);2002年07期

9 任亞紅;端粒及端粒酶的研究[J];安徽教育學(xué)院學(xué)報(bào);2004年06期

10 彭江紅;端粒、端粒酶與細(xì)胞衰老[J];安徽師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1998年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 宋桂芹;吳衛(wèi)平;宋春杰;尹嶺;朱克;;實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠模型的基因芯片研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

2 曹華;鄭捷;;UVA1照射硬皮病小鼠模型的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

3 陸樹良;金曙雯;金再敏;史濟(jì)湘;丁長(zhǎng)囡;;燙傷小鼠模型制作中脫毛劑對(duì)皮膚組織損害的病理學(xué)觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六屆全國(guó)燒傷外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

4 陳欣;龔秀麗;曾凡一;黃淑幀;;遺傳病宮內(nèi)治療的研究-應(yīng)用改良的干細(xì)胞宮內(nèi)移植方法建立高嵌合率小鼠模型[A];中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)第八次代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編（2004-2008）[C];2008年

5 文峻;劉魯偉;范云;屈學(xué)民;龍開平;王斯剛;;一種心肌細(xì)胞替換實(shí)驗(yàn)技術(shù)的研究[A];全國(guó)第九屆心臟學(xué)會(huì)第十二屆心功能學(xué)會(huì)《心臟雜志》編委會(huì)聯(lián)合學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2005年

6 羅萍;盧雪紅;吳曼;劉樹軍;尚秀蘭;;來(lái)氟米特對(duì)狼瘡腎炎小鼠的治療作用及機(jī)制探討[A];全國(guó)第八屆中西醫(yī)結(jié)合風(fēng)濕病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

7 杜家忠;李松濱;李寶龍;高維濱;;針刺對(duì)乳腺增生癥小鼠模型抑制作用的病理形態(tài)定量研究[A];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)第五屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2000年

8 白麗;張宇紅;潘靜;王剛;丁健青;陳生弟;;紅景天甙對(duì)帕金森病小鼠模型的治療作用及其機(jī)制研究[A];第十一屆全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

9 鞠梅;張青松;張小華;陳昆;常寶珠;顧恒;;不同劑量的UVA1輻射硬皮病鼠模型的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第14次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

10 李文娟;范小芳;陳兆琴;胡良岡;陳然;鄧蔚;龔永生;;間斷低氧模擬睡眠呼吸暫停綜合征小鼠模型的建立[A];中國(guó)睡眠研究會(huì)第六屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2010年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉霞;美制造出感染丙肝病毒的小鼠模型[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

2 孔琪　張連峰;小動(dòng)物 大作為[N];健康報(bào);2010年

3 記者 仇逸;紅斑狼瘡小鼠模型探病因[N];新華每日電訊;2003年

4 王迪;胰腺癌小鼠模型面世[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

5 張?zhí)锟?細(xì)胞調(diào)亡的意義[N];中國(guó)人口報(bào);2002年

6 張?zhí)锟?2009年諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)：揭示衰老和癌癥的秘密[N];大眾科技報(bào);2009年

7 張孔生;劉院士為你解讀“端�！盵N];揚(yáng)州日?qǐng)?bào);2009年

8 記者 熊琳;端粒和端粒酶:解開人類衰老及癌癥之謎[N];新華每日電訊;2009年

9 袁s

本文編號(hào)：307289