本文關(guān)鍵詞：EB病毒早期基因BARF1和BHRF1啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)與表達(dá)的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)屬人類皰疹病毒科γ皰疹病毒亞科成員,是重要的DNA病毒,具有致癌潛能。體內(nèi)主要感染B淋巴細(xì)胞和某些上皮細(xì)胞,可導(dǎo)致B細(xì)胞源性腫瘤或上皮細(xì)胞源性腫瘤。EBV相關(guān)胃癌(EBV-associated gastric carcinoma, EBVaGC)及鼻咽癌組織中病毒基因表現(xiàn)為限制性表達(dá),可能與表觀遺傳機(jī)制調(diào)控病毒基因啟動(dòng)子,尤其是其甲基化狀態(tài)來(lái)調(diào)控病毒基因的表達(dá)有關(guān)。 目的探討EBV早期基因BARF1啟動(dòng)子Ap和BHRF1啟動(dòng)子Hp甲基化狀態(tài)及其對(duì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)的影響,為進(jìn)一步研究BARF1和BHRF1基因在EBV相關(guān)腫瘤發(fā)生中的作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法選取EBV陽(yáng)性細(xì)胞系(GT38, B95-8, GT39, Raji, PT, C666-1, OB, SNU719)和EBVaGC作為研究對(duì)象,采用5-氮雜-2'-脫氧胞苷(5-Aza-CdR)處理EBV陽(yáng)性細(xì)胞系(GT38, B95-8, GT39, Raji),甲基化特異性PCR (Methylation-Specific PCR, MSP)以及亞硫酸氫鹽基因組測(cè)序法(Bisulfite genomic sequencing, BGS)檢測(cè)EBVaGC組織以及5-Aza-CdR處理前后EBV陽(yáng)性細(xì)胞系中BARF1和BHRF1基因啟動(dòng)子Ap和Hp甲基化狀態(tài)。同時(shí)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time quantitative PCR, qRT-PCR)檢測(cè)5-Aza-CdR處理前后BARF1和BHRF1基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)情況。 結(jié)果①M(fèi)SP檢測(cè)結(jié)果顯示在EBV陽(yáng)性細(xì)胞系中BARF1和BHRF1基因啟動(dòng)子Ap和Hp均存在不同程度的甲基化,在GT38, GT39, PT, C666-1和Raji細(xì)胞系呈完全甲基化,為M型；而在SNU719, B95-8和OB細(xì)胞系發(fā)生不完全甲基化,呈M+U型。②BGS檢測(cè)結(jié)果顯示,MSP產(chǎn)物電泳為M型的EBV陽(yáng)性細(xì)胞系3種EBV早期基因啟動(dòng)子區(qū)幾乎所有CpG位點(diǎn)均發(fā)生甲基化,而MSP產(chǎn)物電泳呈M+U型的EBV陽(yáng)性細(xì)胞系1種EBV早期基因啟動(dòng)子區(qū)則表現(xiàn)為部分CpG位點(diǎn)的甲基化。③MSP結(jié)果顯示EBVaGCs癌組織中BARF1基因啟動(dòng)子有31例為M型(31/43,72.1%),M+U型12例(12/43,27.9%); BHRF1基因啟動(dòng)子有36例呈M型(36/43,83.7%),M+U型7例(7/43,16.3%),表明2種早期基因的啟動(dòng)子均呈高甲基化狀態(tài)。④MSP和BGS檢測(cè)結(jié)果均顯示EBV陽(yáng)性細(xì)胞系B95-8,GT38和GT39在5-Aza-CdR處理后BARF1和BHRF1基因啟動(dòng)子甲基化程度降低。⑤去甲基化試劑5-Aza-CdR處理B95-8, Raji, GT38和GT39細(xì)胞系可使EBV早期基因基因BARF1和BHRF1的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平升高,其中BARF1基因在B95-8, Raji, GT38和GT39細(xì)胞系處理后表達(dá)水平分別為處理前的2.13,6.50,73.53和2.50倍,BHRF1基因在B95-8, Raji, GT38和GT39細(xì)胞系處理后表達(dá)水平分別為處理前的3.39,2.46,6.45和16.67倍。 結(jié)論①BHRF1基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)與其啟動(dòng)子甲基化程度密切相關(guān),而B(niǎo)ARF1基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)可能部分受其啟動(dòng)子甲基化的調(diào)控,因此甲基化是調(diào)控EBV主要早期基因啟動(dòng)子活動(dòng)的重要機(jī)制之一。②EBV早期基因BARF1和BHRF1的甲基化狀態(tài)和轉(zhuǎn)錄表達(dá)有一定關(guān)聯(lián)性,表現(xiàn)為不同類型EBV陽(yáng)性細(xì)胞系BARF1基因啟動(dòng)子Ap和BHRF1基因啟動(dòng)子Hp甲基化程度和轉(zhuǎn)錄表達(dá)有所不同；而在同一種細(xì)胞系,Ap和Hp甲基化程度以及BARF1和BHRF1基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平相似。③BVaGC組織中BARF1和BHRF1基因啟動(dòng)子呈高甲基化狀態(tài),推測(cè)甲基化可調(diào)控EBVaGC組織中兩種基因的表達(dá),使EBV處于潛伏期狀態(tài),進(jìn)而逃避宿主的免疫監(jiān)視,維持病毒的持續(xù)感染狀態(tài),在EBVaGC的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮一定作用。
【關(guān)鍵詞】：EB病毒 胃癌 甲基化 啟動(dòng)子
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R373
【目錄】：

• 中文摘要2-4
• Abstract4-7
• 引言7-9
• 第一章 材料與方法9-19
• 1.1 主要儀器、試劑和耗材9-10
• 1.2 EBV陽(yáng)性細(xì)胞系及胃癌組織標(biāo)本10-11
• 1.3 細(xì)胞培養(yǎng)及藥物處理11
• 1.4 DNA的提取與修飾11-14
• 1.5 RNA的提取與處理14-16
• 1.6 BARF1和BHRF1基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)檢測(cè)16-18
• 1.7 Real-time qPCR檢測(cè)基因mRNA18
• 1.8 統(tǒng)計(jì)方法18-19
• 第二章 結(jié)果19-32
• 2.1 BARF1基因啟動(dòng)子Ap甲基化狀態(tài)的檢測(cè)結(jié)果19-24
• 2.2 BHRF1基因啟動(dòng)子Hp甲基化狀態(tài)的檢測(cè)結(jié)果24-29
• 2.3 Real-time qPCR檢測(cè)細(xì)胞系藥物作用前后基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)29-32
• 第三章 討論32-38
• 3.1 EBV早期基因BARF1啟動(dòng)子Ap的甲基化33-35
• 3.2 EBV早期基因BHRF1啟動(dòng)子Hp的甲基化35-36
• 3.3 EBV相關(guān)腫瘤中病毒主要早期基因甲基化對(duì)EBV陽(yáng)性腫瘤治療的影響36-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 綜述43-61
• 綜述參考文獻(xiàn)52-61
• 攻讀學(xué)位期間研究成果61-62
• 致謝62-63

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 宋立兵,曾木圣,張玲,李滿枝,廖雯婷,鄭美蓮,汪慧民,曾益新;EB病毒編碼的BARF_1基因在人上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中的作用[J];癌癥;2004年S1期

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  本文關(guān)鍵詞：EB病毒早期基因BARF1和BHRF1啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)與表達(dá)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：301923