本文關(guān)鍵詞：臨床銅綠假單胞菌的毒力性能及穿心蓮內(nèi)酯對(duì)其的干預(yù)作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分臨床銅綠假單胞菌生物膜形成的分析 目的：分析不同來(lái)源的臨床銅綠假單胞菌生物膜形成能力。 方法：選擇源自重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院（49株），北京大學(xué)附屬第一醫(yī)院（14株）和浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院（32株）三家醫(yī)院的臨床銅綠假單胞菌共95株，其中痰液標(biāo)本49株，血液標(biāo)本30株，腹腔膿液、尿液、膽汁及其他來(lái)源標(biāo)本共計(jì)16株。微量滴定板生物膜分析實(shí)驗(yàn)測(cè)定生物膜的成熟期及其形成能力的強(qiáng)弱；綜合臨床菌株的不同來(lái)源及生物膜形成能力，分析兩者的相關(guān)性。 結(jié)果：所有不同來(lái)源的臨床銅綠假單胞菌株均可以形成生物膜。49株分離自痰液的銅綠假單胞菌中有45株的生物膜形成能力強(qiáng)（91.8%），46株分離自血液、腹腔膿液、尿液、膽汁及其他來(lái)源的菌株中生物膜形成能力強(qiáng)的有33株（71.7%）；痰液來(lái)源和非痰液來(lái)源的臨床菌株的生物膜形成能力強(qiáng)的菌株比率相比較，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。49株痰液來(lái)源的菌株生物膜到達(dá)成熟期的時(shí)間為3.63±1.20天，46株非痰液來(lái)源的菌株生物膜到達(dá)成熟期的時(shí)間為為4.27±1.23天，痰液組和非痰液組的生物膜成熟期形成時(shí)間進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）。 結(jié)論：不同臨床分離銅綠假單胞菌株形成生物膜的能力差異較大。痰液來(lái)源的臨床菌株較非痰液來(lái)源的臨床菌株生物膜形成能力強(qiáng)，且痰液來(lái)源的臨床菌株較非痰液來(lái)源的臨床菌株到達(dá)生物膜成熟期所需的時(shí)間短。 第二部分穿心蓮內(nèi)酯對(duì)臨床銅綠假單胞菌感染人支氣管上皮細(xì)胞的影響 目的：制備銅綠假單胞菌感染人支氣管上皮細(xì)胞（BEAS-2B）模型，研究穿心蓮內(nèi)酯對(duì)細(xì)菌感染性和其誘發(fā)宿主細(xì)胞炎性反應(yīng)能力的影響。 方法：選擇源自重慶、北京和浙江三家醫(yī)院的臨床銅綠假單胞菌，采用聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase chain reaction, PCR)技術(shù)檢測(cè)各臨床菌株T3SS毒力效應(yīng)分子的編碼基因。根據(jù)其毒力效應(yīng)分子編碼基因的攜帶差異,選擇Cq40（exoU+、exoS-、exoT+和exoY+）、Cq1（exoU-、exoS+、exoT+和exoY+）、Cq24（exoU-、exoS+、exoT-和exoY+）及Cq16（exoU+、exoS-、exoT-和exoY+）四株臨床菌株，分別用于感染人支氣管上皮細(xì)胞BEAS-2B。菌落計(jì)數(shù)法檢測(cè)銅綠假單胞菌對(duì)BEAS-2B細(xì)胞的侵襲力；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法檢測(cè)銅綠假單胞菌感染BEAS-2B細(xì)胞后乳酸脫氫酶（lactic dehydrogenase，LDH）的釋放量及炎癥因子白介素-6（Interleukin-6，IL-6）和IL-8（Interleukin-8，IL-8）的表達(dá)水平。用Luria-Bertani broth肉湯(LB肉湯)培養(yǎng)基，觀察穿心蓮內(nèi)酯（濃度300μM）對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的影響。用不同濃度的穿心蓮內(nèi)酯（3μM和4.5μM）干預(yù)銅綠假單胞菌感染BEAS-2B，菌落計(jì)數(shù)法檢測(cè)干預(yù)后銅綠假單胞菌對(duì)BEAS-2B細(xì)胞的侵襲力；用ELISA法檢測(cè)穿心蓮內(nèi)酯干預(yù)BEAS-2B后LDH的釋放量及炎癥因子IL-6和IL-8的表達(dá)水平。 