隨著人類基因組計(jì)劃的順利完成，解讀基因編碼并研究相關(guān)基因的功能正成為各國(guó)科學(xué)家主要的研究方向。目前，在基因功能的研究方面主要包括：基因生物信息學(xué)分析、基因表達(dá)圖譜建立、酵母雙雜交系統(tǒng)的應(yīng)用、基因轉(zhuǎn)染技術(shù)、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和基因剔除技術(shù)以及新近發(fā)展的RNA干涉技術(shù)等。MAGE-H1／Apr-1與APMCF1分別是在凋亡的人白血病細(xì)胞系HL-60和人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7中發(fā)現(xiàn)的人類未知功能基因，在本研究工作中，我們克隆了這兩個(gè)基因并對(duì)其結(jié)構(gòu)與功能進(jìn)行了初步的研究和分析。 一．MAGE-H1／Apr-1結(jié)構(gòu)與功能的初步研究 提取了維甲酸誘導(dǎo)凋亡后的HL-60細(xì)胞的總RNA，根據(jù)MAGE-H1／Apr-1的cDNA序列設(shè)計(jì)引物，運(yùn)用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增出MAGE-H1／Apr-1的開放讀框序列并測(cè)序。隨后，利用生物信息學(xué)方法分析了MAGE-H1／Apr-1的蛋白質(zhì)序列的保守結(jié)構(gòu)域，發(fā)現(xiàn)它共有兩個(gè)MAGE家族結(jié)構(gòu)域，與MAGE家族的A1、B1、C1、D1和Necdin存在較高同源性；在基因進(jìn)化上，其結(jié)構(gòu)更加近似于MAGE-D1和Necdin，可能是Ⅱ類MAGE家族基因的一個(gè)成員。進(jìn)一步在... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：103 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

MAGE一HI與其它MAGE家族成員蛋白編碼序列的排列比較

與其它種屬sRp蛋白編碼序列的排列比較.深灰色的背景致的氨基酸。灰色區(qū)域代表不同成員之間序列的保守區(qū)域encealignmentof砂MCFIwththeProteinfromotherSPeeshowsidentitywithatIeasefivealignedresiduesindifferenrePresentsthesequeneeeonservedamongdifferentsPeeies.讀框序列的克隆及測(cè)序APMcFI開放讀框序列為847bP，1.2%瓊脂果與預(yù)測(cè)的的APMCF編碼序列完全一致.FI重組融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定1BamHx和Sall雙酶切后可見816bp片融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)與純化MCFI重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的大腸桿菌DH5a檢測(cè)可見幾介為56000的GST-APMCFI0)，表達(dá)的目的蛋白主要位于包涵體沉淀后，以GST瓊脂糖親和層析純化目的蛋白，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]改良消減雜交法克隆人乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡相關(guān)基因[J]. 晏偉,李青,朱峰,岳文,柴玉波,王成濟(jì),路凡,趙忠良.  中華腫瘤雜志. 2001(03)
[2]人X染色體含有一個(gè)黑色素瘤抗原基因亞家族[J]. 張成崗,邢桂春,魏漢東,魚詠濤,賀福初.  遺傳學(xué)報(bào). 2001(03)
[3]克隆MCF-7細(xì)胞凋亡差異表達(dá)基因的一種方法[J]. 晏偉,朱峰,趙忠良,柴玉波,岳文,邵晨,路凡,李青,王成濟(jì).  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2001(01)



本文編號(hào)：3002979