本文關(guān)鍵詞：環(huán)境pH值對耐藥鮑曼不動桿菌藥物敏感性的影響及機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：鮑曼不動桿菌（Acinetobacter baumanni，Ab）是醫(yī)院感染的重要病原菌，主要引起醫(yī)院獲得性肺炎，尤其以重癥監(jiān)護病房（ICU）發(fā)病率最高。近年來，隨著抗菌藥物上市時間的延長和臨床應用的不斷推廣，鮑曼不動桿菌對常用抗菌藥物的耐藥性不斷增加。碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌（Carbapenem-resistant Acinetobacterbaumanni，CRAB）的出現(xiàn)，被認為是二十一世紀耐藥領(lǐng)域的“哨兵事件”，其臨床檢出率逐年增多。然而，細菌耐藥的增長速度遠遠超過新的抗菌藥物的研發(fā)速度。CRAB常表現(xiàn)出泛耐藥的臨床特征，抗感染方案可選擇的抗菌藥物十分有限，臨床療效并不滿意，從而極大地延長了患者的住院時間，增加了患者的歸因死亡率。那么，在可選擇抗菌藥物匱乏的背景下，非抗菌藥物治療能否作為輔助治療措施而提高臨床療效呢？研究表明，健康人體的支氣管/肺泡灌洗液為弱堿性，當肺部感染時則轉(zhuǎn)為酸性。其次，環(huán)境pH值變化對一些細菌的生物活性具有一定的影響。那么，環(huán)境pH改變會導致CRAB生物學活性發(fā)生怎樣的變化？目前尚無研究報道。本課題完成了以下研究工作： 1、分析某綜合性醫(yī)院ICU鮑曼不動桿菌的分布規(guī)律及耐藥性變遷 目的：分析西京醫(yī)院近3年來所有專科ICU患者各類感染標本中鮑曼不動桿菌的分布及對抗菌藥物的耐藥情況，為指導臨床合理制定抗感染方案、增高療效提供理論依據(jù)。 方法：對2010年1月～2012年12月西京醫(yī)院所有�？艻CU患者各類感染性標本分離的病原菌資料進行回顧性分析。 結(jié)果：4633株病原株中鮑曼不動桿菌1054株，2010～2012年其所占比例分別為20.57%、21.26%及25.94%。在標本中的分布以痰液為主，占所有感染性標本的80%以上。在藥敏結(jié)果中，鮑曼不動桿菌耐藥性最低的是多粘菌素B，其次為米諾環(huán)素和頭孢哌酮/舒巴坦；對其他抗菌藥物耐藥率均在60%以上，其中對亞胺培南和美羅培南耐藥率呈現(xiàn)逐年上升趨勢。 結(jié)論：鮑曼不動桿菌主要引起呼吸道感染，其對大部分臨床常用抗菌藥物耐藥嚴重，治療上應根據(jù)藥敏結(jié)果選擇敏感的抗菌藥物，并加強抗菌藥物的合理使用。 2、環(huán)境pH值對碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌體外增殖活性的影響 目的：了解環(huán)境pH對CRAB體外增殖活性的影響，為臨床有效治療CRAB提供參考。 方法：收集臨床痰液標本中分離出CRAB42株，分別用pH值為6.9、7.4和7.9的MH肉湯配制成5×105cfu/mL的菌液。將上述菌液分別加到滅菌的96孔平板中，每孔200μl。置于35℃溫箱中過夜培養(yǎng)20h，用酶標儀于630nm處測定每孔的OD值。 結(jié)果：3種不同pH值的菌液培養(yǎng)20h，用酶標儀所測OD均值分別為pH6.9組0.555±0.200、pH7.4組0.523±0.187、pH7.9組0.512±0.174。以pH6.9組作為對照，pH7.4及7.9組OD均值下降具有統(tǒng)計學意義，P0.05。 結(jié)論：環(huán)境pH值對CRAB的體外增殖活性有影響，與pH值為6.9的偏酸性環(huán)境相比，pH值為7.4、7.9的堿性環(huán)境抑制了CRAB的體外增殖活性。 3、環(huán)境pH值對頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)合米諾環(huán)素體外抗碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌敏感性的影響 目的：了解pH值對頭孢哌酮/舒巴坦（2:1, CSF）聯(lián)合米諾環(huán)素（MNO）在體外抗CRAB藥物敏感性的影響。 方法:42株CRAB及pH值為6.9、7.4和7.9的MH肉湯同實驗2。采用棋盤法設計，微量肉湯稀釋法測定在3種不同pH值MH肉湯中，不同濃度頭孢哌酮/舒巴坦、米諾環(huán)素及兩者聯(lián)合對42株CRAB的最低抑菌濃度（MIC），并計算部分抑菌濃度（FIC）指數(shù)。 結(jié)果：在pH值由6.9升高到7.4及7.9時，兩藥單用，CSF的MICG值逐漸降低（各組P0.05），而MNO的MICG值則逐漸升高（各組P0.05）；兩藥聯(lián)用，F(xiàn)IC指數(shù)≤1的百分比分別是23.81%、11.90%、28.59%，1FIC指數(shù)≤2的百分比分別是73.81%、88.10%、71.43%。 