本文關(guān)鍵詞：人體細(xì)胞體外重編程為誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞關(guān)鍵技術(shù)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的本研究將攜帶胚胎特異性轉(zhuǎn)錄因子Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4基因慢病毒顆粒感染人包皮成纖維細(xì)胞（human postnatal foreskin fibroblasts hPFF），體外重編程為誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞（induced pluripotent stem cell iPSC）；原代培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVE）體系,將表達(dá)microRNA-302-367基因慢病毒顆粒感染HUVE，探討目的基因microRNA-302-367過(guò)表達(dá)慢病毒顆粒感染HUVE體外重編程為誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞（inducedpluripotent stem cell iPSC）的關(guān)鍵技術(shù)。 方法（1）以最佳病毒感染復(fù)數(shù)（Multiplicity of infection，MOI值）感染hPFF,體外重編程為iPSC，通過(guò)細(xì)胞形態(tài)學(xué)、堿性磷酸酶染色進(jìn)行驗(yàn)證及畸胎瘤成瘤實(shí)驗(yàn)對(duì)iPSC多向分化潛能進(jìn)行鑒定（2）采用0.1%Ⅰ型膠原酶灌注人臍靜脈，消化15min后收集人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞懸液，接種于T25cm的培養(yǎng)瓶中，進(jìn)行培養(yǎng)。以免疫細(xì)胞化學(xué)法進(jìn)行細(xì)胞鑒定；MTS法測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。（3）將過(guò)表達(dá)綠色熒光蛋白（Green fluorescent protein，GFP）的空病毒顆粒感染HUVE，在熒光倒置顯微鏡下觀察熒光表達(dá)情況，探討最佳感染條件及MOI值；（4）將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的HUVE隨機(jī)分為3組：正常對(duì)照組、含綠色熒光蛋白空病毒載體感染組、目的基因感染組進(jìn)行感染，第2天給予干細(xì)胞培養(yǎng)條件,在倒置顯微鏡下動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞形態(tài)變化，探討最佳培養(yǎng)條件。 結(jié)果（1）在最佳MOI值40的慢病毒感染條件下感染hPFF,感染7天后，細(xì)胞偽足收縮，形態(tài)由長(zhǎng)梭形變?yōu)閳A形，感染25天后，可挑選細(xì)胞克��；堿性磷酸酶染色為陽(yáng)性；畸胎瘤成瘤實(shí)驗(yàn)證實(shí)iPSC具有向內(nèi)、中、外三個(gè)胚層分化的潛能（2）0.1%Ⅰ型膠原酶消化人臍靜脈體外建立穩(wěn)定的HUVE系，，培養(yǎng)3天后，0.25%胰蛋白酶消化傳代。免疫細(xì)胞化學(xué)法SABC法鑒定HUVE細(xì)胞第VIII因子相關(guān)抗原呈陽(yáng)性結(jié)果。(3)本實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件下，慢病毒感染HUVE的最佳MOI值為10，經(jīng)PCR檢測(cè)microRNA-302-367過(guò)表達(dá)慢病毒顆粒能有效感染HUVE。 結(jié)論本研究成功地將hPFF體外重編程為iPSC；本研究于體外建立穩(wěn)定的HUVE系；慢病毒顆�？捎行У馗腥緃PFF、HUVE。
【關(guān)鍵詞】：人包皮成纖維細(xì)胞 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 慢病毒 重編程 誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R329
【目錄】：

• 中英文簡(jiǎn)寫(xiě)對(duì)照5-6
• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 前言10-13
• 第一部分 人包皮成纖維細(xì)胞體外誘導(dǎo)為多能干細(xì)胞13-21
• 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>13
• 二、實(shí)驗(yàn)材料13-14
• 三、實(shí)驗(yàn)方法14-17
• 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-19
• 五、 討論19-21
• 第二部分 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞原代培養(yǎng)及體外誘導(dǎo)為多能干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究21-36
• 第一章 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)21-27
• 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>21
• 二、實(shí)驗(yàn)材料21-22
• 三、實(shí)驗(yàn)方法22-24
• 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-26
• 五、討論26-27
• 第二章 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞體外誘導(dǎo)為多能干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究27-36
• 第一節(jié) 表達(dá)綠色熒光蛋白基因的慢病毒顆粒感染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究27-32
• 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>27
• 二、實(shí)驗(yàn)材料27
• 三、實(shí)驗(yàn)方法27-28
• 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-30
• 五、討論30-32
• 第二節(jié) microRNA(miR-302-367）慢病毒顆粒感染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究32-36
• 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>32
• 二、實(shí)驗(yàn)材料32
• 三、實(shí)驗(yàn)方法32-33
• 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-34
• 五、討論34-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-41
• 致謝41-42
• 綜述42-50
• 參考文獻(xiàn)47-50

【相似文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：人體細(xì)胞體外重編程為誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞關(guān)鍵技術(shù)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：303148