本文關(guān)鍵詞：自噬在阿霉素誘導(dǎo)小鼠心肌損傷中的作用機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景：鹽酸阿霉素是臨床上最常用的一種蒽環(huán)類抗瘤藥物,它具有較廣的抗腫瘤譜。但是,長(zhǎng)期使用阿霉素可引起嚴(yán)重的心肌細(xì)胞損傷最終導(dǎo)致心肌細(xì)胞的死亡,臨床上表現(xiàn)為不可逆轉(zhuǎn)的心肌病和充血性心力衰竭。從而限制了其在臨床的廣泛應(yīng)用。目前阿霉素的心臟毒性機(jī)制尚未完全闡明,之前的研究認(rèn)為阿霉素可在體內(nèi)形成大量自由基及脂質(zhì)過(guò)氧化,并引起心肌細(xì)胞能量代謝的紊亂,最終導(dǎo)致心臟功能受損。近幾年來(lái),自噬在心血管疾病中的作用受到了廣泛的關(guān)注,自噬是一種將細(xì)胞內(nèi)受損、變性或衰老的蛋白質(zhì)以及損壞的細(xì)胞器運(yùn)輸?shù)饺苊阁w內(nèi)進(jìn)行消化降解并清除的過(guò)程,在不同的心肌病理學(xué)中,自噬的變化可能是心肌細(xì)胞的代償性反應(yīng),也可能導(dǎo)致自噬性細(xì)胞死亡。本課題旨在研究阿霉素誘導(dǎo)小鼠心肌損傷過(guò)程中,自噬是否參與這一過(guò)程,并且研究其作用機(jī)制。 研究目的：旨在研究阿霉素誘導(dǎo)小鼠心肌損傷模型中,自噬的作用及其作用機(jī)制,明確自噬在阿霉素心肌病中的作用,為阿霉素心肌病的治療提供新的策略。 研究方法：雄性C57小鼠,年齡在10-12周左右,體重在24-28g之間,隨機(jī)的分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組小鼠采用鹽酸阿霉素25mg/kg/d的劑量給予腹腔注射一次,造成小鼠急性心肌損傷的模型,對(duì)照組給予等劑量的生理鹽水,分別于注射后1d,2d,4d時(shí)取材,取材前18個(gè)小時(shí)注射Evans blu dye(100mg/kg),取心臟稱重,脛骨測(cè)其長(zhǎng)度計(jì)算心臟重量與脛骨長(zhǎng)度的比值,取心臟標(biāo)本,通過(guò)HE染色觀察心肌組織形態(tài)與結(jié)構(gòu)的改變,WGA染色觀察心肌細(xì)胞壞死情況,Real time PCR檢測(cè)Nrf2及其下游基因以及自噬相關(guān)基因mRNA水平的表達(dá)。Western blot檢測(cè)Nrf2及其下游基因以及自噬相關(guān)基因蛋白水平的表達(dá)。關(guān)于自噬流的檢測(cè),我們用雄性C57小鼠,年齡在10-12周左右,體重在24-28g之間,將其隨機(jī)分為生理鹽水+雷帕霉素、生理鹽水+雷帕霉素+氯奎、阿霉素+雷帕霉素、阿霉素+雷帕霉素+氯奎四組,每組n=4.阿霉素以25mg/kg/d的劑量腹腔注射一次,生理鹽水以等體積的量腹腔注射,注射后4天取材,取材前4小時(shí)腹腔注射雷帕霉素(2mg/kg/d)以及氯奎(10mg/kg/d).取左心室標(biāo)本,通過(guò)western blot檢測(cè)LC3及P62的表達(dá)。 研究結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組小鼠在注射鹽酸阿霉素1天后,小鼠的體重逐漸減輕,與給藥前體重相比有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.01).注射阿霉素2天后小鼠心臟重量與脛骨長(zhǎng)度的比值逐漸減小,與對(duì)照組小鼠相比有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.01)。HE染色顯示實(shí)驗(yàn)組小鼠注射阿霉素4天后,心肌細(xì)胞中出現(xiàn)大量的空泡結(jié)構(gòu)。WGA染色顯示小鼠注射阿霉素后與對(duì)照組小鼠相比出現(xiàn)大面積的心肌細(xì)胞壞死。Real-time PCR檢測(cè)Nrf2及其下游基因NQO1,HO-1的表達(dá)在注射阿霉素后逐漸升高,自噬相關(guān)基因Beclin1、ATG14L、ATG5、ATG7以及LC3與對(duì)照組相比表達(dá)升高,有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而Rubicon的表達(dá),與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組小鼠有下降的趨勢(shì),二者比較有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Westen blot分析,注射阿霉素的小鼠體內(nèi)NQO1蛋白的表達(dá)明顯高于對(duì)照組小鼠,LC3、P62蛋白水平的表達(dá),實(shí)驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組,而ATG5、ATG7、LAMP1和Cathepthin D的表達(dá),對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組相比無(wú)明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。泛素Ub的表達(dá),實(shí)驗(yàn)組小鼠與對(duì)照組相比有明顯升高的趨勢(shì)。自噬流的檢測(cè)結(jié)果顯示：生理鹽水的對(duì)照組小鼠中,注射雷帕霉素+氯奎后與只注射雷帕霉素組小鼠相比,LC3及P62的表達(dá)明顯升高,二者之間有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.01)。而阿霉素組,注射雷帕霉素+氯奎后與只注射雷帕霉素組小鼠相比LC3及P62的表達(dá)無(wú)明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 結(jié)論：(1)阿霉素誘導(dǎo)急性心肌損傷過(guò)程中,小鼠體內(nèi)啟動(dòng)了抗氧化應(yīng)激途徑。 (2)阿霉素誘導(dǎo)急性心肌損傷過(guò)程中,誘導(dǎo)了自噬小體形成途徑的激活。 (3)阿霉素誘導(dǎo)急性心肌損傷過(guò)程中,自噬小體的清除受到障礙,自噬流的平衡遭到破壞。 (4)阿霉素誘導(dǎo)急性心肌損傷過(guò)程中,泛素表達(dá)升高,蛋白通過(guò)泛素蛋白酶體系統(tǒng)的降解增強(qiáng)。
【關(guān)鍵詞】：鹽酸阿霉素 自噬相關(guān)基因 自噬流 氧化應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R542.2;R392
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 符號(hào)說(shuō)明12-14
• 前言14-20
• 材料與方法20-28
• 結(jié)果28-33
• 討論33-37
• 小結(jié)37-38
• 附圖38-47
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 致謝52-53
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文53-54
• 附件54

【共引文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：自噬在阿霉素誘導(dǎo)小鼠心肌損傷中的作用機(jī)制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：306211