結(jié)果：95株分離自臨床的銅綠假單胞菌T3SS毒力基因的攜帶率分別為exoU21%、exoS84.2%、exoT49.5%和exoY82.1%，重慶組（49株）中，20%攜帶exoU，90%攜帶exoS,59%攜帶exoT,攜帶91.8%exoY。杭州組（32株）中，28%攜帶exoU，69%攜帶exoS,25%攜帶exoT,63%攜帶exoY。北京組（14株）中7%攜帶exoU，100%攜帶exoS,71%攜帶exoT,93%攜帶exoY。將單個(gè)菌株進(jìn)行毒力效應(yīng)分子編碼基因攜帶分型，可分為11種類(lèi)型，其中exoU-、exoS-、exoT-和exoY-9株，只含exoU-、exoS+、exoT-和exoY-4株，含exoU-、exoS+、exoT+和exoY-4株，exoU-、exoS+、exoT-和exoY+28株，exoU-、exoS-、exoT+和exoY+2株，exoU-、exoS+、exoT+和exoY+29株，exoU+、exoS-、exoT-和exoY+2株，exoU+、exoS-、exoT+和exoY+2株，exoU+、exoS+、exoT+和exoY-2株，exoU+、exoS+、exoT-和exoY+5株，以及exoU+、exoS+、exoT+和exoY+8株。95株臨床銅綠假單胞菌的毒力基因攜帶以exoU-、exoS+、exoT-、exoY+和exoU-、exoS+、exoT+、exoY+兩種類(lèi)型為主。痰液組中exoU-、exoS+、exoT+、exoY+基因型攜帶率33%，非痰液組為30%，exoU-、exoS+、exoT-、exoY+基因型在痰液組攜帶率為37%，在非痰液組攜帶率為22%。兩種基因型攜帶率在痰液組和非痰液組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）。Cq40、Cq1、Cq24及Cq16等四株臨床菌株銅綠假單胞菌能侵入細(xì)胞，3μM穿心蓮內(nèi)酯就能顯著降低侵入胞內(nèi)的銅綠假單胞菌數(shù)： Cq1組菌落數(shù)由1840±121CFU/ml降至1090±101CFU/ml； Cq40組菌落數(shù)由2900±100CFU/ml降至1060±196CFU/ml； Cq16組菌落數(shù)由3200±264CFU/ml降至1090±125CFU/ml； Cq24組菌落數(shù)由1740±121CFU/ml降至980±190CFU/ml。當(dāng)穿心蓮內(nèi)酯濃度增加至4.5μM時(shí)其抑制作用更強(qiáng)：Cq1組菌落數(shù)進(jìn)一步減少至360±45CFU/ml；Cq40組菌落數(shù)減少至500±36CFU/ml；Cq16組菌落數(shù)減少至430±30CFU/ml；Cq24組菌落數(shù)減少至360±26CFU/ml。與此相應(yīng)，銅綠假單胞菌感染所致的細(xì)胞LDH釋放(3μM穿心蓮內(nèi)酯的作用)：Cq1組由3128.3±456.939μmol/ml下降至1875.8±16.061μmol/ml；Cq40組由4082.45±133.307μmol/ml下降至3175.266±298.927μmol/ml；Cq16組由3518.467±264.113μmol/ml下降至2131.6±178.922μ mol/ml； Cq24組由2382.4±63.161μ mol/ml下降至1636.466±55.930μmol/ml。穿心蓮內(nèi)酯濃度增加至4.5μM時(shí)，銅綠假單胞菌感染所致的細(xì)胞LDH釋放進(jìn)一步下降：Cq1組降至1061.366±165.731μmol/ml；Cq40組降至1813±92.528μmol/ml；Cq16組降至1459.7±137.157μmol/ml； Cq24組降至1016.133±77.309μmol/ml。在穿心蓮內(nèi)酯干預(yù)前后兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05），且兩種不同濃度穿心蓮內(nèi)酯之間的作用強(qiáng)度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。3μM穿心蓮內(nèi)酯干預(yù)后，IL-6的生成：Cq1組由25.133±0.204pg/ml降至17.557±0.318pg/ml；Cq40組由12.495±0.691pg/ml降至8.576±0.657pg/ml；Cq16組由15.130±0.449pg/ml降至10.780±0.982pg/ml；Cq24組由24.106±1.107pg/ml降至18.360±0.221pg/ml。