本文關(guān)鍵詞：多胺參與白念珠菌耐藥機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：隨著抗真菌藥物的廣泛使用，由耐藥菌株所導(dǎo)致臨床真菌感染治療失敗的病例越來(lái)越多，白念珠菌（Candida albicans）是深部真菌感染的主要病原菌。因此，闡明白念珠菌耐藥機(jī)制對(duì)于臨床真菌感染治療具有重要意義。前期白念珠菌代謝組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，在AmB處理組中多胺含量均明顯升高。已知多胺是一類(lèi)含有氨基的脂肪族類(lèi)化合物，主要包括腐胺(putrescine)、亞精胺(spermidine)和精胺(spermine)，多胺在植物抗逆性和細(xì)菌耐藥性方面發(fā)揮重要作用，同時(shí)能夠刺激白念珠菌菌絲形成。因此，我們推測(cè)多胺可能參與白念珠菌耐藥過(guò)程。 本課題中，分別將精胺、亞精胺和腐胺與氟康唑、咪康唑、卡泊芬凈、制霉菌素、兩性霉素B（AmB）和紫草素合用作用于白念珠菌，觀(guān)察其生長(zhǎng)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)多胺能夠拮抗卡泊芬凈、制霉菌素、AmB和紫草素的抗真菌效果，采用生長(zhǎng)曲線(xiàn)和生存率實(shí)驗(yàn)考察多胺作用，證實(shí)多胺可以顯著拮抗AmB抗真菌作用。采用XTT還原法檢測(cè)多胺是否影響AmB抗生物被膜活性。結(jié)果表明，精胺、亞精胺和腐胺均可以拮抗AmB抗生物被膜活性，并且這種拮抗作用與多胺呈劑量依賴(lài)性。為明確多胺在白念珠菌應(yīng)對(duì)AmB刺激中的作用，采用內(nèi)源敲除SPE1基因（SPE1為多胺合成關(guān)鍵基因）與外源添加多胺的方法考察白念珠菌對(duì)AmB的敏感性，結(jié)果顯示，SPE1敲除菌對(duì)AmB更為敏感，而外源添加多胺則可以降低SPE1敲除菌對(duì)AmB的敏感性。這表明，多胺可降低白念珠菌對(duì)AmB敏感性，誘導(dǎo)白念珠菌耐藥性形成。 本課題從氧化應(yīng)激和生物被膜形成兩方面來(lái)闡明多胺參與白念珠菌耐藥機(jī)制。采用DCFH-DA染色方法檢測(cè)白念珠菌胞內(nèi)活性氧含量，采用Real Time RT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)氧化還原相關(guān)基因表達(dá)水平，結(jié)果顯示精胺、亞精胺和腐胺與AmB合用能顯著降低AmB引起的胞內(nèi)活性氧含量升高，同時(shí)能下調(diào)SOD2、SOD5、EBP1和MRF1基因表達(dá)，起到抵抗AmB導(dǎo)致氧化損傷作用。細(xì)胞表面疏水性（cell surfacehydrophobicity，CSH）和酵母態(tài)向菌絲態(tài)轉(zhuǎn)化在生物被膜形成中起關(guān)鍵作用。本實(shí)驗(yàn)采用水-烴兩相分離法和菌絲形成實(shí)驗(yàn)考察多胺拮抗AmB抗生物被膜活性機(jī)制。結(jié)果顯示，，精胺、亞精胺和腐胺與AmB合用組CSH與AmB單用組相比顯著升高，而DAB（多胺合成抑制劑）與AmB合用組CSH比AmB單用組降低。采用Spider和RPMI1640加10%FBS培養(yǎng)基進(jìn)行菌絲形成實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，精胺、亞精胺、腐胺與AmB合用組，菌絲形成能力比AmB單用組顯著增強(qiáng)，而DAB與AmB合用組，完全抑制菌絲形成。采用Real Time RT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)被膜相關(guān)基因表達(dá)水平，結(jié)果表明，精胺與AmB合用組IFF4、CSH1、HWP1、ALS3、ECE1和RAS1基因表達(dá)水平與AmB單用組相比均顯著上升，與空白組相比無(wú)差異。這表明精胺、亞精胺和腐胺拮抗AmB抗被膜作用是通過(guò)增強(qiáng)AmB作用下生物被膜細(xì)胞表面疏水性、菌絲形成能力和提高被膜相關(guān)基因表達(dá)水平來(lái)實(shí)現(xiàn)。 綜上所述，多胺能夠參與白念珠菌耐藥過(guò)程，并能通過(guò)降低胞內(nèi)活性氧含量和增強(qiáng)生物被膜形成能力來(lái)實(shí)現(xiàn)。
【關(guān)鍵詞】：白念珠菌 多胺 兩性霉素B 耐藥
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R379
【目錄】：

• 目錄4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略詞表9-10
• 前言10-15
• 第一部分 多胺參與白念珠菌耐藥作用研究15-27
• 一、實(shí)驗(yàn)材料15-16
• 二、實(shí)驗(yàn)方法16-19
• 三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理19
• 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-25
• 五、討論25-27
• 第二部分 多胺參與白念珠菌耐藥機(jī)制研究27-50
• 一、實(shí)驗(yàn)材料與方法27-36
• 二、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理36
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-46
• 四、討論46-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-58
• 文獻(xiàn)綜述58-68
• 參考文獻(xiàn)65-68
• 在讀期間發(fā)表論文和參加工作情況說(shuō)明68-69
• 致謝69-70

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 朱春香;高平揮;姜遠(yuǎn)英;;白念珠菌基因變異對(duì)唑類(lèi)藥物耐受性的研究進(jìn)展[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2010年07期

  本文關(guān)鍵詞：多胺參與白念珠菌耐藥機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：305790