目的優(yōu)化探索重組質(zhì)粒pET30a-EgG1Y162-2蛋白表達(dá)條件并預(yù)測其蛋白結(jié)構(gòu)模型。方法將構(gòu)建的重組質(zhì)粒pET30a-EgG1Y162-2轉(zhuǎn)化至E.coli BL21 （DE3）菌株中,用不同濃度的IPTG進(jìn)行不同時(shí)間段的蛋白誘導(dǎo)表達(dá),誘導(dǎo)后的菌液超聲破碎、離心,分別取上清和沉淀用SDS-PAGE分析重組蛋白EgG1Y162-2的表達(dá)情況,Western blot鑒定表達(dá)蛋白的反應(yīng)原性。采用在線SWISS MODEL預(yù)測EgG1Y162-2蛋白的三維結(jié)構(gòu)。結(jié)果 EgG1Y162-2蛋白在37℃,IPTG終濃度為0.5 mmol/L,誘導(dǎo)4 h條件下的表達(dá)量較高,蛋白相對分子質(zhì)量約為15×10³,與預(yù)期相符,且能被鼠抗His-Tag抗體識別。在線Swiss-model預(yù)測EgG1Y162-2-2蛋白3D結(jié)構(gòu)模型,與4Ixo.1.A結(jié)構(gòu)的相似度為37.71%。結(jié)論優(yōu)化的重組蛋白EgG1Y162-2表達(dá)最優(yōu)條件預(yù)測的該蛋白三維結(jié)構(gòu),為細(xì)粒棘球蚴疫苗EgG1Y162-2抗原的功能研究奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來源】：中國病原生物學(xué)雜志. 2019,14(09)北大核心

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    1 材料
    2 方法
        2.1 重組EgG1Y162-2的誘導(dǎo)表達(dá)條件的優(yōu)化
        2.2 重組蛋白Western blot鑒定
        2.3 重組蛋白的信息學(xué)軟件分析
結(jié) 果
    1 pET30a-EgG1Y162-2表達(dá)產(chǎn)物的SDS-PAGE電泳分析
    2 不同誘導(dǎo)條件下的重組蛋白表達(dá)水平
    3 重組蛋白EgG1Y162-2的Western blot鑒定
    4 EgG1Y162-2蛋白的三級結(jié)構(gòu)
討 論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3049046