結(jié)論：在pH值7.9的堿性環(huán)境中，單用CSF或與MNO聯(lián)用的抗菌活性均增強。兩藥聯(lián)用對CRAB主要表現(xiàn)為無相關(guān)作用。 4、探討碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌耐藥的分子機制及環(huán)境pH值對其耐藥基因表達水平的影響 目的：了解西京醫(yī)院CRAB常見耐藥基因碳青霉烯酶OXA-23、OXA-51及外排泵系統(tǒng)adeB、外膜蛋白carO的攜帶情況，，探討pH值對外排泵adeB及外膜蛋白carO基因表達量的影響。 方法：普通PCR法檢測42株CRAB碳青霉烯酶OXA-23、OXA-51及外排泵系統(tǒng)adeB、外膜蛋白carO，并進行分析及測序；選取同時攜帶有adeB、carO基因的CRAB10株及4株臨床Ab敏感株、1株標準株（ATCC BAA-747），用pH值分別為6.9、7.4、7.9的MH肉湯過夜培養(yǎng)20-24h，實時熒光定量PCR測定其adeB、carO基因的Ct值，用2-CT法計算各目的基因的相對表達量。 結(jié)果:42株CRAB carO基因檢測發(fā)現(xiàn)40株陽性，陽性率為95.2%，adeB、OXA-23、OXA-51基因檢測陽性率均為100%。以標準株BAA-747作為對照，10株CRAB與4株臨床敏感株adeB基因相對表達量分別為：37.34±41.89、1.55±1.77；carO基因相對表達量分別為：0.38±0.34、4.80±3.87。與敏感株相比，CRAB adeB基因表達量增加，carO基因表達量下降，并且均具有統(tǒng)計學意義，P0.05。不同pH值組間比較，以pH值7.4組作為對照，pH值6.9組與pH7.9組adeB基因相對表達量為：1.20±3.23、1.26±0.97；carO基因相對表達量為：1.07±1.18、1.26±1.02。兩組之間無統(tǒng)計學意義（P0.05）。 結(jié)論：產(chǎn)OXA-23、OXA-51型碳青霉烯酶以及外排泵adeB的過度表達、外膜蛋白carO表達的下降在本院大多數(shù)CRAB中同時存在，這種多種耐藥機制共存的現(xiàn)象是西京醫(yī)院下呼吸道感染CRAB廣泛耐藥的重要原因。環(huán)境pH值在6.9、7.4、7.9時，對CRAB adeB、carO基因水平的表達無明顯影響。 上述研究結(jié)果表明，環(huán)境pH值對CRAB的體外增殖活性及藥物敏感性均有影響。與pH值為6.9的酸性環(huán)境相比，pH值為7.4、7.9的堿性環(huán)境抑制了CRAB的增殖活性。在pH值7.9的堿性環(huán)境中，單用CSF或與MNO聯(lián)用的抗菌活性均增強。環(huán)境pH值在6.9、7.4、7.9時，對CRAB adeB、carO基因水平的表達無明顯影響。
【關(guān)鍵詞】：鮑曼不動桿菌 碳青霉烯類 pH值 外排泵系統(tǒng) 外膜蛋白
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R378
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-11
• Abstract11-17
• 前言17-19
• 文獻回顧19-25
• 第一部分 ICU 鮑曼不動桿菌的分布規(guī)律及耐藥性變遷25-32
• 1 材料25-26
• 2 方法26-27
• 3 結(jié)果27-29
• 4 討論29-32
• 第二部分 pH 值對碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌體外增殖活性的影響32-37
• 1 材料32-33
• 2 方法33-34
• 3 結(jié)果34-35
• 4 討論35-37
• 第三部分 pH 值對頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)合米諾環(huán)素體外抗碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌敏感性的影響37-45
• 1 材料37-38
• 2 方法38-41
• 3 結(jié)果41-43
• 4 討論43-45
• 第四部分 碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌耐藥基因的檢測及 pH 值對耐藥基因表達 的影響45-67
• 1 材料45-48
• 2 方法48-54
• 3 結(jié)果54-64
• 4 討論64-67
• 小結(jié)67-68
• 參考文獻68-74
• 個人簡歷和研究成果74-75
• 致謝75

【參考文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：環(huán)境pH值對耐藥鮑曼不動桿菌藥物敏感性的影響及機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：301667