目的：HERV可能會導致精神分裂癥的發(fā)生發(fā)展。在本研究中,運用分子生物學和電生理的方法,我們將探討HERV-W env基因在精神分裂癥發(fā)病機制中的作用。方法：熒光顯微鏡觀察ENV蛋白在人神經母細胞瘤細胞系SH-SY5Y中的細胞定位。在人神經母細胞瘤細胞系SH-SY5Y和IMR32中過表達env基因,運用半定量RT-PCR和Real-time PCR檢測小電導鈣激活鉀通道超家族N成員3（small conductance calcium-activated channel, subfamily N, member3, KCNN3）和S100鈣結合蛋白B （S100calcium-binding protein B, S100B） mRNA表達水平；運用Western-blot檢測KCNN3基因蛋白表達水平：使用螢光素酶系統(tǒng)檢測目的基因啟動子活性；通過基因干擾實驗分別下調cAMP反應原件結合蛋白（cAMP-response element-binding protein, CREB）的表達,以證明CREB在env激活基因表達中的作用；運用全細胞膜片鉗技術記錄KCNN3通道電流；鈣離子結合染... 

【文章來源】：武漢大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

進化樹分析丨丨ERV-W的分類與分布

Fig 1.3 Schematic drawing of the HERV-W ENV glycoprotein (Mallet F，Proc Natl Acad SciA. 2004 Feb 10;101(6):1731-6.)胞外段蛋白（surface protein. SU );跨膜段蛋白（transmembprotein，TM )；融合肽段（fusion peptide, fp )；免疫抑制區(qū)域（immunosuppressive region，�；缒^(qū)域（carboxy-transmembrane region, TR )HERV-W屬于Y逆轉錄病毒家族，分布于人類基因組的多條染色體根據其序列的相似程度可以分為三個亞家族，其中定位于7號染色HERV-Wenv基因（圖1.2)能夠編碼完整的胞膜糖蛋白又稱為合胞素�；蜻M化相對保守，能夠介導逆轉錄病毒的細胞內融合以及促使許多細胞內胎盤合胞體滋養(yǎng)層細胞的融合[15]。在所有的HERV屮，ENV白的前體在簾主細胞的蛋白酶的作用下可以剪切成胞外段（surface uSU )和跨膜段（trans-membrane, TM )兩個業(yè)基（圖1.3) [16],這兩'基隨后定位于宿主細胞表面特異性受體結合位點形成異二聚體。很多錄病毒的env糖蛋白的TM段都其有一個保守的免疫抑制結(immunosuppressive region, ir)(圖1.3)。ir與選擇性宿主免疫抑制相胎盤表達的HERV-W env-TM亞基可能在人的母嬰W障的免疫調節(jié)中

媽離子在細胞的聯系中起著中心的地位[82]，調控著很多通路及途徑的活化過程（圖2.1)。它與許多神經退行性疾病都具有相關性，如精神分裂癥，癲癇癥和阿爾茨海默病等183-85]。早期的研究已經證實在精神分裂癥病人的腦脊液中有升高的韓離子水平[86-88]。而在紋狀體神經元細胞，媽離了?內流導致激活蛋白激酶 C (protein kinase C, PKC),導致細胞外調節(jié)蛋白激酶（extracellular regulatedprotein kinases, ERK)通路的活化引起CREB的憐酸化入核等事件的發(fā)生[89]。而本實驗前期實驗證實，HERV-Wenv也能夠引起CREB憐酸化入核增加，進而導致下游一些與精神分裂癥相關的基因如BDNF和多巴胺D3受體(dopamine D3receptor, DRD3)的表達上調[1 ]。 .. -,?-嫩-.?. .、 ptwww 、、Membrane JAK、 j ''[ *, \ II ■ T \ PKC hI\ I \ 八響 /、、、 CTAT * MEK /\ STAT? i ' ,\ ,；■。■: -- J. 丨 y'、、 ； /Nucleas—V. /...C-fos niRIsA圖2.1料離子調控相關途徑Fig 2.1 Diagram showing calcium mediated pathwayN-甲基 D-門冬氨酸受體（N-methyl D-aspartate receptor，NMDAR )；辟脂酶 C ( phospho丨ipaseC, PLC); 4丐離子/4*5調素依賴性蛋白激酶（calcium/calmodulin dependent protein kinases，CaMK )； cAMP 依賴蛋白激醉 A ( protein kinase A，PKA )；蛋白激梅 C ( protein kinase C


本文編號：3018038