本文關(guān)鍵詞：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白3參與自噬并影響膽固醇流出機(jī)制初探，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：本研究以肝癌細(xì)胞HepG2為研究對(duì)象,探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白3(Reticulon3, RTN3)與自噬的關(guān)系,并對(duì)RTN3參與細(xì)胞脂質(zhì)代謝與膽固醇流出及其可能的機(jī)制做初步的探討。 方法：(1)通過(guò)營(yíng)養(yǎng)剝奪誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生自噬,WB檢測(cè)RTN3和自噬蛋白微管相關(guān)蛋白1輕鏈3B (microtubule-associated protein1light chain3B, LC3B)的蛋白水平,并調(diào)節(jié)RTN3表達(dá)水平檢測(cè)Beclinl與LC3B的含量,激光共聚焦檢測(cè)RTN3是否參與自噬泡形成。(2)免疫共沉淀檢測(cè)RTN3是否與Bcl-2和Beclinl有相互作用,激光共聚焦檢測(cè)它們是否有共定位。(3)不同濃度HDL和他汀刺激取樣WB檢測(cè)RTN3與LC3B表達(dá)變化,探討RTN3是否參與調(diào)控相關(guān)脂質(zhì)的代謝過(guò)程。(4)調(diào)節(jié)RTN3表達(dá)用油紅O染色檢測(cè)胞內(nèi)脂質(zhì)變化,并用膽固醇流出檢測(cè)RTN3對(duì)膽固醇流出的影響。(5)調(diào)節(jié)RTN3表達(dá)并用WB檢測(cè)RTN3與ABCA1表達(dá)變化,在HDL和他汀刺激下檢測(cè)RTN3與ABCA1是否有共定位,初步探討RTN3參與膽固醇流出機(jī)制。 結(jié)果：(1)營(yíng)養(yǎng)剝奪誘導(dǎo)細(xì)胞自噬時(shí),RTN3和LC3B均表達(dá)上調(diào),上調(diào)RTN3表達(dá)則使LC3B明顯增高;激光共聚焦實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)LC3B和RTN3存在共定位。(2)免疫共沉淀和激光共聚焦結(jié)果表明RTN3與Beclinl存在相互作用。(3)隨著HDL濃度增加,RTN3和LC3B均表達(dá)下調(diào),他汀濃度增加時(shí),RTN3和LC3B均表達(dá)上調(diào)。(4)油紅O染色發(fā)現(xiàn)在RTN3高表達(dá)的細(xì)胞中脂滴數(shù)量下降,而RTN3低表達(dá)時(shí)脂滴在細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)累積。當(dāng)無(wú)HDL處理且RTN3高表達(dá)時(shí)膽固醇流出率高于RTN3低表達(dá)和正常組,在高濃度HDL誘導(dǎo)膽固醇流出時(shí),RTN3高表達(dá)和低表達(dá)均抑制膽固醇流出。(5)在RTN3高表達(dá)和低表達(dá)時(shí),ABCA1蛋白表達(dá)下降,并檢測(cè)到ABCA1與RTN3共定位于胞內(nèi)囊泡中。 結(jié)論：(1)RTN3與Beclinl相互作用影響HepG2細(xì)胞的自噬水平；(2)RTN3可通過(guò)調(diào)節(jié)自噬參與的脂質(zhì)代謝；(3)RNT3影響細(xì)胞內(nèi)脂滴數(shù)量和膽固醇流出。
【關(guān)鍵詞】：RTN3 自噬 膽固醇流出
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R36
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文縮寫注釋11-12
• 1. 緒論12-20
• 1.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白312-15
• 1.2 自噬15-20
• 1.2.1 自噬的分子機(jī)制16-17
• 1.2.2 自噬與脂質(zhì)代謝17-20
• 2. RTN3參與細(xì)胞自噬20-44
• 2.1 材料20-24
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑及耗材20-23
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備23-24
• 2.1.3 軟件24
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法24-31
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)分組24
• 2.2.2 細(xì)胞總蛋白提取24
• 2.2.3 細(xì)胞總蛋白定量24-25
• 2.2.4 Western Blot分析25-27
• 2.2.5 SDS堿裂解法制備質(zhì)粒DNA27-28
• 2.2.6 RTN3表達(dá)調(diào)節(jié)28-29
• 2.2.7 細(xì)胞免疫熒光29
• 2.2.8 免疫共沉淀分析29
• 2.2.9 膽固醇流出實(shí)驗(yàn)29-30
• 2.2.10 油紅O染色30
• 2.2.11 數(shù)據(jù)分析30-31
• 2.3 結(jié)果31-39
• 2.3.1 RTN3參與HepG2白噬31-34
• 2.3.2 調(diào)節(jié)RTN3表達(dá)對(duì)自噬的影響34-35
• 2.3.3 RTN3與LC3B的共定位35-36
• 2.3.4 RTN3與Bcl-2,Beclinl的相互作用36-37
• 2.3.5 RTN3與Beclinl的共定位37-39
• 2.4 討論39-42
• 2.5 結(jié)論42-44
• 2.5.1 RTN3表達(dá)上調(diào)可促進(jìn)自噬發(fā)生42-43
• 2.5.2 RTN3可能通過(guò)Beclinl影響自噬的發(fā)生43-44
• 3. RTN3對(duì)細(xì)胞膽固醇流出的影響44-58
• 3.1 材料44
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法44
• 3.3 結(jié)果44-53
• 3.3.1 調(diào)節(jié)RTN3的表達(dá)引起細(xì)胞內(nèi)脂滴數(shù)量的變化44-46
• 3.3.2 RTN3影響細(xì)胞膽固醇平衡46-48
• 3.3.3 RTN3影響膽固醇流出的可能機(jī)制48-53
• 3.4 討論53-57
• 3.5 結(jié)論57-58
• 3.5.1 RTN3可通過(guò)調(diào)節(jié)自噬參與脂質(zhì)代謝57
• 3.5.2 RTN3可下調(diào)ABCA1影響脂質(zhì)代謝57-58
• 4. 總結(jié)58-60
• 參考文獻(xiàn)60-66
• 攻讀學(xué)位期間主要的研究成果66-67
• 致謝67

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 李其嵐,劉鑫,項(xiàng)榮,屈小玲,齊義鵬;HAP的凋亡誘發(fā)功能對(duì)其內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位的依賴性[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2004年04期

2 張圣雪;邱齡;肖傳實(shí);方雅琴;李艷芳;;阿托伐他汀對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬作用的影響[J];山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年05期

  本文關(guān)鍵詞：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白3參與自噬并影響膽固醇流出機(jī)制初探，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：307167