本文關(guān)鍵詞：伯氏疏螺旋體重組膜蛋白A對小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7的體外作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的： 1、以小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞為模型,探討伯氏疏螺旋體重組膜蛋白A (recombinant Borrelia burgdorferi membrane protein A, rBmpA)致萊姆關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制。 2、探討異佛司可林(Isoforskolin, ISOF)對rBmpA致萊姆關(guān)節(jié)炎的抑制作用。 研究方法： 1、96孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞[培養(yǎng)基為10%FBS-DMEM(高糖)培養(yǎng)基,細(xì)胞濃度8×104～1×105/ml,體積100μl],培養(yǎng)6-12h待其完全貼壁后棄去培養(yǎng)基,用10μg/ml及20μg/ml rBmpA分別處理RAW264.7細(xì)胞,在作用3h、6h、12h、24h、36h及48h后收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液,用ELISA法檢測炎性細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12及TNF-α的分泌量。 2、96孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞[培養(yǎng)基為10%FBS-DMEMi(高糖)培養(yǎng)基,細(xì)胞濃度8×104～1×105/ml,體積100ul],培養(yǎng)6-12h待其完全貼壁后棄去培養(yǎng)基,用20μg/ml rBmpA與100μM ISOF(總體積為100μl)共同處理RAW264.7細(xì)胞,在作用24h及48h后收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液,用ELISA法檢測炎性細(xì)胞因子IL-6及TNF-α的分泌量。 研究結(jié)果： 1、與正常對照組相比,隨著rBmpA濃度的增加,RAW264.7細(xì)胞IL-6及TNF-α的分泌呈濃度依賴性上調(diào)；與3h組相比,隨著rBmpA作用時間的延長,RAW264.7細(xì)胞IL-6的表達(dá)水平呈時間依賴性上調(diào)；與12h組相比,隨著rBmpA作用時間的延長,RAW264.7細(xì)胞TNF-α的表達(dá)水平呈時間依賴性上調(diào)；rBmpA對其他炎性細(xì)胞因子(包括IL-1β、IL-8和IL-12)的刺激作用不明顯。 2、與rBmpA處理組相比,rBmpA+ISOF組RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)上清液中炎性細(xì)胞因子IL-6及TNF-α水平顯著降低。 結(jié)論： 1、rBmpA呈濃度及時間依賴性上調(diào)小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞炎性細(xì)胞因子IL-6及TNF-a的分泌,可能與萊姆關(guān)節(jié)炎的發(fā)生有關(guān)。 2、ISOF能夠抑制rBmpA誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞分泌釋放炎性細(xì)胞因子IL-6及TNF-a,可能對萊姆關(guān)節(jié)炎有抗炎治療作用。
【關(guān)鍵詞】：萊姆關(guān)節(jié)炎 伯氏疏螺旋體 rBmpA 巨噬細(xì)胞 RAW264.7 異佛司可林
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R377
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 相關(guān)縮略詞11-12
• 前言12-18
• 1 研究背景12-16
• 1.1 萊姆關(guān)節(jié)炎致病機(jī)制13-14
• 1.2 BmpA與萊姆關(guān)節(jié)炎關(guān)系14-15
• 1.3 異佛司可林與萊姆關(guān)節(jié)炎關(guān)系15-16
• 2 本課題意義16-17
• 3 技術(shù)路線17-18
• 第一部分 小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞體外培養(yǎng)方法18-27
• 1 材料18-21
• 1.1 主要儀器18-19
• 1.2 主要試劑19-20
• 1.3 主要溶液試劑配制20-21
• 2 實驗方法21-23
• 2.1 小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞體外培養(yǎng)21-23
• 2.2 探索96孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞的最適濃度23
• 3 實驗結(jié)果23-25
• 3.1 小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞體外培養(yǎng)24
• 3.2 小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞形態(tài)觀察24-25
• 3.3 96孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞最適濃度的探索結(jié)果25
• 4 討論25-26
• 5 結(jié)論26-27
• 第二部分 rBmpA對小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7的體外作用研究27-40
• 1 材料27-31
• 1.1 主要儀器27-29
• 1.2 主要試劑29-30
• 1.3 主要溶液試劑配制30-31
• 2 實驗方法31-32
• 2.1 小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)31-32
• 2.2 rBmpA誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞活化分泌釋放炎性細(xì)胞因子的作用研究32
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)處理32
• 3 實驗結(jié)果32-38
• 3.1 rBmpA誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞活化后細(xì)胞形態(tài)觀察結(jié)果32-33
• 3.2 rBmpA誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞活化分泌釋放炎性細(xì)胞因子IL-6的檢測結(jié)果33-36
• 3.3 rBmpA誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞活化分泌釋放炎性細(xì)胞因子TNF-α的檢測結(jié)果36-38
• 3.4 rBmpA誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞活化分泌釋放炎性細(xì)胞因子IL-1β、IL-8、IL-12的檢測結(jié)果38
• 4 討論38-39
• 5 結(jié)論39-40
• 第三部分 ISOF對rBmpA致萊姆關(guān)節(jié)炎的抑制作用研究40-51
• 1 材料40-45
• 1.1 主要儀器40-42
• 1.2 主要試劑42-43
• 1.3 主要溶液試劑配制43-45
• 2 實驗方法45-46
• 2.1 小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)45
• 2.2 ISOF對rBmpA誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞活化分泌釋放炎性細(xì)胞因子的抑制作用研究45-46
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)處理46
• 3 實驗結(jié)果46-50
• 3.1 ISOF對rBmpA誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞活化分泌釋放炎性細(xì)胞因子IL-6的抑制作用結(jié)果46-48
• 3.2 ISOF對rBmpA誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞活化分泌釋放炎性細(xì)胞因子TNF-α的抑制作用結(jié)果48-50
• 4 討論50
• 5 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 綜述55-66
• 參考文獻(xiàn)61-66
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況66-67
• 致謝67

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：伯氏疏螺旋體重組膜蛋白A對小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7的體外作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：303530