本文關(guān)鍵詞：CD38對巨噬細胞TLR2基因表達及功能的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的：炎癥是機體組織對損傷因子的一種防御性反應。炎癥反應參與了肥胖、動脈粥樣硬化等多種代謝性疾病和心血管疾病的病理進程，TLR家族基因在炎癥的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用，巨噬細胞及中性粒炎性細胞的浸潤，伴隨著大量炎性因子的分泌，從而促使泡沫細胞生成等過程與之密切相關(guān)。CD38具有雙功能酶活性，即ADPR (ADP-ribosyl)環(huán)化酶和水解酶活性。它可以將NAD+催生成cADPR，同時可以將cADPR降解成ADPR，其發(fā)揮酶活性區(qū)域為胞外結(jié)構(gòu)域。我們的前期結(jié)果顯示，CD38基因缺失可明顯增強小鼠巨噬細胞中TLR4的表達，同時顯著抑制TLR2的表達。本文旨在探討小鼠巨噬細胞中CD38對TLR2表達以及巨噬細胞功能的影響及其可能的分子機制，從而為進一步闡明CD38在炎癥反應中的作用及其機制提供實驗依據(jù)。 方法：1.原代細胞的培養(yǎng)及鑒定：小鼠腹腔注射3ml4%硫膠質(zhì)促使巨噬細胞聚集，5天后收獲細胞并于孵箱體外培養(yǎng)2天，確認基因型；2.檢測巨噬細胞TLR2的表達；3. TLR2啟動子區(qū)核心序列的構(gòu)建及確定：設(shè)計TLR2上游區(qū)5kb至1kb的啟動子區(qū)引物，將不同長度的片段分別構(gòu)建入pGL3載體中，轉(zhuǎn)染進細胞，進行雙熒光素酶活性測定;4.生物信息學分析：用公認的信息數(shù)據(jù)庫MotifMap及UCGU進行TLR2上游轉(zhuǎn)錄因子的預測和分析；5.核心區(qū)驗證：使用等長度片段擴增，進行核心區(qū)突變與刪除，進行雙熒光素酶活性測定。6.熒光定量RT-PCR技術(shù)分析CD38敲除后TLR2對炎癥因子的影響。 結(jié)果：1.原代分離并培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細胞，鏡下觀察其形態(tài)、大小及聚散性與報道相符，確認為巨噬細胞。2. CD38基因敲除的小鼠巨噬細胞中TLR2表達下降。3.信息數(shù)據(jù)庫MotifMap顯示TLR2啟動子的核心序列為GGGANNNTCC。4.生物信息學預測CD38調(diào)控TLR2的可能的轉(zhuǎn)錄因子為NF-κB。5.實驗驗證TLR2的上游轉(zhuǎn)錄因子確為NF-κB。6. TLR2基因抑制后，，下游炎癥因子Arg1和IL-10表達顯著升高； TNF-α和IL-1β表達受到抑制。 結(jié)論：CD38基因缺失可顯著抑制TLR2介導的抗炎性反應，其機制可能與CD38基因缺失抑制NF-κB信號通路，從而阻遏TLR2基因的表達，進而影響下游炎癥反應有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：CD38 TLR2 炎癥反應 轉(zhuǎn)錄因子 巨噬細胞
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R363
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 中英文縮略詞表10-11
• 第1章 緒論11-16
• 1.1 巨噬細胞與炎癥反應11-14
• 1.1.1 炎癥反應的病理特征及臨床意義11
• 1.1.2 巨噬細胞在炎癥反應中的作用11-13
• 1.1.3 巨噬細胞參與炎癥反應的機制13-14
• 1.2 CD38 在炎癥反應中的作用14
• 1.3 本研究目的及意義14-16
• 第2章 CD38 基因敲除對小鼠巨噬細胞 TLR2 表達的影響16-24
• 2.1 引言16
• 2.2 材料和方法16-20
• 2.2.1 實驗動物16
• 2.2.2 CD38 基因敲除小鼠的制備和鑒定16-17
• 2.2.3 巨噬細胞的原代培養(yǎng)及基因型鑒定17-19
• 2.2.4 CD38 基因敲除小鼠中 TLR2 表達水平的測定19-20
• 2.3 結(jié)果20-22
• 2.3.1 CD38 基因敲除小鼠基因型鑒定20
• 2.3.2 巨噬細胞原代培養(yǎng)及基因型鑒定20-21
• 2.3.3 CD38 敲除小鼠巨噬細胞中 TLR2 mRNA 水平表達下降21-22
• 2.4 討論22-24
• 第3章 巨噬細胞 TLR2 基因表達的可能調(diào)控機制24-39
• 3.1 引言24
• 3.2 材料和方法24-28
• 3.2.1 TLR2 轉(zhuǎn)錄調(diào)控生物信息學預測24
• 3.2.2 TLR2 啟動子不同長度片段及質(zhì)粒的構(gòu)建24-27
• 3.2.3 TLR2 啟動子雙熒光素酶活性的測定27-28
• 3.3 實驗結(jié)果28-37
• 3.3.1 TLR2 啟動子雙熒光素酶報告載體的構(gòu)建28-31
• 3.3.2 TLR2 啟動子區(qū)核心序列的確定31-34
• 3.3.3 TLR2 轉(zhuǎn)錄調(diào)控生物信息學預測結(jié)果34-36
• 3.3.4 TLR2 啟動子區(qū)核心序列的驗證36-37
• 3.4 討論37-39
• 第4章 CD38 缺失對巨噬細胞 TLR2 介導的信號通路的影響及其調(diào)控機制39-45
• 4.1 引言39
• 4.2 材料和方法39-40
• 4.2.1 巨噬細胞原代培養(yǎng)及基因型鑒定39
• 4.2.2 TLR2 對炎癥因子的影響39-40
• 4.3 實驗結(jié)果40-42
• 4.4 討論42-45
• 第5章 結(jié)論45-46
• 致謝46-47
• 參考文獻47-51
• 附錄51-53
• 綜述53-63
• 參考文獻59-63

【引證文獻】

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 方莉娜;烏司他丁對免疫抑制狀態(tài)下重癥肺部感染小鼠巨噬細胞分化的影響[D];桂林醫(yī)學院;2015年

  本文關(guān)鍵詞：CD38對巨噬細胞TLR2基因表達及功能的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：307254