IL-8的生成：Cq1組由593.866±48.981pg/ml降至372.466±3.2653pg/ml；Cq40組由472.5±48.350pg/ml降至339.6±5.556pg/ml；Cq16組由488.833±39.480pg/ml降至251.93±2.9004pg/ml；Cq24組由569.833±26.385pg/ml降至345.4±8.006pg/ml。當(dāng)穿心蓮內(nèi)酯濃度增加至4.5μM時(shí)其抑制作用更強(qiáng)， IL-6的生成水平進(jìn)一步下降：Cq1組降至8.865±0.175pg/ml；Cq40組降至3.761±0.209pg/ml；Cq16組降至3.348±0.341pg/ml；Cq24組降至8.833±0.574pg/ml。IL-8的生成水平也顯著下降：Cq1組降至215.266±8.558pg/ml；Cq40組降至187.566±3.677pg/ml；Cq16組降至89.76±4.677pg/ml； Cq24組降至300.466±13.9004pg/ml。3μM穿心蓮內(nèi)酯使用前后銅綠假單胞菌炎癥因子IL-6和IL-8的表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；4.5μM與3μM的穿心蓮內(nèi)酯的作用強(qiáng)度之間的比較差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論：臨床銅綠假單胞菌對(duì)人支氣管上皮細(xì)胞BEAS-2B具有侵襲力，使細(xì)胞LDH釋放量增加以及刺激細(xì)胞表達(dá)大量炎癥因子IL-6和IL-8；穿心蓮內(nèi)酯可抑制銅綠假單胞菌臨床分離株對(duì)人支氣管上皮細(xì)胞的侵襲力，并可降低細(xì)胞的損傷程度及改善細(xì)胞的炎癥反應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：銅綠假單胞菌 Ⅲ型分泌系統(tǒng) 生物膜 人支氣管上皮細(xì)胞 穿心蓮內(nèi)酯
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R378.99
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-6
• 摘要6-13
• ABSTRACT13-20
• 前言20-24
• 第一部分 臨床銅綠假單胞菌生物膜形成的分析24-29
• 1 實(shí)驗(yàn)材料24-25
• 2 實(shí)驗(yàn)方法25-26
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-27
• 4 討論27-29
• 第二部分 穿心蓮內(nèi)酯對(duì)臨床銅綠假單胞菌感染人支氣管上皮細(xì)胞的影響29-51
• 1 實(shí)驗(yàn)材料29-31
• 2 實(shí)驗(yàn)方法31-35
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-47
• 4 討論47-51
• 全文總結(jié)51-52
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 文獻(xiàn)綜述57-67
• 參考文獻(xiàn)61-67
• 致謝67-68
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文68-69

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 王靜;華子瑜;沈犁;張佳星;;穿心蓮內(nèi)酯對(duì)臨床銅綠假單胞菌感染人支氣管上皮細(xì)胞的干預(yù)研究[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年10期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 郭俏;銅綠假單胞菌致病因子抑制劑及喹諾酮信號(hào)分子介導(dǎo)的調(diào)節(jié)途徑研究[D];西北大學(xué);2013年

2 孔偉娜;銅綠假單胞菌中Ⅲ型分泌系統(tǒng)轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制的研究[D];西北大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：臨床銅綠假單胞菌的毒力性能及穿心蓮內(nèi)酯對(duì)其的干預(yù)作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：302180