隨著人類基因組計劃的順利完成，解讀基因編碼并研究相關基因的功能正成為各國科學家主要的研究方向。目前，在基因功能的研究方面主要包括：基因生物信息學分析、基因表達圖譜建立、酵母雙雜交系統(tǒng)的應用、基因轉染技術、轉基因動物和基因剔除技術以及新近發(fā)展的RNA干涉技術等。MAGE-H1／Apr-1與APMCF1分別是在凋亡的人白血病細胞系HL-60和人乳腺癌細胞系MCF-7中發(fā)現的人類未知功能基因，在本研究工作中，我們克隆了這兩個基因并對其結構與功能進行了初步的研究和分析。 一．MAGE-H1／Apr-1結構與功能的初步研究 提取了維甲酸誘導凋亡后的HL-60細胞的總RNA，根據MAGE-H1／Apr-1的cDNA序列設計引物，運用RT-PCR技術擴增出MAGE-H1／Apr-1的開放讀框序列并測序。隨后，利用生物信息學方法分析了MAGE-H1／Apr-1的蛋白質序列的保守結構域，發(fā)現它共有兩個MAGE家族結構域，與MAGE家族的A1、B1、C1、D1和Necdin存在較高同源性；在基因進化上，其結構更加近似于MAGE-D1和Necdin，可能是Ⅱ類MAGE家族基因的一個成員。進一步在... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學陜西省 211工程院校

【文章頁數】：103 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

MAGE一HI與其它MAGE家族成員蛋白編碼序列的排列比較

與其它種屬sRp蛋白編碼序列的排列比較.深灰色的背景致的氨基酸。灰色區(qū)域代表不同成員之間序列的保守區(qū)域encealignmentof砂MCFIwththeProteinfromotherSPeeshowsidentitywithatIeasefivealignedresiduesindifferenrePresentsthesequeneeeonservedamongdifferentsPeeies.讀框序列的克隆及測序APMcFI開放讀框序列為847bP，1.2%瓊脂果與預測的的APMCF編碼序列完全一致.FI重組融合蛋白表達質粒的構建與鑒定1BamHx和Sall雙酶切后可見816bp片融合蛋白的誘導表達與純化MCFI重組表達載體轉化的大腸桿菌DH5a檢測可見幾介為56000的GST-APMCFI0)，表達的目的蛋白主要位于包涵體沉淀后，以GST瓊脂糖親和層析純化目的蛋白，

【參考文獻】：
期刊論文
[1]改良消減雜交法克隆人乳腺癌MCF-7細胞凋亡相關基因[J]. 晏偉,李青,朱峰,岳文,柴玉波,王成濟,路凡,趙忠良.  中華腫瘤雜志. 2001(03)
[2]人X染色體含有一個黑色素瘤抗原基因亞家族[J]. 張成崗,邢桂春,魏漢東,魚詠濤,賀福初.  遺傳學報. 2001(03)
[3]克隆MCF-7細胞凋亡差異表達基因的一種方法[J]. 晏偉,朱峰,趙忠良,柴玉波,岳文,邵晨,路凡,李青,王成濟.  細胞與分子免疫學雜志. 2001(01)



本文編號：3002979