本文關(guān)鍵詞：SRC-3在HBV轉(zhuǎn)錄復(fù)制中作用的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：乙型肝炎(Hepatitis B)是一種在世界范圍內(nèi)流行的傳染性疾病,由乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus, HBV)感染引起。慢性HBV感染容易誘發(fā)肝硬化和肝癌等高致死率的疾病,因此受到廣泛關(guān)注。 類固醇激素受體輔激活因子-3(Steroid Receptor Coactivator-3, SRC-3)是p160輔激活因子家族的一員。SRC-3在細(xì)胞代謝和肝癌的發(fā)生發(fā)展中起到重要的作用,而這些過程也與HBV的復(fù)制密切相關(guān),提示了SRC-3與HBV轉(zhuǎn)錄復(fù)制間可能存在相關(guān)性。 在本研究中,我們建立了流體動力學(xué)注射(Hydrodynamic Injection)感染HBV的小鼠模型,發(fā)現(xiàn)相對與野生型小鼠,感染HBV的SRC-3-/-小鼠的血清中含有更高水平的HBV抗原,其肝臟表達(dá)的HBV總mRNA水平也更高。在人肝癌細(xì)胞系HepG2中,降低SRC-3的表達(dá)水平可以提高培養(yǎng)液上清中HBV抗原水平和細(xì)胞內(nèi)總mRNA水平。通過檢測細(xì)胞抗病毒相關(guān)基因mRNA的表達(dá)水平,我們沒有發(fā)現(xiàn)SRC-3對細(xì)胞清除病毒的機(jī)制產(chǎn)生明顯影響,推測SRC-3可能影響HBV的轉(zhuǎn)錄。在HepG2細(xì)胞內(nèi),我們發(fā)現(xiàn)SRC-3的下調(diào)會導(dǎo)致Akt磷酸化水平降低,回補(bǔ)持續(xù)激活型Akt將重新抑制SRC-3敲低引起的HBV表達(dá)。在SRC-3-/-小鼠肝臟中的Akt磷酸化水平比WT小鼠較低。利用熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)我們發(fā)現(xiàn)SRC-3可抑制HNF-4a誘導(dǎo)的HBV核心啟動子活性。這些結(jié)果說明SRC-3通過增強(qiáng)Akt信號抑制HBV轉(zhuǎn)錄,并可能與HNF-4a的轉(zhuǎn)錄激活活性有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：HBV SRC-3
【學(xué)位授予單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R3416
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 前言10-26
• 1. 乙型病毒性肝炎概述10-12
• 1.1 乙型肝炎的傳播11
• 1.2 乙型肝炎病毒相關(guān)疾病11-12
• 2. 乙型肝炎病毒概述12-20
• 2.1 乙型肝炎病毒的基因組13-14
• 2.2 乙型肝炎病毒主要的功能蛋白14-17
• 2.3 乙型肝炎病毒的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄調(diào)控17-20
• 3. 類固醇激素受體輔激活子-3(SRC-3)概述20-24
• 3.1 SRC-3的蛋白結(jié)構(gòu)21-22
• 3.2 SRC-3的基因定位及表達(dá)22-23
• 3.3 SRC-3的功能和相關(guān)疾病23-24
• 4. 立題背景24-26
• 材料與方法26-42
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料26-28
• 1.1 主要試劑及藥品26-27
• 1.2 主要設(shè)備及器材27
• 1.3 細(xì)胞系27
• 1.4 菌株27
• 1.5 實(shí)驗(yàn)動物27-28
• 1.6 質(zhì)粒28
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法28-42
• 2.1 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備28-29
• 2.2 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞29
• 2.3 質(zhì)粒的構(gòu)建29-31
• 2.4 質(zhì)粒DNA的提取31-33
• 2.5 動物組織基因組DNA提取33-34
• 2.6 小鼠基因型鑒定(PCR法)34-35
• 2.7 細(xì)胞培養(yǎng)35
• 2.8 細(xì)胞凍存與復(fù)蘇35-36
• 2.9 細(xì)胞轉(zhuǎn)染36
• 2.10 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的建立36
• 2.11 蛋白提取與蛋白濃度的測定36-37
• 2.12 蛋白質(zhì)印記法37-38
• 2.13 RNA的提取38-39
• 2.14 逆轉(zhuǎn)錄cDNA39
• 2.15 實(shí)時(shí)熒光定量PCR39-40
• 2.16 熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)40
• 2.17 流體動力學(xué)注射(Hydrodynamic Injection)40
• 2.18 HBsAg和HBeAg的ELISA檢測40-42
• 結(jié)果與分析42-50
• 1. SRC-3抑制HBV在小鼠體內(nèi)表達(dá)42-43
• 2. SRC-3抑制HBV在HepG2細(xì)胞中表達(dá)43-45
• 3. 未發(fā)現(xiàn)SRC-3與細(xì)胞抗病毒機(jī)制的相關(guān)性45
• 4. SRC-3通過增強(qiáng)PI3K-Akt信號通路抑制HBV表達(dá)45-47
• 5. SRC-3抑制HBV的Akt下游分子初探47-50
• 討論50-52
• 參考文獻(xiàn)52-60
• 致謝60

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 ;Hepatitis B virus X gene induces human telomerase reverse transcriptase mRNA expression in cultured normal human cholangiocytes[J];World Journal of Gastroenterology;2004年15期

2 Juergen Beck;Michael Nassal;;Hepatitis B virus replication[J];World Journal of Gastroenterology;2007年01期

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  本文關(guān)鍵詞：SRC-3在HBV轉(zhuǎn)錄復(fù)制中作用的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：303040