目的：HERV可能會(huì)導(dǎo)致精神分裂癥的發(fā)生發(fā)展。在本研究中,運(yùn)用分子生物學(xué)和電生理的方法,我們將探討HERV-W env基因在精神分裂癥發(fā)病機(jī)制中的作用。方法：熒光顯微鏡觀察ENV蛋白在人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系SH-SY5Y中的細(xì)胞定位。在人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系SH-SY5Y和IMR32中過表達(dá)env基因,運(yùn)用半定量RT-PCR和Real-time PCR檢測小電導(dǎo)鈣激活鉀通道超家族N成員3（small conductance calcium-activated channel, subfamily N, member3, KCNN3）和S100鈣結(jié)合蛋白B （S100calcium-binding protein B, S100B） mRNA表達(dá)水平；運(yùn)用Western-blot檢測KCNN3基因蛋白表達(dá)水平：使用螢光素酶系統(tǒng)檢測目的基因啟動(dòng)子活性；通過基因干擾實(shí)驗(yàn)分別下調(diào)cAMP反應(yīng)原件結(jié)合蛋白（cAMP-response element-binding protein, CREB）的表達(dá),以證明CREB在env激活基因表達(dá)中的作用；運(yùn)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄KCNN3通道電流；鈣離子結(jié)合染... 

【文章來源】：武漢大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：120 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

進(jìn)化樹分析丨丨ERV-W的分類與分布

Fig 1.3 Schematic drawing of the HERV-W ENV glycoprotein (Mallet F，Proc Natl Acad SciA. 2004 Feb 10;101(6):1731-6.)胞外段蛋白（surface protein. SU );跨膜段蛋白（transmembprotein，TM )；融合肽段（fusion peptide, fp )；免疫抑制區(qū)域（immunosuppressive region，�；缒^(qū)域（carboxy-transmembrane region, TR )HERV-W屬于Y逆轉(zhuǎn)錄病毒家族，分布于人類基因組的多條染色體根據(jù)其序列的相似程度可以分為三個(gè)亞家族，其中定位于7號(hào)染色HERV-Wenv基因（圖1.2)能夠編碼完整的胞膜糖蛋白又稱為合胞素�；蜻M(jìn)化相對(duì)保守，能夠介導(dǎo)逆轉(zhuǎn)錄病毒的細(xì)胞內(nèi)融合以及促使許多細(xì)胞內(nèi)胎盤合胞體滋養(yǎng)層細(xì)胞的融合[15]。在所有的HERV屮，ENV白的前體在簾主細(xì)胞的蛋白酶的作用下可以剪切成胞外段（surface uSU )和跨膜段（trans-membrane, TM )兩個(gè)業(yè)基（圖1.3) [16],這兩'基隨后定位于宿主細(xì)胞表面特異性受體結(jié)合位點(diǎn)形成異二聚體。很多錄病毒的env糖蛋白的TM段都其有一個(gè)保守的免疫抑制結(jié)(immunosuppressive region, ir)(圖1.3)。ir與選擇性宿主免疫抑制相胎盤表達(dá)的HERV-W env-TM亞基可能在人的母嬰W障的免疫調(diào)節(jié)中

媽離子在細(xì)胞的聯(lián)系中起著中心的地位[82]，調(diào)控著很多通路及途徑的活化過程（圖2.1)。它與許多神經(jīng)退行性疾病都具有相關(guān)性，如精神分裂癥，癲癇癥和阿爾茨海默病等183-85]。早期的研究已經(jīng)證實(shí)在精神分裂癥病人的腦脊液中有升高的韓離子水平[86-88]。而在紋狀體神經(jīng)元細(xì)胞，媽離了?內(nèi)流導(dǎo)致激活蛋白激酶 C (protein kinase C, PKC),導(dǎo)致細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（extracellular regulatedprotein kinases, ERK)通路的活化引起CREB的憐酸化入核等事件的發(fā)生[89]。而本實(shí)驗(yàn)前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)，HERV-Wenv也能夠引起CREB憐酸化入核增加，進(jìn)而導(dǎo)致下游一些與精神分裂癥相關(guān)的基因如BDNF和多巴胺D3受體(dopamine D3receptor, DRD3)的表達(dá)上調(diào)[1 ]。 .. -,?-嫩-.?. .、 ptwww 、、Membrane JAK、 j ''[ *, \ II ■ T \ PKC hI\ I \ 八響 /、、、 CTAT * MEK /\ STAT? i ' ,\ ,；■。■: -- J. 丨 y'、、 ； /Nucleas—V. /...C-fos niRIsA圖2.1料離子調(diào)控相關(guān)途徑Fig 2.1 Diagram showing calcium mediated pathwayN-甲基 D-門冬氨酸受體（N-methyl D-aspartate receptor，NMDAR )；辟脂酶 C ( phospho丨ipaseC, PLC); 4丐離子/4*5調(diào)素依賴性蛋白激酶（calcium/calmodulin dependent protein kinases，CaMK )； cAMP 依賴蛋白激醉 A ( protein kinase A，PKA )；蛋白激梅 C ( protein kinase C


本文編號(hào)：3018038